大鼠牙龈组织表达护骨因子和护骨因子配体

目的 观察成年大鼠牙龈组织是否表达护骨因子 (Osteoprotegerin ,OPG )和护骨因子配体(OsteoprotegerinLigand ,OPGL) ,为进一步探讨二者在牙龈组织中表达的生理及病理意义奠定基础。 方法 提取成年大鼠牙龈组织总RNA ,应用特异引物通过逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)扩增目的片段 ,并将其插入pGEM -T载体 ,测序鉴定。结果 测序表明扩增出的二个目的片段DNA序列与文献报道一致 ,即为护骨因子和护骨因子配体。护骨因子在大鼠牙龈组织表达水平较高 ,而护骨因子配体表达水平较低。结论 大鼠牙龈组织表达护骨因子和护骨因子配体 。

补肾通督胶囊对肾虚寒凝型RA患者OPG/RANKL/RANK系统及骨代谢的影响

目的观察补肾通督胶囊对肾虚寒凝型类风湿性关节炎患者OPG/RANKL/RANK系统及骨代谢的影响。方法入选类风湿性关节炎患者随机双盲分为治疗组(36例)和对照组(35例),治疗组口服补肾通督胶囊,对照组口服雷公藤多甙片,均服药12周,于治疗前后采用DTX-200型骨密度仪检测受试者非优势侧前臂桡尺骨远端三分之一处BMD及采用酶联免疫吸附法(ELISA)观察血清OPG、RANKL、M-CSF、PINP、BGP、BAP。结果补肾通督胶囊可以使RA患者血清OPG、BGP显著升高(P<0.01),RANKL、M-CSF、PINP、BAP显著降低(P<0.01);与对照组相比,治疗组OPG、RANKL变化水平更为明显(P<0.05)及PINP、BAP、BGP变化水平更加显著(P<0.01)。在BMD方面治疗组与治疗前比较无明显差异(P>0.05),对照组与治疗前相比显著降低(P<0.01),但两组间比较无明显差异(P>0.05)。结论补肾通督胶囊对肾虚寒凝型RA患者OPG/RANKL/RANK系统的调节及骨代谢具有良好的调节作用。

重度烧伤患者早期血清护骨因子/核因子κB受体激活蛋白配体和钙磷相关指标的变化

目的了解重度烧伤患者早期血清护骨因子/核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和钙磷相关指标的变化。方法将2017年6月-2018年12月武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院收治的符合入选标准的30例伤后8 h内入院的重度烧伤患者纳入重度烧伤组[男24例、女6例,年龄(38±13)岁],同期招募该单位体检中心体检结果正常的10名健康志愿者纳入健康对照组[男7名、女3名,年龄(37±8)岁],进行前瞻性对照研究。重度烧伤组患者于伤后1、7、14、21、28 d各抽取5 mL空腹静脉血,健康对照组志愿者取5 mL空腹静脉血,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中护骨因子、RANKL、25羟维生素D及甲状旁腺激素(PTH)水平并计算RANKL/护骨因子比值,分别采用溴甲酚绿法、甲基百里酚蓝比色法和磷钼酸法测定血清白蛋白、血钙和血磷水平。对数据行Fisher确切概率法检验、重复测量方差分析、独立样本t检验、Mann-Whitney U检验以及Bonferroni校正。结果(1)重度烧伤组患者伤后1、7、14、21、28 d血清护骨因子水平分别为155.11(102.91,187.02)、170.07(84.60,196.86)、174.95(59.09,208.35)、190.01(47.08,214.52)、188.85(58.73,223.13)pg/mL,均明显高于健康对照组志愿者的33.34(28.59,45.68)pg/mL,Z=-3.436、-4.311、-3.248、-2.811、-4.217,P<0.01;血清RANKL水平分别为(1869±791)、(1746±857)、(1781±713)、(2015±825)、(2272±583)pg/mL,均明显高于健康对照组志愿者的(49±16)pg/mL,t=12.600、10.844、13.294、13.041、20.880,P<0.01;RANKL/护骨因子比值分别为12.23(8.10,24.73)、11.40(8.25,16.96)、11.15(6.91,38.32)、12.98(9.22,49.68)、13.91(10.29,40.68),均明显高于健康对照组志愿者的1.17(0.91,1.74),Z=-4.560、-4.529、-4.529、-4.560、-4.623,P<0.01。(2)重度烧伤组患者伤后1 d血清25羟维生素D水平明显低于健康对照组志愿者(Z=-2.749,P<0.01)。与健康对照组志愿者比较,重度烧伤组患者伤后1、7、14、21、28 d血清白蛋白水平明显降低(t=-4.374、-7.689、-8.257、-7.651、-6.259,P<0.01),血清PTH水平明显升高(Z=-4.685、-4.685、-4.685、-4.654,-4.685,P<0.01),血磷水平无明显变化。重度烧伤组患者伤后1、7、14、21 d血钙水平明显低于健康对照组志愿者(Z=-2.375、-3.455、-2.442、-2.016,P<0.05或P<0.01)。结论重度烧伤患者早期血清护骨因子、RANKL、RANKL/护骨因子比值、PTH升高,25羟维生素D、白蛋白及血钙下降,这可能是导致患者骨质流失的机制。

附子白术汤通过调节OPG/RANKL保护乳腺癌骨转移裸鼠骨损伤的研究

目的:从调节护骨素(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)系统探讨附子白术汤抑制乳腺癌骨转移骨损伤的机制。方法:采用左心室注射人乳腺癌骨转移细胞株(MDA-MB-231BO)细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型;随机分为模型组、唑来膦酸组、附子白术汤组、附子-白术药对组,另备正常裸鼠正常组(n=6)。造模后第4天开始药物干预:唑来膦酸组sc唑来膦酸0.2 mg.kg-1;模型组、附子白术汤组、附子-白术药对组、正常组,分别ig给予生理盐水20 mL.kg-1、附子白术汤5.6 g.kg-1、附子-白术药对煎液2.4 g.kg-1、生理盐水20 mL.kg-1;每周3次,持续6周。观察各组裸鼠体重、骨转移灶病理和OPG,RANKLmRNA表达变化。结果:①与模型组比较,附子-白术药对组与附子白术汤组骨转移个数、骨转移率及体重下降率均明显下降(P<0.05),骨转移灶中TRAP(+)细胞数量均减少(P<0.01),OPG mRNA表达含量上调(P<0.01),RANKLmRNA表达含量及二者比值降低(P<0.01);②与附子白术汤组比较,附子-白术药对组骨转移个数、骨转移率、体重下降率、骨转移灶中TRAP细胞数量,OPG mRNA,RANKL mRNA表达含量及其比值均无统计学差异。结论:附子白术汤和附子-白术药对均可通过调节OPG/RANKL系统,减少破骨细胞的数量并抑制其活性,从而减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤;附子-白术药对与附子白术汤功效相近,可能是附子白术汤的核心药物。

六味地黄方含药血清对H_(2)O_(2)诱导的氧化损伤MC3T3-E1细胞Runx2、OPG/RANKL的干预作用及其机制探讨

目的观察六味地黄方含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)Runt相关转录因子2(Runx2)及护骨素/核因子-κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)的干预作用,并从抗氧化角度初步探讨其作用机制。方法制作六味地黄方汤剂,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄方含药血清。除正常组外,其余各组先用1.0 mmol/L H_(2)O_(2)预处理MC3T3-E1细胞6 h,随后模型组更换正常培养基,N-乙酰半胱氨酸(NAC)组更换含有2.5 mmol/L NAC的培养基,六味地黄方含药血清组更换含有10%药物血清的培养基,各组均处理24 h。采用DCFH-DA荧光探针检测MC3T3-E1细胞内活性氧(ROS)水平。根据试剂盒说明书检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(GSH)。采用Western blot法检测Runx2、OPG、RANKL、肿瘤抑制蛋白P53及磷酸化状态的P53蛋白(p-P53)表达。结果与正常组比较,模型组ROS明显升高(P<0.05),同时CAT、SOD、GSH-PX、GSH均明显降低(P<0.05);在蛋白表达方面,与正常组相比,模型组Runx2、OPG蛋白表达均明显降低(P<0.05),RANKL蛋白表达明显升高(P<0.05),同时p-P53/P53也有明显升高(P<0.05)。与模型组相比,六味地黄方含药血清组GSH明显升高(P<0.05),ROS水平明显下降(P<0.05)。在蛋白表达方面,与模型组比较,六味地黄方含药血清组Runx2、OPG蛋白表达均明显升高(P<0.05),RANKL蛋白表达明显降低(P<0.05),同时p-P53/P53明显降低(P<0.05)。结论六味地黄方含药血清能促进H_(2)O_(2)致氧化损伤MC3T3-E1细胞内Runx2蛋白表达,升高OPG蛋白表达,降低RANKL蛋白表达,这可能与其升高GSH的含量、抑制P53蛋白的磷酸化,进而降低细胞内ROS水平有关。

基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

目的基于护骨因子(OPG)/NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)/NF-κB受体激活蛋白(RANK)信号通路探究桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠骨破坏与骨保护相关因子的影响。方法60只雌性Wistar大鼠按照体质量随机分为6组,正常组、模型组、雷公藤多苷组(0.01 g/kg)、桂枝芍药知母汤低剂量组(8.6 g/kg)、桂枝芍药知母汤中剂量组(17.2 g/kg)、桂枝芍药知母汤高剂量组(34.4 g/kg),每组10只。除正常组外,其他大鼠第1、8天使用牛Ⅱ型胶原蛋白(100μg)复制CIA模型,在大鼠左足足底和尾根部位注射。造模成功后灌胃给药4周。监测大鼠一般状态、体质量及关节炎指数(AI)评分,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中RANKL、OPG的含量,实时荧光PCR法与蛋白质印迹法分别测定踝关节中RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组一般状态欠佳,足趾肿胀明显,AI评分升高,血清RANKL含量升高、OPG含量降低,踝关节RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均升高(均P<0.05)。与模型组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组大鼠足趾肿胀程度与AI评分下降,血清RANKL含量降低、OPG含量升高,踝关节中RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均降低,OPG mRNA与蛋白表达均升高,踝关节RANKL/OPG值降低(均P<0.05)。结论桂枝芍药知母汤能够改善CIA模型大鼠关节的骨破坏情况,其作用机制可能与降低RANKL水平、降低RANKL/OPG值、调控骨平衡有关。

化脓性中耳炎骨质重塑的研究进展

鼓室硬化是中耳炎常见的炎性后遗症,鼓室硬化中耳鼓室局部组织发生炎症后,黏膜层毛细血管通透性增加,大量炎性因子深入到黏膜下层和骨质层,引起纤维素性渗出的同时,激活骨质细胞相关受体作用成骨细胞和破骨细胞产生活化或抑制,导致局部钙化及骨化,最终引起鼓室硬化。更加准确地了解鼓室损伤后的修复机理和调控机制是控制过度修复,防控鼓室硬化的关键。本文总结了骨组织代谢过程中的三个主要调控通路:骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及护骨素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)系统在中耳炎骨质重塑中的作用,为中耳炎鼓室硬化的早期防控提供新的治疗方向。

川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的研究川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法不同浓度的川续断总皂苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测成骨细胞增殖功能,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA。结果 20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的增殖(P<0.05或P<0.01);20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的分化(P<0.05或P<0.01);10、20、50μg/mL川续断总皂苷可显著上调成骨细胞中OPG/RANKL mRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P<0.01)。结论川续断总皂苷对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。

基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨清热利湿活血法对活动期类风湿关节炎骨代谢的影响及临床疗效观察

目的:基于护骨素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)信号通络探讨清热利湿活血法对活动期类风湿关节炎(RA)患者骨代谢的影响及临床疗效。方法:选取自2018年12月至2021年12月于我院风湿科就诊的120例活动期RA患者作为研究对象,随机分为对照组(60例,艾拉莫德片+碳酸钙D_(3)片)及治疗组(60例,清热利湿活血方药+艾拉莫德片+碳酸钙D_(3)片),疗程均为12周,观察治疗前后血清RANKL及OPG的含量、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、28个关节的疾病活动度评分(DAS28)-ESR、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸(CCP)抗体、骨钙素(BGP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)、β胶原特殊序列(β-CTx)及肝肾功能安全性指标。结果:治疗12周时,治疗组中医证候有效率明显高于对照组(P<0.05)。在降低ESR,CRP,DAS28-ESR,β-CTX,RANKL及升高OPG/RANKL比值方面,治疗组均明显优于对照组(P<0.05),在降低CCP,RF及升高PINP,BGP方面,两组无明显差异(P>0.05)。结论:清热利湿活血法可显著降低RA患者炎症指标和疾病活动度,疗效确切,且能够显著降低RA患者血清β-CTX,RANKL水平,升高OPG/RANKL比值,主要通过抑制RA患者的骨吸收来调节骨代谢。

严重烧伤大鼠骨形成与骨吸收相关指标的变化

目的研究严重烧伤大鼠骨形成及骨吸收相关指标的变化。方法采用实验研究方法。将30只6~8周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为假伤组、12%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组,每组10只。于各组大鼠背部进行相应处理,之后仅烧伤大鼠按Parkland公式经腹腔注射补液,创面外涂20 g/L碘伏,直至创面愈合。伤后28 d,取各组大鼠胫骨组织,分别行Masson、抗酒石酸酸性磷酸酶染色,观察新生骨组织、破骨细胞数量;取各组大鼠腹主动脉血制备血清,分别采用甲基百里酚蓝比色法、磷钼酸法测定骨代谢指标血清钙离子、磷离子浓度,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中骨形成标志物Ⅰ型前胶原氨基端前肽(P1NP)和骨吸收标志物β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-CTX)水平;取各组大鼠第1腰椎组织,采用实时荧光定量反转录PCR法检测护骨因子、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、活化T细胞核因子1(NFATC1)、c-Fos、c-Src的mRNA表达水平。数据处理采用单因素方差分析、Bonferroni法、Welch检验、Games-Howell检验、Kruskal-Wallis检验、Mann-Whitney U检验及Bonferroni校正。结果伤后28 d,与假伤组比较,2个烧伤组大鼠胫骨组织中新生骨组织生成均减少,烧伤面积越大减少越明显;2个烧伤组大鼠胫骨组织中破骨细胞数量相近,均较假伤组明显增多。伤后28 d,3组大鼠血清钙离子浓度、血清中β-CTX水平相近(P>0.05);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清磷离子浓度明显高于12%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.05),且2个烧伤组大鼠血清磷离子浓度均显著高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清中P1NP水平明显低于假伤组(P<0.01)。伤后28 d,假伤组、12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中护骨因子mRNA表达水平分别为1.01±0.20、1.71±0.83、2.24±0.51,其中24%TBSAⅢ度烧伤组明显高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中RANKL mRNA表达水平为1.31±0.17,明显高于假伤组的1.00±0.14与12%TBSAⅢ度烧伤组的0.97±0.10(P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中TRAF-6、NFATC1(Z=3.141、3.782)、c-Src mRNA表达水平及12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos mRNA表达水平均明显高于假伤组(P<0.05或P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos、c-Src mRNA表达水平均明显高于24%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.01)。结论严重烧伤可引起大鼠新生骨组织生成减少及破骨细胞数量增多,血清磷离子浓度升高与血清中P1NP水平下降,骨组织中护骨因子、RANKL、TRAF-6、NFATC1、c-Fos、c-Src呈升高趋势,且NFATC1、c-Fos、c-Src随烧伤总面积增加呈下降趋势。