大规模平行报告基因测定:一种分析基因表达调控的新技术

大规模平行报告基因测定(massively parallel reporter assay,MPRA)是一种可以同时研究基因组数千个调控元件活性的高通量分析方法。该方法在传统的荧光素酶报告基因载体上引入一段具有唯一标识的条形码,通过二代测序技术对转染前的DNA条形码和转染后的mRNA条形码进行测序,用mRNA和DNA条形码读数的比值来分析顺式调控元件的活性。自MPRA提出以来,已被广泛应用于基因组顺式调控元件和功能性变异的鉴定、转录后调控对表型的影响等方面的研究。本文对MPRA的发展历程、基本原理、实验流程、统计分析方法以及在顺式调控元件和转录后调控方面的应用进行了综述,并对其发展前景进行了展望,以期为相关领域研究人员了解与应用MPRA提供有益参考。

基于NFAT信号通路的抗LAG3抗体8F-6生物活性检测

淋巴细胞活化基因3(LAG3)在T细胞活化和增殖过程中起负调控作用,通过单克隆抗体封闭LAG3分子可以增强T细胞对肿瘤的杀伤力,因此开发抗LAG3抗体的生物活性检测平台对免疫治疗具有重要意义。前期利用杂交瘤融合及抗体人源化改造技术,得到了一株全人源化的抗LAG3单克隆抗体8F-6,并基于活化T细胞核因子(NFAT)信号通路构建了Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3和Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3-CD3zeta细胞。本文利用所构建的细胞,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)和流式细胞技术对抗体8F-6进行亲和力及阻断效果检测。结果表明,抗体8F-6与LAG3分子具有良好的亲和力,可以阻断主要组织相容性复合体II(MHC II)分子与LAG3分子的结合;在报告细胞检测平台中,抗体8F-6在CHO-K1-FCGRIA细胞的协助下可以激活Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3-CD3zeta细胞;在Daudi/Raji细胞、人金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)和Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3细胞的反应体系中,相比于对照抗体IgG1,抗体8F-6可以明显提高Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3细胞的激活效果。