报告抗原腘窝淋巴结试验评价注射用双黄连的致敏性

目的利用报告抗原腘窝淋巴结试验(reporter antigen popliteal lymph node assay,RA-PLNA)评价注射用双黄连(Shuanghuanglian for injection,SHLI)的致敏性,并探讨其发生机制。方法 SPF级7~8周雌性BALB/c小鼠,按体重随机分为生理盐水空白对照组(Veh)、D-盐酸青霉胺阳性对照组(D-pen,1 mg/只)、SHLI高剂量组(H,5 mg/只)和低剂量组(L,1 mg/只),共4组,6只/组。将受试物分别与TNP-OVA(10μg/只)混合,右侧足趾部皮下注射给予小鼠,终体积50μL/只。药后7天处死动物,摘取两侧腘窝淋巴结(popliteal lymph node,PLN),称重,计算重量指数(weight index,WI);制备单细胞悬液,计算细胞指数(cells index,CI),比较各组的RA-PLNA反应。ELISPOT检测PLN中的TNP特异性抗体分泌细胞(AFC)的数量和类型,流式细胞术检测PLN中淋巴细胞和巨噬细胞数量。与TNP-Ficoll混合时,另取小鼠,方法同上。结果分别与两种报告抗原一起注射后,高剂量的SHLI诱导明显的RA-PLNA阳性反应(组平均WI≥2或CI≥5);ELISPOT检测发现,仅高剂量SHLI和TNP-OVA一起注射明显增加TNP特异性AFC的数量,且分泌各类抗体的AFC均明显升高(P<0.05或P<0.01);流式细胞术检测发现高剂量SHLI与TNP-OVA一起可升高PLN中巨噬细胞的数量(P<0.05)。结论在BALB/c小鼠体内SHLI不会形成新的抗原表位,也不会活化特异性T细胞,提示SHLI本身可能不具有致敏潜能。

人免疫系统重建NPG小鼠不能诱发直接腘窝淋巴结试验阳性反应

目的观察阳性药物D-盐酸青霉胺(D-pen)和链脲佐菌素(STZ)诱发的人免疫系统重建NPG(hu-NPG)小鼠的直接腘窝淋巴结试验(d-PLNA)反应,并比较其与NPG和BALB/c小鼠反应的异同,探索可提高药物超敏反应预测价值的模型动物。方法雌性NPG小鼠,1.8 Gy的X线辐照后,植入人脐血造血干细胞,制备hu-NPG小鼠,取外周血,进行淋巴细胞表型分析及淋巴细胞增殖实验。hu-NPG,NPG和BALB/c小鼠各10只,每种小鼠随机分成D-pen和STZ组,每组5只。各组分别在右后肢足趾部sc给予D-pen每只1 mg或STZ 0.75 mg,左后肢不做处理作为对照。注射后7 d处死小鼠,取左、右侧腘窝淋巴结称重,计算质量指数;将淋巴结制成单细胞悬液,计算细胞指数,并对部分淋巴结进行组织病理学检查,以比较d-PLNA反应。结果注射阳性药物D-pen和STZ后,各组小鼠一般状态良好,均未见全身毒性,且至处死时局部炎性刺激症状消失。D-pen和STZ均能诱导BALB/c小鼠出现典型的d-PLNA阳性反应,表现为注射侧淋巴结质量和细胞数量比对照侧增加,平均质量指数≥2或平均细胞指数≥5。而NPG小鼠和hu-NPG小鼠均未出现阳性反应。病理学检查发现,NPG和hu-NPG小鼠的腘窝淋巴结体积明显小于BALB/c小鼠,发育不完善。淋巴细胞表型分析发现,NPG小鼠仅有少量淋巴细胞,而hu-NPG小鼠外周血中人源性淋巴细胞以CD45^+CD19^+的B细胞为主,CD45^+CD3^+T细胞较少,且丝裂原不能刺激NPG和hu-NPG小鼠体内的人源或鼠源性淋巴细胞增殖。结论 D-pen和STZ所致的小鼠d-PLNA阳性反应依赖于体内正常的淋巴细胞数量及功能。NPG小鼠缺乏正常淋巴细胞,d-PLNA反应阴性。hu-NPG小鼠体内的人淋巴细胞功能不全,也不能诱发阳性反应。因此,hu-NPG小鼠尚不能成为d-PLNA的敏感动物。

C57BL/6J小鼠胭窝淋巴结试验评价注射用双黄连的致敏性研究

目的比较注射用双黄连和致敏物引起的腘窝淋巴结(popliteal lymph node,PLN)反应,探讨注射用双黄连的致敏潜能。方法雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照(Veh)组、苯巴比妥(PB)组(1 mg/只)、HgCl_2组(50μg/只)和D-青霉胺(D-pen)组(2 mg/只)、注射用双黄连低剂量组(L组,1 mg/只)和高剂量组(H组,5 mg/只),每组10只。小鼠一侧足趾部皮下给予受试物,第8天处死动物,摘取两侧PLN,称重,计算质量指数(mass index,MI);每组将4只小鼠的PLN以4%中性多聚甲醛固定用于病理学检查,其余6只制备单细胞悬液,计算细胞指数(cells index,CI),比较PLN的变化。结果H组MI、CI较Veh组升高(P<0.05),MI≥2和CI≥5。病理检查,PLN体积变大,生发中心明显,副皮质区内高内皮静脉(HEV)横断面增多。结论注射用双黄连可诱导C57BL/6J小鼠产生明显的PLN反应,提示它具有一定的致敏潜能。

硫普罗宁注射液腘窝淋巴结试验研究

目的用小鼠腘窝淋巴结试验(Popliteal lymph node assay,PLNA)以及检测淋巴细胞表面分子(CD4+/CD8+)来评价硫普罗宁注射液的免疫毒性。方法将昆明种小鼠随机分为5组,每组12只,设阳性对照组(盐酸氯丙嗪20.83mg.kg-1BW)、阴性对照组(氯化钠注射液)和硫普罗宁注射液(3.33、13.33、53.33mg.kg-1BW)3个剂量组,采用小鼠腘窝淋巴结试验方法测定腘窝淋巴结重量及细胞指数,淋巴细胞亚群测定采用流式细胞技术法,观察不同剂量组与对照组的差别。结果小鼠分别给予不同剂量的硫普罗宁注射液后,PLN(腘窝淋巴结)重量指数、细胞指数未见统计学意义的改变,但随用药剂量的增大而表现为增加的趋势。CD4+/CD8+淋巴细胞的比例无明显变化。结论硫普罗宁注射液有引起小鼠淋巴结肿大、增殖细胞的趋势。

应用小鼠腘窝淋巴结试验评价5种清热类中药注射液致敏潜能

目的:评价5种清热类中药注射液(TCMI)引起的BALB/c小鼠腘窝淋巴结反应,探讨清热类注射液潜在的致敏性。方法:70只雌性BALB/c小鼠随机分为阳性致敏组(氯化汞),阴性对照组(生理盐水)及各中药注射液组,每组10只。实验第1天,小鼠一侧单次足跖部sc 50μL/只生理盐水或50μg/只氯化汞,各中药注射液组按临床高剂量的4倍给药,sc于小鼠一侧足跖部分别为清开灵注射液0.96 mL·kg-1、穿心莲注射液0.96 mL·kg-1、肿节风注射液1.92 mL·kg-1、柴胡注射液0.96 mL·kg-1、板蓝根注射液0.48 mL·kg-1;6 d后处死,摘取两侧腘窝淋巴结(PLN),称重,计算质量指数(weights index,WI);每组将4只小鼠的PLN用于病理学检查,其余6只制备单细胞悬液,计算细胞指数(cells index,CI),比较PLN的变化。结果:与小鼠未处理侧淋巴结相比,氯化汞组(WI=3.82±0.93,CI=7.40±0.63),肿节风注射液(WI=2.21±0.15,CI=5.23±0.18),清开灵注射液(WI=2.13±0.10,CI=5.17±0.18)及穿心莲注射液组(WI=2.06±0.14,CI=5.04±0.27),与小鼠未处理侧淋巴结相比,均可引起显著的腘窝淋巴结反应,且WI>2和CI>5(P<0.05或P<0.01);与生理盐水组(WI=1.10±0.14,CI=1.23±0.11)比较,PLN质量及细胞计数显著升高,且足跖肿胀明显(P<0.05或P<0.01);病理学检查,生发中心明显,副皮质区内高内皮质静脉(HEV)横断面增多。而柴胡组(WI=1.39±0.16,CI=3.15±0.21)和板蓝根组(WI=1.38±0.13,CI=3.25±0.36)相应的变化不明显,反应未达到阳性标准。结论:肿节风、清开灵及穿心莲注射液具有潜在致敏性;柴胡及板蓝根注射液无潜在的致敏性。