bax嵌合基因克隆及其在人舌癌细胞的表达

目的 :构建能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白的bax嵌合基因。方法 :将RT PCR获得bax基因编码序列克隆至原核表达载体pGEX 5T ,再将baxcDNA插入人α1(Ⅰ )胶原基因顺式作用元件 (CIP)与报告基因CAT之间 ,构成 pSV CIP bax CAT嵌合基因 ;用阳离子脂质体DOSPER将此嵌合基因转染至人舌鳞癌细胞Tca8113;用免疫狭缝印迹和ELISA方法分析报告基因CAT和目的基因bax在细胞中的表达。结果 :bax基因编码序列及嵌合基因限制性酶谱正确 ;CAT表达的ELISA检测证实 ,转染是成功的 ,且CIP在Tca8113细胞中有促进其下游基因表达的作用 (为对照组的 15倍 ) ;免疫狭缝印迹和ELISA证实 ,转染细胞能高效表达Bax蛋白 (为对照组的 8倍 )。结论 :bax嵌合基因 pSV CIP bax CAT能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白 ,为进一步研究bax基因对舌癌细胞生长与凋亡的影响奠定了基础。