原核生物pPLacZ报道分子系统的构建及鉴定

构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ。用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列(3258bp)和结构基因序列(3089bp)克隆入经改建的含有pUC19的多克隆位点的pBR322载体中,经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic。用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增热休克基因htpX的启动子序列并克隆入pPLacZ-Basic中,经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ-htpX转入细菌中,检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平。成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基因htpX的报道质粒pPLacZ-htpX。应用此系统通过检测LacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化。原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便,可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测。

传媒知识分子报道的商业主义倾向

本文分析了在传媒商业主义导向下,媒体在报道知识分子新闻时,遵循商业主义导向下的新闻价值框架和叙事框架,追求报道内容的"可售性",将知识分子作为"名人"报道是对知识分子的轻慢,知识分子新闻被当作"媒介事件"来炒作等等,在一定程度上造成媒体对知识分子群体报道的偏差,从而遮蔽了知识分子的真实形象。

表达绿色荧光蛋白伪狂犬病病毒转移载体的构建及转移特性

对含伪狂犬病病毒 ( PRV)鄂 A株 g G全基因 ,PK、g D基因部分编码序列的质粒 p USK进行改造 ,消除其中的 Eco R 位点 ,将通过 PCR扩增的增强绿色荧光蛋白基因 ( EGFP)融合到 g G启动子下游 ,构建了由 g G启动子控制 EGFP表达的 PRV转移载体 pg G- /EGFP+。该转移载体单独转染或同 PRV基因组 DNA共转染 IBRS-2细胞 ,结果单独转染时 EGFP不能表达 ;共转染时 ,6 h就可在荧光显微镜下观察到明显的荧光。