报道基因技术及其应用

报道基因技术被广泛用于监测与信号转导及基因表达有关的细胞内事件。将基因调控元件与报道基因相连并转染到细胞内 ,报道基因表达产物可以反映细胞内与基因表达有关的信号转导事件。本文主要综述了报道基因的种类及其检测方法。

转基因植物中报道基因GUS的活性检测及其应用

GUS基因是目前转基因植物中应用最为广泛的报道基因。GUS基因在转基因植物中的活性检测方法有组织化学定位法、分光光度法、荧光分析法、聚丙烯酰胺凝胶原位分析法等。

杆状病毒早期基因启动子载体的构建及报道基因的表达

以ＡｃＮＰＶｐ１０基因为侧翼序列，用ＡｃＮＰＶ的ＩＥ１基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体，并将新霉素抗性基因（ｎｅｏ）插入ＩＥ１基因启动子下游，得到转移载体ｐＡｃＰＩｎｅｏ。将它和野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９，由于ｎｅｏ基因的表达，通过Ｇ４１８的选择和富集作用，得到重组病毒ｖＡｃＰＩｎｅｏ的纯培养。用酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证明，ｎｅｏ基因整合于ＡｃＮＰＶ基因组的ｐ１０基因位相。用重组病毒感染昆虫细胞，不同时间取样提取ＲＮＡ并进行杂交，结果表明ｎｅｏ基因在受染细胞内从早期到晚期都可发生转录。

GUS基因—植物基因工程中重要的报道基因

研究高等植物基因表达,特别是调控机理,常常需将基因或调控片段从原来的背景下分离出来,采用与报道基因融合的方法,通过基因的体外转移进行精确的分析。至今为止,在高等植物基因表达的研究中,至少用过6种报道基因:A、β一半乳糖苷酶(β-galatosidase)基因;B、氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicolacetyl-transferase,CAT)基因;C、新霉素磷酸转移酶(neomycin phosphotransferase,NPTⅡ)基因;D、胭脂碱合成酶(nopaline synthase)基因;E、章鱼碱合成酶(octopine synthase)基因;F。

现代生物技术在环境微生物学中的应用:Ⅲ.限制性片段长度多态性分析、变性/温度梯度凝胶电泳和报道基因

这是现代生物技术在环境微生物学中的应用系列综述文章的第三篇 ,讨论限制性片段长度多态性 (RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳 (DGGE)和温度梯度凝胶电泳 (TGGE)以及报道基因。

双报道基因系统的构建以及在N蛋白生物功能研究中的应用

为研究 λ噬菌体调控因子 Ｎ 蛋白的生物功能，应用 λ噬菌体感染、 Ｐ１ 噬菌体转导、体内、体外重组方法，通过对遗传标记的筛选，将 ｌａｃ Ｚ 和 ｇａｌ Ｋ 报道基因、λ噬菌体 ｐ Ｌ 操纵子负责调控转录、翻译的 Ｄ Ｎ Ａ 序列以及转录终止子装配到大肠杆菌染色体上，构建成菌株 Ｚ Ｈ１０４１、 Ｚ Ｈ１０４２ 和 Ｚ Ｈ１１４２．应用 Ｚ Ｈ１１４２ 菌株模拟 λ噬菌体的自然状态对其调控蛋白 Ｎ 的生物功能进行了研究．研究证明， Ｎ 蛋白不仅在转录水平上正向调控基因表达，还具有一种新的在翻译水平上负向调节自身基因表达的生物功能．

GFP报道基因在鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达

目的 观察GFP报道基因在鼻咽癌细胞系CNE 2Z中的表达。方法 将带有GFP报道基因的载体质粒pPAT GFP和 3种带有GFP报道基因及目的基因抗端粒酶核酶基因teloRZ的不同质粒 pGFPuro teloRZ 2 .1、pGFPuro teloRZ 7.1、pGFPuro teloRZ 7.7,转染到鼻咽癌CNE 2Z细胞系中 ,用荧光显微镜及流式细胞仪检测转染细胞在固定后的活细胞中GFP基因的表达情况。结果 GFP基因在活细胞中有表达 ,而在固定后无表达 ,且目的基因的插入影响GFP基因的表达。结论 GFP基因在转染了含目的基因质粒的鼻咽癌CNE 2Z细胞中稳定表达 ,可以在CNE

LacZ基因作为报道基因在植物基因工程中的应用

通过农杆菌（Agrobacteriumtumfaciens）的介导，将β-半乳糖苷酶基因（Lacz）转入烟草中，得到的转化株能在含有卡那霉素和梭苄青霉素筛选培养基上正常生长，Nopaline检测表明转化体中具有章鱼碱合成酶（NOS）的活性．1．5％的戊二醛可以固定植物中的内源背景，X-gal染色可以很好地显示出外源目的基因LacZ的表达．从而确定广泛用于动物和微生物基因工程的报道基因LacZ可以用于植物基因工程研究．

遗传报道基因检测法及其在毒理学上的应用

遗传报道基因检测法是90年代中期发展起来的新的毒理学短期筛检手段之一。本文就该技术的基本原理、检测系统的构建、在毒理学研究中的应用及其优缺点予以简要综述。

基于酵母报道基因系统检测珠江三角洲水域二噁英污染物的分布蓄积特征

利用酵母报道基因系统,检测广州市内河涌水体、珠江三角洲周围典型淡水、珠江口水体以及对应底泥样品中的二噁英类似物,探讨二噁英污染类似物在珠江三角洲水域的分布蓄积和来源特征.结果表明,广州市区流溪河同德围涌段、荔河芳村码头涌段水体存在较严重的污染,2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzopdioxin,TCDD)毒性当量分别达(50.189 0±5.695 4)ng/L、(13.096 9±0.825 2)ng/L;广州市区河涌底泥污染分布水平表现为荔河涌段>番禺涌段>天河涌段;珠江三角洲周围水体及对应底泥污染蓄积主要分布在东江惠州段和西江肇庆段,而北江段和潭江段各采样点未见明显污染.研究表明珠江三角洲水域二噁英污染物的蓄积呈非均匀分布,城市和城市周边工业区河涌及其流经珠江河段污染较重,说明污染主要来源于小型加工和化工工业活动.

报道基因SEAP的应用

分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)由于既有很高的灵敏性,又可分泌至培养介质中,因而SEAP基因成为一种广泛使用的报道基因。目前,该基因在中和抗体检测试验、实时监测分析及工程抗体构建与检测方法有较多应用。该基因在双报道基因系统中运用,可同时起到定性定量作用。本文将对报道基因SEAP的使用原理与应用加以综述。

GFP基因在棉花转化中的应用

以绿色荧光蛋白GFP基因为报道基因，用花粉管通道和农杆菌介导的转化方法将外源基因导入棉花(Gossypium hirsutum L.)，分别获得转化幼胚、幼苗和转化愈伤组织。用手持紫外灯结合显微镜检术能够快速地对转化子进行活体筛选鉴定，比用GUS检测方法有明显的优越性。本研究不但为花粉管通道转化法的可行性提供了新的证据，同时也建立了GFP用于棉花基因工程研究的检测技术体系。

NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用

为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该?

孤儿受体TR3与人CNTF受体基因中顺式元件作用机制的研究

应用两对人工合成的寡核苷酸引物，分别通过ＰＣＲ扩增，得到了ＣＮＴＦＲα－Ｉ５ＮＢＲＥ序列两侧的两个扩增片段，将其和在ＥｃｏＲⅤ位点切开的ｐＴ７ｂｌｕｅ一起定向连接，得到了插入在ｐＴ７ｂｌｕｅ的ＥｃｏＲⅤ位点的缺失了ＮＢＲＥ序列的ＣＮＴＦＲα－Ｉ５，然后再将其切下，插入到具有ＳＶ４０起动子的ＣＡＴ基因表达载体的ＢｇｌⅡ位点，构建了ＣＡＴ报道基因．细胞转染和ＣＡＴ实验表明，缺失ＮＢＲＥ后，ＣＮＴＦＲα－Ｉ５仍具有增强子功能，ＴＲ３通过该增强子对ＣＮＴＦＲα的表达具有诱导作用，说明这种诱导作用并不是单一通过ＮＢＲＥ序列进行的．

环境因素与基因交互作用和非综合征性唇腭裂关系研究进展

非综合征性唇腭裂(nonsyndromic cleft of lip with or without palate,NSCL/P)是一种病因十分复杂的先天性缺陷。尽管对于综合征性唇腭裂的病因已经有明显的进展,但是对于更加常见的NSCL/P病因的研究仍然十分匮乏。目前已经明确了许多基因和环境因素对NSCL/P有影响,并且还有一些报道基因和环境因素的交互作用对NSCL/P发生的影响,但是对于NSCL/P的病因,仍然有很大的争议。本文主要对基因和环境的交互作用对NSCL/P的影响进行综述。

GUS基因表达的简易快速鉴定法

GUS基因是目前遗传操作中常用的报道基因。该基因的DNA片断已克隆到许多农杆菌遗传工程菌种中,用于多种植物的外源基因导入研究。由于几乎在所有的高等植物中并没有该基因所编码的葡糖苷酸酶的活性或几乎测不出来,因此。

基因标记、转化、表达与检测

932221用质粒 DNA 转化一种硫杆菌[英]/Plasota,M.…//Acta Microbiol.Pol.-1992,41(1～2)5-11[译自DBA,1993,12(2),93-00627]Thiobacillus