HPLC指纹图谱结合多指标含量测定的抵当芪桂汤质量评价研究

目的 建立抵当芪桂汤HPLC指纹图谱并结合化学模式识别技术对其进行分析与评价,测定抵当芪桂汤中5种有效化学成分的含量,为其质量控制提供依据。方法 采用Agilent 5 TC-C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长260 nm。采用SPSS26.0和SIMCA14.1软件对10批抵当芪桂汤进行聚类分析和主成分分析,并通过正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)筛选批间差异的标志性成分。结果 10批抵当芪桂汤的HPLC指纹图谱相似度为0.828~0.989,共标定18个共有特征峰,经对照品比对,指认芍药苷、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷、桂皮醛、芦荟大黄素5个指标性成分,并对其进行定量分析,线性范围分别为10.000 0~320.000 0μg/mL、2.500 0~80.000 0μg/mL,10.000 0~320.000 0μg/mL、10.000 0~320.000 0μg/mL、0.078 1~5.000 0μg/mL,平均加样回收率为100.30%~104.09%。聚类分析和主成分分析将10批抵挡芪桂汤样品分为2类,通过OPLS-DA筛选出毛蕊异黄酮苷、芍药苷、橙皮苷为质量差异的标志性成分。结论 本研究建立的抵当芪桂汤质量评价方法简便、灵敏、准确、重复性好,可为抵当芪桂汤的质量评价提供依据。

基于网络药理学研究抵当芪桂汤治疗糖尿病周围神经病变的潜在机制

目的利用网络药理学及分子对接技术分析抵当芪桂汤治疗糖尿病周围神经病变的作用机制。方法通过TCMSP、HERB数据库筛选出抵当芪桂汤的有效成分;使用UniProt数据库下载相关基因靶点。通过GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB、DrugBank数据库筛选出糖尿病周围神经病变的基因靶点;取抵当芪桂汤药物成分与糖尿病周围神经病变的交集靶点,根据交集靶点进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路分析;通过分子对接实验进行验证。结果筛选得到抵当芪桂汤有效化合物123个,药物与疾病的交集靶点214个,通过网络图分析得到抵当芪桂汤治疗糖尿病周围神经病变有效药物成分为槲皮素(quercetin)、熊果酸(ursolic acid)、D-甘露醇(D-mannitol)、山柰酚(kaempferol)等,有效基因靶点为SRC、STAT3、MAPK3、PIK3CA、MAPK1和AKT1等,主要涉及通路为PI3K-AKT信号通路、脂质和动脉粥样硬化、MAPK信号通路、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症、内分泌抵抗、HIF-1信号通路等;分子对接结果表明:槲皮素(quercetin),熊果酸(ursolic acid),D-甘露醇(D-mannitol),山柰酚(kaempferol)等成分与靶点SRC、STAT3、MAPK3、PIK3CA、MAPK1和AKT1等结合作用较强。结论抵当芪桂汤通过多靶点、多通路发挥治疗糖尿病周围神经病变的作用,为中药临床有效治疗糖尿病周围神经病变提供客观依据。

基于肠道菌群和代谢组学探讨抵当芪桂汤改善大鼠2型糖尿病作用机制

目的基于肠道菌群和代谢组学探讨抵当芪桂汤治疗2型糖尿病(T2DM)的可能作用机制。方法采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM大鼠模型,将大鼠分为空白对照组、模型组、二甲双胍组和中药低、中、高剂量组,每组10只,给药组分别予相应药液灌胃6周。测定大鼠空腹血糖(FBG)及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶酶(ALT)含量,HE染色观察大鼠胰腺组织、结肠组织形态,16SrRNA测定肠道微生物群落组成及相对丰度,非靶向代谢组学对血清代谢物进行分析,采用正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)筛选潜在差异代谢物,MetaboAnalyst5.0平台分析代谢物的代谢通路,对肠道菌群及血清代谢结果进行联合分析。结果与空白对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,FBG显著升高,血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST含量显著升高(P<0.01);胰岛结构严重萎缩变形、边界模糊不清,胰岛细胞排列紊乱,部分出现空泡变性,核碎裂或溶解消失;结肠结构破坏明显,上皮细胞脱落,炎性细胞浸润。与模型组比较,中药低、中、高剂量组大鼠FBG显著降低,血清TG、TC、LDL-C、AST、ALT含量显著降低(P<0.01),胰岛形态不同程度改善,结肠组织炎性细胞浸润减轻。16SrRNA测序结果显示,抵当芪桂汤可调节T2DM大鼠肠道菌群结构,提高Chao1、observed_species、PD-whole-tree、Simpson谱系多样性指数,上调厚壁菌门、放线菌门等相对丰度,下调拟杆菌门相对丰度,增加乳杆菌属、双歧杆菌属、Lachnoclostridium属等益生菌相对丰度。血清代谢组学分析共筛选出1-十四酰-2-羟基卵磷脂、N-甲基烟酰胺、乳清酸、丙氨酸、D-甘露糖等12个潜在差异代谢物,涉及D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢、苯丙氨酸代谢、甘油磷脂代谢、嘧啶代谢4条代谢通路。相关性分析发现,考拉杆菌属、拟杆菌属、Romboutsia属和拟普雷沃氏菌属与血清差异代谢物密切相关。结论抵当芪桂汤对大鼠T2DM具有改善作用,其机制可能与调节肠道菌群、改变血清代谢物有关。

抵当通窍活血汤治疗穿支动脉粥样硬化型梗死临床观察

目的:探讨抵当通窍活血汤治疗穿支动脉粥样硬化型梗死的临床效果。方法:选取穿支动脉粥样硬化型梗死患者124例,随机分为观察组62例与对照组62例,对照组给予西医抗血小板聚集、降脂等常规治疗,观察组在对照组基础上给予抵当通窍活血汤治疗,观察两组的临床疗效及治疗前后中医证候积分、血小板活性指标(血小板活化率、血小板黏附率)、血液流变学指标[血浆黏度(PV)、低切全血黏度(L-WBV)、中切全血黏度(M-WBV)、高切全血黏度(H-WBV)]、神经相关因子[脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]。结果:观察组治疗后总有效率为87.10%,高于对照组的75.81%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组中医证候积分、血小板活化率、黏附率、血液流变学指标及血清NSE水平均显著降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组血清BDNF、NGF水平均有升高,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抵当通窍活血汤可改善穿支动脉粥样硬化型梗死患者临床症状,降低血小板活化率及血小板黏附率,降低血液高凝状态,提高脑源性神经营养因子水平,促进损伤神经细胞的修复。

抵当汤及其加味方体外抗肿瘤活性研究

目的探讨抵当汤及分别加入柴胡、桂枝、黄芪3个加味方汤剂对人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌HCT-28细胞、人肝癌HepG-2细胞的体外抗肿瘤活性的影响。方法用MTT法研究抵当汤及3个加味方制剂对MCF-7细胞、HCT-28细胞、HepG-2细胞的生长抑制作用。结果抵当汤对MCF-7、HepG-2细胞有明显的生长抑制作用(P<0.01),分别加入柴胡、桂枝、黄芪3个加味方汤剂对3种癌细胞生长抑制作用有明显提高(P<0.01);4种汤剂在72 h内对MCF-7、HCT-28细胞的毒性呈时间依赖性,IC50值在加味方后显著降低,加入柴胡、桂枝方IC50值可减少至原方的0.79倍至0.25倍。结论抵当汤对体外肿瘤细胞有活性作用,而加入柴胡、桂枝、黄芪的3个加味方活性作用均大于原方抵当汤活性作用,其中加入柴胡、桂枝的活性作用强于黄芪,抵当汤及加味方对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制最为明显。

加味抵当合剂治疗中风病134例

我们自1996年以来研制和开发的加味抵当合剂,具有破血逐瘀、通腑化痰、泄浊解毒、疏通经脉之功,临床用于治疗中风病,取得了较好的疗效.

抵当汤及加味方对S180荷瘤小鼠外周血IL-8、TNF-α的影响

目的探讨抵当汤及分别加入柴胡、桂枝、黄芪3个加味方对S180荷瘤小鼠外周血IL-8、TNF-α的影响。方法小鼠造模后随机分为模型组、抵当汤组(4 g/kg)、抵当汤加黄芪组(5.67 g/kg)、抵当汤加桂枝组(5.5 g/kg)、抵当汤加柴胡组(5 g/kg),每组15只,另取正常小鼠10只作正常对照组。各用药组灌胃给予相应药物,正常对照组和模型组给等体积0.9%NaCl溶液,每日1次,连续10 d。末次给药后1 h于小鼠眶后静脉取血,离心取血清,采用ELISA方法检测IL-8、TNF-α。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清IL-8水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,抵当汤可明显降低S180荷瘤小鼠血清IL-8水平(P<0.05),抵当汤加柴胡组、抵当汤加黄芪组、抵当汤加桂枝组均可明显降低S180荷瘤小鼠血清IL-8水平(P<0.05,P<0.01),其中以抵当汤加柴胡组血清IL-8水平降低最显著(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组小鼠血清TNF-α水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,抵当汤可明显升高S180荷瘤小鼠血清TNF-α水平(P<0.05),抵当汤加柴胡组、加黄芪组、加桂枝组均可明显升高S180荷瘤小鼠血清TNF-α水平(P<0.05,P<0.01),其中以抵当汤加柴胡组血清TNF-α水平升高最显著(P<0.01)。结论抵当汤及抵当汤加味方能升高S180荷瘤小鼠血清TNF-α水平和降低血清IL-8的表达,其中又以抵当汤加柴胡组效果最为显著。

抵当芪桂汤对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌超微结构的影响

目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠心肌组织超微结构的变化及抵当芪桂汤对其超微结构的影响。方法健康雌性SD大鼠50只,随机抽取10只为空白组,其余40只大鼠以STZ诱导成糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组、达美康组、抵当芪桂汤组,给予相应干预。8周后检测大鼠的血糖、血脂等生化指标,用H-600透射电镜和普通光镜观察STZ大鼠心肌组织结构的变化。结果(1)造模成功后,模型组大鼠血糖明显升高(P<0.01)。(2)干预结束后,与模型组比较,达美康组、抵当芪桂汤组大鼠心肌细胞肥大及坏死有所改善,细胞间质减少,肌丝排列相对整齐,抵当芪桂汤组改善较明显。结论糖尿病大鼠心肌超微结构损伤明显,抵当芪桂汤可以改善STZ诱导糖尿病大鼠心肌超微结构,从而延缓糖尿病心肌病变的发生和发展。

抵当芪桂汤对STZ诱导糖尿病大鼠心肌VEGF mRNA表达的影响

目的:观察STZ诱导糖尿病大鼠心肌组织VEGF mRNA的表达及抵当芪桂汤对其表达的影响。方法:健康雌性SD大鼠90只,随机抽10只为正常对照组(A组),余80只大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导成糖尿病模型。模型成功后随机分为模型组(B组)、达美康组(C组)、抵当芪桂汤组(D组)、抵当芪桂汤加达美康组(E组)、抵当芪桂汤高剂量组(F组),给予相应干预。用间接免疫荧光法和RT-PCR法测定大鼠心肌组织VEGF表达的变化。结果:(1)模型成功后,STZ大鼠血糖显著升高(P<0.01)。(2)干预结束后,与B组比较,STZ大鼠各组VEGF免疫荧光表达均下调,D、E、F组下调更明显(P<0.05)。(3)干预结束后,各干预组VEGF mRNA表达均下调(P<0.05),D、F组下降较明显(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠心肌病变与其组织中VEGF表达上调有关,抵当芪桂汤可能通过下调VEGF的表达和分布而起到防治糖尿病心肌病变的作用。

抵当口服液治疗高血压脑出血(急性期)的疗效观察

以西药基础治疗加抵当口服液治疗急性期高血压脑出血 30例 ,总有效率达 86 7% ,而单独用西药基础治疗总有效率仅有 70 % ,统计学分析表明 ,两者有显著差异 ,治疗组明显优于对照组。抵当口服液具有减轻脑水肿、改善患者的血液流变学指标、促进患者血肿的吸收、改善患者中风积分、日常生活功能评分等作用。

抵当芪桂汤对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌CTGF、α-SMA表达的影响

目的观察抵当芪桂汤对STZ诱导糖尿病大鼠心肌结缔组织生长因子(CTGF)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。方法 80只SD大鼠随机抽取10只为空白对照组(A,n=10),其余大鼠予以链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,将模型动物随机分为模型对照组(B,n=11)、达美康组(C,n=11)、抵当芪桂汤组(D,n=11)、抵当芪桂汤大剂量组(E,n=11)、抵当芪桂汤加达美康组(F,n=11),分别给予相应干预。于灌胃第8周末,用免疫组化法测大鼠心肌组织CTGF和α-SMA的表达。结果干预结束时与B组比较,各干预组空腹血糖均降低,以C、F组最为明显(P<0.05),各干预组大鼠心肌组织中CTGF、α-SMA表达均降低,其中以D、F组最为明显(P<0.05)。结论抵当芪桂汤可下调实验大鼠心肌组织CTGF、α-SMA的高表达,保护血管功能,延缓糖尿病心肌纤维化进程。

抵当芪桂汤对STZ诱导糖尿病大鼠vWF、HbA1c的影响

目的:观察抵当芪桂汤对糖尿病大鼠vWF、HbA1c含量及心肌组织结构的影响。方法:90只大鼠随机抽取10只为空白组,其余大鼠复制成STZ糖尿病模型,筛选造模成功的大鼠随机分为模型组、达美康组、抵当芪桂汤组、抵当芪桂汤加达美康组、抵当芪桂汤大剂量组,并给予相应干预8周进行观察。结果:抵当芪桂汤能降低实验大鼠vWF及HbA1c含量,其作用优于达美康(P<0.05);在改善心肌组织结构方面与达美康类似。结论:抵当芪桂汤可改善糖尿病血管内皮功能。

“抵当通脉方”联合西药干预无症状性颈动脉粥样硬化性狭窄38例临床研究

目的:观察抵当通脉方联合西药治疗无症状性颈动脉粥样硬化性狭窄(ACASS)的临床疗效。方法:ACASS患者随机分为治疗组与对照组,对照组予阿司匹林肠溶片、硫酸氢氯吡格雷片、阿托伐他汀钙片口服,治疗组在对照组基础上予中药抵当通脉方口服。比较2组患者的临床疗效及治疗前后中医证候积分、斑块性质及数量、颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)、血脂水平的变化情况。结果:治疗组总有效率为89.5%,优于对照组的68.4%(P<0.05);2组治疗后中医证候积分、IMT、血脂水平均降低(P<0.01,P<0.05),斑块数量均减少(P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05)。结论:抵当通脉方联合西药治疗能有效减少ACASS患者颈动脉粥样硬化斑块,发挥抗颈动脉粥样硬化作用,显著改善颈动脉狭窄程度,且无明显不良反应,值得临床推广。

抵当芪桂汤对糖尿病大鼠胰岛炎症及β细胞结构的影响

目的探讨抵当芪桂汤防治糖尿病的作用机制。方法 80只雌性SD大鼠随机抽取10只设为空白组,其余70只大鼠腹腔内一次性注射链脲佐菌素60 mg/kg造模,选取成模大鼠50只随机分为模型组、中药常量组、西药组、中药大剂量组、中药常量+格列齐特组(中西药组),每组10只,各给药组予相应药物灌胃。8周后,测定血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2的含量,并观察胰岛β细胞结构的变化。结果与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-1β、IL-2含量均降低,其中以中药常量组、中西药组较为明显(P<0.05);中药常量组、中西药组胰岛β细胞凋亡程度较轻(P<0.05)。结论抵当芪桂汤通过抑制胰岛炎症反应,保护胰岛β细胞结构而达到防治糖尿病的作用。

抵当四五汤对糖尿病血管病变大鼠血液流变性的影响

目的:探讨抵当四五汤治疗糖尿病血管病变的作用机理。方法:建立链脲佐菌素糖尿病模型,用不同剂量抵当四五汤干预,比较各组血糖、糖化血红蛋白及血液流变性的变化。结果:抵当四五汤能降低实验大鼠空腹血糖及糖化血红蛋白含量,其中大剂量组作用明显(P<0.05);能降低不同切变率下的血浆粘度,显著改善血液流变性,大剂量组作用优于达美康对照组(P<0.05)。结论:抵当四五汤具有降低空腹血糖、糖化血红蛋白含量,改善血液流变性的作用,可能是该方防治糖尿病血管病变的机理之一。

抵当芪桂汤对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌α-SMA mRNA表达的影响

目的观察抵当芪桂汤对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠心肌α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达的影响。方法 80只SD大鼠随机抽取10只为空白对照组(n=10),其余大鼠予STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射复制糖尿病大鼠模型。选取成模动物55只随机分为模型对照组(n=11)、达美康组(n=11)、抵当芪桂汤组(n=11)、抵当芪桂汤大剂量组(n=11)、抵当芪桂汤加达美康组(n=11),分别于造模第4天开始灌胃给药,1次/日,连续8周。第8周末,用免疫组化法测定大鼠心肌组织中α-SMA的表达,用RT-PCR及荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织α-SMA mRNA的表达。结果干预结束时与模型对照组比较,各干预组大鼠空腹血糖均降低,糖化血红蛋白的升高得到抑制,其中以达美康组、抵当芪桂汤加达美康组大鼠最为明显(P<0.05);各干预组大鼠心肌组织中α-SMA的免疫组化表达及mRNA表达均降低,其中以抵当芪桂汤组、抵当芪桂汤加达美康组最为明显(P<0.05)。结论抵当芪桂汤可通过抑制STZ大鼠心肌组织中α-SMA表达,保护心肌,阻止或延缓糖尿病心肌纤维化的进程。

抵当芪桂汤对糖尿病大鼠血清TGF-β1及胰岛组织超微结构的影响

目的:观察抵当芪桂汤对STZ诱导糖尿病大鼠血清TGF-β1含量及胰岛组织超微结构变化的影响,探讨抵当芪桂汤防治糖尿病大鼠胰岛β细胞功能减退的机理。方法:80只成年雌性SD大鼠随机抽取10只为空白组,其余70只大鼠,禁食不禁水12h后予STZ 60mg/kg一次性腹腔注射建模。选取50只成模大鼠随机分为模型组、西药组、中药常量组、中药大剂量组、中西药组,分别给予相应药物干预。给药8周末,检测各组大鼠血清TGF-β1含量,观察胰岛组织超微结构变化。结果:与模型组比较,各给药组大鼠空腹血糖均明显降低,中西药组空腹血糖最低;各给药组大鼠血清TGF-β1含量均降低,中药常量组血清TGF-β1含量最低;胰岛组织超微结构的改善以西药组及中药常量组最为明显。结论:抵当芪桂汤可能通过降低糖尿病大鼠血清TGF-β1含量,调节胰岛β细胞功能,防止胰岛组织纤维化,从而改善胰岛功能状态,达到防治糖尿病的目的。

抵当芪桂汤对DM大鼠血清CRP及胸主动脉ICAM-1mRNA表达的影响

目的:观察抵当芪桂汤对糖尿病大鼠血清C反应蛋白(CRP)含量及胸主动脉组织中细胞间黏附分子-1mRNA(ICAM-1mRNA)表达的影响。方法:70只大鼠随机抽取10只为空白组,并将成模大鼠随机分为模型组、格列美脲组、抵当芪桂汤大量组、抵当芪桂汤常量组并给予相应干预。10周后测定大鼠血清CRP含量、胸主动脉ICAM-1mRNA的表达。结果:与模型组比较,各干预组大鼠血清中CRP及胸主动脉组织中ICAM-1mRNA表达都有不同程度抑制,其中以抵当芪桂汤常量组最为明显(P<0.05)。结论:抵当芪桂汤可通过降低血清CRP含量、抑制胸主动脉组织中ICAM-1mRNA的表达而起到防治糖尿病大血管病变作用。

抵当芪桂汤对胰岛素抵抗大鼠血清FFA、ADPN、FINS及胰岛β细胞结构的影响

目的通过观察抵当芪桂汤对胰岛素抵抗(IR)大鼠血清游离脂肪酸(FFA)、脂联素(ADPN)、空腹胰岛素(FINS)的含有量及胰岛β细胞结构的影响,探讨该方防治糖尿病的作用机理。方法将70只SD大鼠随机选取10只作为空白组,其余60只给予高糖、高脂饲料喂养,于第8周末禁食不禁水,次日早晨一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg造模,72 h后测定其随机血糖、尿糖,血糖≥16.9 mmol/L、尿糖(+++)或以上为造模成功。将成模大鼠随机分为模型组、盐酸吡格列酮组、抵当芪桂汤常量组和抵当芪桂汤大剂量组,给予相应干预。在干预第8周末检测大鼠血清中ADPN、FFA及FINS含有量,观察大鼠的胰岛β细胞结构的变化情况。结果干预8周后,与模型组比较,各给药组大鼠血清FFA、FINS含有量均有不同程度降低,ADPN则有不同程度的升高,其中以抵当芪桂汤常量组最好;胰岛β细胞的凋亡程度也以抵当芪桂汤常量组最好。结论常规剂量抵当芪桂汤能够降低高脂高糖饮食合并STZ诱导IR大鼠血清FFA、FINS含有量,升高血清ADPN含有量,抑制胰岛β细胞凋亡,保护其结构。