人抵抗素基因cDNA的克隆

目的 克隆人抵抗素基因 (hRETN)cDNA ,为进一步研究RETN的结构和功能提供实验基础。方法 应用RT PCR方法从中国人网膜脂肪垫总RNA中扩增出RETN基因cDNA ,克隆入载体 pMD18 T中 ,形成重组载体 pMD18 T/hRETN。通过蓝白斑筛选出阳性克隆 ,限制性内切酶酶切鉴定后对其进行测序。结果 从脂肪组织总RNA中扩增得到 36 3bp片段hRETN基因 ,其cDNA序列与GenbankhRETN基因序列基本相同。结论 成功地克隆中国人hRETNcDNA。

姬松茸多糖对2型糖尿病大鼠代谢及抵抗素基因表达的影响

目的:探讨姬松茸多糖对2型糖尿病(2-diabetesmellitus,2-DM)大鼠糖脂代谢和抵抗素(resistin)基因表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为5组,A:正常对照组;B:模型组;C:8%姬松茸多糖组;D:4%姬松茸多糖组;E:2%姬松茸多糖组。8周后,测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂和胰岛素抵抗指数(IR);半定量RT-PCR检测resistin基因mRNA的表达水平。结果:姬松茸多糖治疗组FPG、FINS、TG、LDL、VLDL、CH、IR及resistin基因mRNA的表达均低于模型组(P<0.05),而HDL的含量则高于模型组。结论:姬松茸多糖可抑制resistin基因表达,降低胰岛素抵抗;降低2-DM大鼠血糖和改善其脂代谢紊乱。

抵抗素基因rs34861192多态性与东北汉族人群2型糖尿病相关性研究

糖尿病是危害老年人健康的重要疾病之一.近几年的研究发现糖尿病的发病不仅与生活方式有关,也与遗传因素密切相关.一些与糖尿病发生易感基因以及位点先后被发现,这些易感基因的发现有利于进一步阐明生活方式与基因共同作用的糖尿病发生机制,为糖尿病防治提供理论依据.

抵抗素基因420G/G基因型与高血压发病年龄相关

目的研究在中国北方汉族人群中抵抗素基因5’末端启动子区g-420 C>G多态性与高血压发病年龄的相关性。方法选取高血压病组121例,其中年龄<40岁的43例,年龄≥40岁的78例,对照组92例,其中年龄<40岁的42例,年龄≥40岁的50例,采用聚合酶链反应-限制性片长多态性方法分析抵抗素420 C/G多态性基因型。结果高血压病患者中,年轻患者的抵抗素基因420 G/G基因型频率高于年长组(P=0.006),其与发病年龄相关;年龄<40岁的年轻人群中,高血压病患者的抵抗素基因420 G/G基因型频率也显著高于对照组(P=0.001),其与高血压病发病相关。结论高血压病青年发病与抵抗素基因420 G/G基因型相关。

抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-MspI多态性与吸烟的交互作用对非酒精性脂肪性肝病的影响

目的:探讨抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-Msp I(CYP1A1-Msp I)基因多态性与吸烟的交互作用与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法:采用病例-对照研究的方法,以1 200例NAFLD患者及1 200例健康对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术分析了抵抗素基因启动子-420C/G和CYP1A1-Msp I基因多态性。结果:-420C/G(GG)基因型和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型频率分布分别为49.75%、50.08%(病例组)和24.00%、24.25%(对照组),两者经χ2检验差异显著(P<0.01)。-420C/G(GG)基因型者患NAFLD的风险显著增加。CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为39.83%和12.83%,两者经χ2检验有显著差异(P<0.01)。-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险显著增加。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率(P<0.01),吸烟与-420C/G(GG)和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型均有交互作用。结论:-420C/G(GG)、CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型和吸烟是NAFLD的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了NAFLD的发病风险。

锰超氧化物歧化酶基因C1183T、抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性与吸烟的交互作用和食管鳞状细胞癌的关系

目的 探讨锰超氧化物歧化酶（MnSOD）基因C1183T、抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性与吸烟的交互作用,以及与食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。方法 采用病例-对照研究的方法,选择经病理学检查确诊为原发性ESCC的患者720例（ESCC组）,对照组为进行健康体格检查者720名,并根据吸烟状况将研究对象分为不吸烟者和吸烟者（每天至少吸1支烟,持续半年以上）。以研究对象的外周血白细胞为样本,利用PCR分析MnSOD基因C1183T和抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性。结果 ESCC组的吸烟者构成比显著高于对照组（OR=3.326 4,95%CI为1.907 5~5.740 6,P〈0.01）。ESCC组与对照组间C1183T的CC＋CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率,以及-420C/G的CC＋CG、GG基因型频率和C、G等位基因频率的差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。ESCC组C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型频率分布分别为50.1%和49.9%,对照组分别为24.2%和23.9%。携带C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型者罹患ESCC的风险显著增加（OR=3.155 3和3.168 3,95%CI分别为1.806 2~5.145 1和1.925 4-5.206 2）。基因突变的协同分析发现,ESCC组C1183T的TT纯合子基因型联合-420C/G的GG纯合子基因型者占39.7%,显著高于对照组的12.8%（P〈0.01）,携带两种纯合子基因型者罹患ESCC的风险显著增加（OR=5.065 1,95%CI为3.187 9~7.848 1）。吸烟与C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型在ESCC的发生中均有交互作用（γ=3.926 6、3.938 3）。结论MnSOD基因C1183T的TT纯合子基因型、抵抗素基因启动子-420C/G的GG纯合子基因型和吸烟是ESCC的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了ESCC的发病风险。

翻白草对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠抵抗素基因表达的调节作用

目的观察翻白草水提液(HPD)对高脂膳食加链尿佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病(2-DM)胰岛素抵抗大鼠血清胰岛素水平及白色脂肪组织抵抗素基因mRNA表达的影响,探讨HPD提高胰岛素敏感性的可能机制。方法选用高脂饲料诱导的Wistar大鼠建立胰岛素抵抗模型后,继续用小剂量STZ建立2-DM胰岛素抵抗模型。将造模大鼠随机分为模型对照组(水)和3个HPD组(3g/kg,6g/kg,12g/kg),另选10只大鼠为正常对照组。各组灌胃8周后,空腹取材,放射免疫法测定空腹血清胰岛素,RT-PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素(resistin)基因mRNA水平。结果与模型对照组比较,HPD高、中剂量组能显著降低空腹血清胰岛素水平;HPD各组均能显著降低大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因mR-NA表达。结论HPD水提液具有改善2-DM胰岛素抵抗大鼠的胰岛素抵抗作用。

抵抗素基因多态性与2型糖尿病及肥胖相关性研究

目的探讨蚌埠地区汉族人群抵抗素基因-420(C>G)多态性与2型糖尿病及肥胖之间的关系。方法选取2型糖尿病患者101例(肥胖患者50例,非肥胖患者51例),对照组52例(肥胖者25例,非肥胖者27例),抽取外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片断多态性(PCR-RFLP)分析基因型。结果2组间等位基因频率比较差异无统计学意义(P=0.754)。2组间基因频率型比较差异有统计学意义(P=0.026)。logistic回归分析提示-420 G/G基因型与2型糖尿病及肥胖均无相关性。结论蚌埠地区汉族人群抵抗素基因5’,调控区-420 C>G多态性与2型糖尿病及肥胖均无显著相关性。

2型糖尿病抵抗素基因单核苷酸多态性(SNPs)及胰岛素抵抗相关因素研究

目的:研究内蒙古地区汉族2型糖尿病人抵抗素基因5端调节区单核苷酸多态性(SNPs)及胰岛素抵抗、血脂关系。方法:对81名2型糖尿病患者(分肥胖、非肥胖2组)及40名非糖尿病患者抵抗素基因测序分析,比较3组间SNPs及胰岛素敏感指数(ISI)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)。结果:3组抵抗素基因5′端调节区等位基因频率比较显示组间无统计学差异。糖尿病肥胖组和非肥胖组胰岛素敏感指数(ISI)与对照组比较,差异有显著性(均为P<0.01),糖尿病肥胖组和非肥胖组胰岛素敏感指数(ISI)比较差异也有显著性(P<0.05),糖尿病肥胖组和非肥胖组甘油三酯均高于对照组(均为P<0.01),糖尿病肥胖组和非肥胖组之间比较,差异也有显著性(P<0.05)。糖尿病肥胖组血HDL-C低于糖尿病非肥胖组和对照组,差异有显著性(分别为P<0.05,P<0.01),而糖尿病非肥胖组和对照组之间比较无统计学差异(P>0.05),糖尿病非肥胖组和对照组之间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:内蒙古地区汉族2型糖尿病人与抵抗素基因5端调节区单核苷酸多态性(SNPs)没有显著相关性。胰岛素抵抗与肥胖密切相关。2型糖尿病脂代谢紊乱是甘油三酯紊乱合并HDL—C紊乱,与肥胖密切相关。

抵抗素基因rs1862513多态性与儿童肥胖的关系

目的研究抵抗素基因rs1862513多态性与儿童肥胖的关系。方法收集住院和门诊的肥胖儿童60例为肥胖组,选择同期健康体检儿童60例为对照组,对两组的抵抗素基因rs1862513位点的基因型进行检测。结果 (1)在肥胖组与对照组间,抵抗素基因rs1862513基因型的分布差异无统计学意义(2=2.631,P>0.05)。(2)肥胖组的抵抗素、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇在GG组与CG+CC组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但三酰甘油水平差异有统计学意义(P<0.05)。(3)GG基因型的肥胖儿童患病率是CC基因型的1.389倍,GG基因型的肥胖儿童患病率是CG基因型的2.045倍,基因型间危险度差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素基因rs1862513位点多态性与儿童肥胖无相关性,但可能对脂代谢有一定影响。

抵抗素基因启动子的多态性与多囊卵巢综合征妇女的体重指数相关

Resistin does not appear to be a major gene predisposing to polycystic ovary syndrome (PCOS). However, an association of a resistin variant with body mass index was found in women with PCOS, suggesting that resistin may be related to adiposity in PCOS.

2型糖尿病患者抵抗素基因420C/G多态性与非酒精性脂肪肝的关系

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者中抵抗素基因5'末端启动子区-420 C/G多态性与非酒精性脂肪肝(NAFLD)的相关性。方法选取2型糖尿病患者268例,分为非酒精性脂肪肝组156例,无脂肪肝组112例,正常对照组115例,采用聚合酶链反应-限制性片断多态性(PCR-RFLP)方法分析抵抗素420 C/G多态性基因型。结果抵抗素-420C/G位点单核苷酸多态性分布在2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝组与正常对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),在2型糖尿病患者中GG基因型发生非酒精性脂肪肝的风险高,是CC基因型的2.40倍(P<0.05),是C等位基因携带者(CC+CG)的2.08倍(P<0.05),GG基因型是2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患病的危险因素(OR=3.05,95%CI 1.19-7.86,P<0.05)。结论抵抗素基因420位点GG纯合子增加了2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的风险。

抵抗素的研究进展

抵抗素是一种脂肪组织特异性激素。它具有抑制脂肪生成及促进内皮细胞活化等功能。某些位点的抵抗素基因多态性与糖尿病、高血压等疾病相关。但抵抗素与胰岛素抵抗、疾病间关系等问题上,目前尚有争议,有待进一步深入研究。

猪RELMβ基因启动子区克隆及序列分析

本研究旨在分析猪RELMβ基因启动子结构,初步探索RELMβ基因表达调控机制。通过PCR方法扩增RELMβ基因的系列启动子缺失片段并分别克隆到荧光素酶报告基因表达载体p GL3-Enhancer中,经酶切、测序和生物信息学分析,构建包含RELMβ启动子系列截短的荧光素酶报告基因重组质粒,脂质体转染至HT29和293T细胞,应用双荧光素酶活性检测系统检测启动子活性。试验获得了猪RELMβ基因约1 kb的启动子序列,序列比对发现猪和人物种间相似性仅34.9%,猪和小鼠的同源性是82.4%。生物信息学分析预测猪RELMβ基因转录起始位点在-556 bp处,猪和人RELMβ基因启动子存在系列保守的转录因子结合位点,包括Cdx2、SRY、NFKB、NKX-2、c-Myb、GATA-1、GATA-3、C/EBP、MZF1等。细胞检测结果显示,p GL-RELMβ(-574^+215)活性最强,推测在-574^-182 bp位点之间存在RELMβ基因启动子的关键顺式调控元件,这一区域发现SRY、Cdx2、GATA-1和MZF1等关键转录因子结合位点。

人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析

为克隆人类抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)基因的上游启动子序列,并观察其不同截短片段的启动子活性,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-871～+50bp、-729～+50bp、-471～+50bp、-438～+50bp、-371～+50bp大小的RELMβ启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子CDX-2结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染人胚肾293细胞、结肠癌HCT116和SW480细胞、宫颈癌HeLa细胞.结果发现,各RELMβ启动子片段在293、HCT116、SW480细胞中均有活性,但在HeLa细胞中活性缺失;-471～-438bp区存在RELMβ启动子的核心调控元件.针对该区域CDX-2转录因子结合位点进行突变,能导致RELMβ启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合CDX-2.结果提示,成功克隆了具有活性的RELMβ启动子序列,CDX-2为其重要的转录因子,为研究RELMβ基因的转录调控机制奠定了实验基础.

木聚糖酶基因(XynB)肠道特异表达载体的构建及鉴定

将黑曲霉属XynB基因和猪RELMβ基因核心启动子区克隆到pcDNA3.1(-)中,构建携带绿色荧光和Myc双标记的肠道特异表达载体pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP。利用脂质体介导将载体转染人结肠癌细胞(HT29)和人肝癌细胞(Bel7402),荧光显微镜检测发现,该载体可在HT29细胞特异表达绿色荧光蛋白;对转染该表达载体的HT29细胞进行RT-PCR检测和WB分析,结果表明,XynB基因在HT29细胞中正常转录,并且在细胞内检测到目的蛋白表达。

猪前脂肪细胞分化过程中RETN基因的表达

为探讨猪前脂肪细胞分化过程中抵抗素基因(RETN)表达水平的变化规律,从1日龄仔猪皮下脂肪组织分离前脂肪细胞,于DMEM/F12培养基中培养3、5、7、10d后收获细胞。通过油红O染色法观察前脂肪细胞分化,并用实时荧光定量RT-PCR检测前脂肪细胞分化过程中RETN基因表达水平的变化。结果,在前脂肪细胞分化过程中,RETN基因表达水平显著下降(P<0.01),细胞形态亦发生相应变化,即细胞变圆,细胞内脂肪滴体积增大。结果表明,RETN基因与前脂肪细胞脂肪代谢调节有关,其表达水平下调能促进前脂肪细胞分化。