抵抗素结合多肽对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4基因表达的影响

目的观察抵抗素结合多肽(RBP)对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4(GLUT-4)基因表达的影响。方法构建大鼠抵抗素真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,获得稳定表达抵抗素基因细胞株;采用台盼蓝排斥试验,确定理想的RBP干预浓度,于诱导细胞分化第0天加入培养液;采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用RT-PCR技术检测脂肪细胞分化标志基因及GluT-4基因表达变化;采用全自动生化仪比色法,检测脂肪细胞内TG和游离脂肪酸FFAs含量的变化。结果(1)RBP浓度10-12mol/L时,脂肪细胞活细胞数比例较高,且细胞形态无明显改变。(2)RBP对正常脂肪细胞分化进程无明显影响,RBP虽未影响抵抗素稳定表达脂肪细胞内脂滴的出现时间,但细胞内脂滴的数目明显减少。(3)RBP对正常脂肪细胞分化标志基因及抵抗素稳定表达细胞分化早期标志基因Pref-1的表达无明显影响,但明显下调抵抗素稳定表达细胞分化中晚期标志基因C/EBPα和FAS的表达水平。(4)RBP对正常脂肪细胞内TG、FFAs含量无影响,但可显著降低抵抗素稳定表达脂肪细胞内的TG、FFAs含量。(5)RBP干预对正常脂肪细胞及抵抗素稳定表达脂肪细胞中GluT-4基因的表达水平均无显著影响。结论RBP对正常3T3-L1脂肪细胞的分化、脂代谢、GluT-4基因表达均无明显影响,但能有效拮抗抵抗素基因,显著促进3T3-L1脂肪细胞分化及脂代谢。

抵抗素及其结合多肽对大鼠肝细胞糖原合成的影响

目的探讨抵抗素(resistin)及其结合多肽(RBP)对大鼠肝细胞糖原合成的影响。方法体外培养大鼠BRL肝细胞,分为空白对照组、抵抗素(60ng/ml)干预组、RBP(1nmol/L)干预组和抵抗素(60ng/ml)+RBP(1nmol/L)联合干预组,培养2h后筹集细胞,以蒽酮法检测胞内糖原含量,并采用RT-PCR法检测IRS2、SOCS3、GLUT2等基因mRNA的表达变化。结果与空白对照组比较,抵抗素干预组糖原含量显著下降,但RBP干预组则无显著差异;与抵抗素干预组相比,抵抗素+RBP联合干预组糖原含量明显升高。各干预组BRL细胞中GLUT2基因的mRNA水平无显著差异。抵抗素干预组SOCS3 mRNA水平显著上调、IRS2 mRNA水平显著下调;但两者在抵抗素+RBP联合干预组则无明显变化。结论RBP能拮抗抵抗素抑制肝细胞糖原合成的作用,但对正常肝细胞糖原合成功能无明显影响。

抵抗素及其结合多肽对大鼠骨骼肌细胞糖摄取功能的影响

目的探讨抵抗素及其结合多肽(RBP)对大鼠骨骼肌细胞糖摄取功能的影响。方法体外培养的大鼠骨骼肌细胞(L6)随机分为对照组,抵抗素(10 nmol/L)组,RBP(1 nmol/L)组、抵抗素(10 nmol/L)+RBP(1 nmol/L)组,培养0.5 h后,液闪计数法(LSC)观察L6细胞糖摄取功能的变化,RT-PCR、Western blot法检测葡萄糖转运载体(GLUT)4基因的表达及转位变化。结果与对照组相比,抵抗素组糖摄取功能下降,RBP组及抵抗素+RBP组糖摄取功能无明显变化(P<0.05);与抵抗素组相比,抵抗素+RBP组糖摄取功能明显上调(P<0.05)。4组L6细胞的GLUT4基因的蛋白表达及转位均无明显变化(P>0.05)。结论抵抗素能抑制骨骼肌细胞的糖摄取;但对正常骨骼肌细胞糖摄取功能无明显影响;RBP但能有效拮抗抵抗素抑制骨骼肌细胞糖摄取的作用。