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家蚕蛋白质双向电泳的样品制备方法 被引量:26
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作者 钟伯雄 颜海燕 +2 位作者 沈飞英 李建科 周丽 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第4期427-432,共6页
进行蛋白质组研究的关键是要尽可能完整地获得一个基因组在一个生物体或一个组织器官的特定时期表达的蛋白质的种类和数量 ,双向电泳技术是分离组织和器官蛋白质的核心技术 ,而蛋白质样品的制备是双向电泳的基础。以家蚕胚胎、中肠、皮... 进行蛋白质组研究的关键是要尽可能完整地获得一个基因组在一个生物体或一个组织器官的特定时期表达的蛋白质的种类和数量 ,双向电泳技术是分离组织和器官蛋白质的核心技术 ,而蛋白质样品的制备是双向电泳的基础。以家蚕胚胎、中肠、皮肤、丝腺等组织器官为材料 ,采用磷酸缓冲液或Tris HCl缓冲液抽提蛋白质样品 ,用 6种不同的蛋白质溶解缓冲液溶解蛋白质 ,经蛋白质双向电泳和蛋白质图像软件分析 ,结果表明用磷酸缓冲液抽提、蛋白质溶解缓冲液E溶解是制备家蚕蛋白质双向电泳样品的较好方法。蛋白质磷酸抽提缓冲液 (PBS)的组成为 :32 5mmol/LK2 HPO4,2 6mmol/LKH2 PO4,4 0 0mmol/LNaCl,pH 7 6。蛋白质样品溶解缓冲液E的组成为 :8mol/L尿素 ,2mol/L硫尿 ,4 %CHAPS ,2 0mmol/LTrisbase,30mmol/LDTE ,2 %Pharmalyte(pH 3~ 10 )。 展开更多
关键词 家蚕 蛋白质 双向电泳 样品制备方法 抽提缓冲液 溶解缓冲液 器官 组织
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一种改进的珙桐(Davidia involucrata)干种子总RNA的提取方法 被引量:8
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作者 黎云祥 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期968-970,共3页
After many unsuccessful attempts to obtain biologically active mRNAs from dry seeds of Davidia involucrata using available protocols,an effective procedure modified from Vicient and Delseny (1999) is developed.This me... After many unsuccessful attempts to obtain biologically active mRNAs from dry seeds of Davidia involucrata using available protocols,an effective procedure modified from Vicient and Delseny (1999) is developed.This method is based on the use of 8mol/L LiCl in the extraction buffer followed by phenol extractions.The differences with respect to the original method are the inclusions of 2% soluble PVP (10000Da) and 10 mmol/L cysteine in the extraction buffer to avoid oxidation of polyphenolics,the reduction in the number of phenol extractions,freezing the seeds for 10 minutes instead of using quarts.The author modifications conquer the perishing oxidation of polyphenolics,in their oxidized forms,polyphenols can covalently bind to proteins and nucleic acids; and permit the recovery of and an average of 240 μg total RNA per g of the seeds that is suitable for translation in vitro,northern hybridizations,and the construction of cDNA libraries. 展开更多
关键词 抽提缓冲液 多酚类物质 核酸 珙桐 干种子 总RAN 提取方法
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