拉曼被孢霉γ-亚麻酸高产突变株的选育

目的诱变、筛选γ 亚麻酸 (GLA)高产菌株。方法采用 5 氟尿嘧啶、紫外线、氯化锂复合诱变及自然分离的方法 ,对拉曼被孢霉AS 3.34 13进行诱变筛选。结果获得一株GLA高产突变株F5。该菌株GLA产量较原始菌株提高了 30 0 %。传代实验证明该菌株遗传性质稳定。经对其发酵培养基及发酵条件的优化 ,该菌株GLA生产能力可达 115 3.6 3mg/L ,较原始菌株提高 335 .87%。结论拉曼被孢霉GLA高产突变株F5已达工业生产菌株要求。

铜与锌对拉曼被孢霉的生长、油脂及花生四烯酸合成的影响

报道了不同浓度的 Zn2 +和 Cu2 +对拉曼被孢霉 (Mortierella ramanniana)的细胞形态、生长、油脂和花生四烯酸的生成的影响。Zn(CH3COO) 2 在 5× 10 -6和 1× 10 -5时对拉曼被孢霉的细胞生长有轻微刺激作用 ;当浓度高于 1.5× 10 -5时有抑制作用 ,随浓度的提高而抑制作用增强 ,细胞缩小 ;Cu SO4 在 0 .5× 10 -6和 1×10 -6时对该菌细胞生长有轻微作用 ,高于 1.5× 10 -6时抑制作用明显增强 ,细胞缩小。 Zn2 +在 1×10 -5和 1.5× 10 -5时 ,对该菌油脂及花生四烯酸的生成有刺激作用 ,高于 2 .5× 10 -5时则有抑制作用 ;Cu2 +在 1× 10 -6和 1.5× 10 -6时 ,对该菌油脂及花生四烯酸的生成有刺激作用 ,高于 2 .5× 10

拉曼被孢霉F5发酵生产γ—亚麻酸的实验研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ—亚麻酸的最适碳源、氮源、发酵时间及温度、无机盐离子的添加、最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨。最适发酵培养基组成为 (g/L) :葡萄糖 1 0 0 ,酵母浸出粉 4 ,蛋白胨 1 ,K2 HPO4 1 ,CaCl2 1× 1 0 - 2 ,MgSO4 5× 1 0 - 2 ,FeSO4 1× 1 0 - 2 ,ZnSO4 7.5× 1 0 - 3,Cu SO4 0 .5× 1 0 - 3,MnSO4 2× 1 0 - 3,pH6.0。培养温度为 2 5℃ ,1 4 0rpm振荡培养 1 0天 ,培养 8天后 (即收获前 2天 )补加 5%葡萄糖。发酵结果为 :DC 2 4 59g/L ,TL 1 0 84 g/L ,TL/DC 4 4.0 9% ,GLA/TL 1 0 .67% ,GLA产量为 1 1 56 63mg/L。GLA产量较初始结果提高 1 56 1 5%。

拉曼被孢霉产γ-亚麻酸的发酵条件优化

对影响发酵产γ-亚麻酸的因素(温度、N源、P源等)进行单因素考察。结果发现,各因素对拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana NBRC 8187)产γ-亚麻酸均有不同程度的影响。通过正交试验设计对KH2PO4、NaNO3、酵母膏和温度进行了L9(34)试验设计,以γ-亚麻酸产量为优化目标,直观分析得出影响产量的因素大小顺序为酵母膏、温度、KH2PO4、NaNO3,最终确定最佳的培养条件:酵母膏5 g/L、25℃、KH2PO41 g/L、NaNO33 g/L。在此条件下,检测得出在第5天γ-亚麻酸产量达到0.968 g/L,相比优化前(0.583 g/L)提高了66%。

拉曼被孢霉F_5发酵生产γ—亚麻酸的研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ—亚麻酸的最适碳源、氮源、发酵时间及温度、无机盐离子添加、最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨。最适发酵培养基组成为 (g/L) :葡萄糖 1 0 0 ,酵母浸出粉 4 ,蛋白胨 1 ,K2 HPO4 1 ,CaCl2 1× 1 0 - 2 ,MgSO4 5× 1 0 - 2 ,FeSO4 1× 1 0 - 2 ,ZnSO4 7.5× 1 0 - 3,CuSO4 0 .5× 1 0 - 3,MnSO4 2× 1 0 - 3,pH 6.0。培养温度为 2 5℃ ,1 4 0r/min振荡培养 1 0天 ,培养 8天后 (即收获前 2天 )补加 5 %葡萄糖。发酵结果为 :DC 2 4 .5 9g/L ,TL 1 0 .84g/L ,TL/DC 4 4.0 9% ,GLA/TL 1 0 .67% ,GLA产量为 1 1 5 6.63mg/L。GLA产量较初始结果提高 1 5 6.1 5 %。

用CTAB和SDS法简单快速提取拉曼被孢霉DNA的通用方法

在植物及微生物DNA提取方法的基础上,提出了一种分别用CTAB和SDS试剂简单、快速、安全、优质提取拉曼被孢霉DNA的通用步骤。该方法提取时间短、效率高、产品较纯,通过紫外分光光度计检测和凝胶电泳分析,提取的DNA分子量可达21.2 kb以上,其纯度可直接用于PCR扩增等分子生物学方面的研究。

拉曼被孢霉产γ-亚麻酸后处理工艺的研究

研究了γ-亚麻酸的后处理方法及测定前样品的预处理,包括菌丝体干燥方式对菌体得率和γ-亚麻酸(GLA)含量的影响,低温结晶法浓缩纯化油脂中的GLA及样品预处理对测定结果的影响。

产γ-亚麻酸诱变菌拉曼被孢霉HLY0902的发酵条件优化

采用正交实验和单因素实验,分别对诱变菌拉曼被孢霉HLY0902的培养基及培养条件进行优化,以期提高γ-亚麻酸(GLA)的产量。结果表明:当发酵培养基组成为葡萄糖100 g/L、酵母浸粉10 g/L、KH_2PO_44 g/L、Na NO_31 g/L、Mg SO_4·7H_2O 0.5 g/L时,GLA的产量最大,可达1.05g/L,较优化前提高了43.8%;最优培养条件为接种量10%,装液量20%,发酵时间168 h,适合菌体生长和油脂积累的p H为5.5、发酵温度为22℃,适合GLA积累的p H为7.5、发酵温度为20℃。通过该系列的优化研究,诱变菌拉曼被孢霉HLY0902产GLA的能力显著提高。

复合诱变被孢霉原生质体获高产γ-亚麻酸的研究

以拉曼被孢霉(Mortierella remanniana)为出发菌株M_5,通过原生质体制备,经亚硝酸和激光等进行复合诱变;进行初筛,经摇瓶发酵法复筛,并测定其相关性能指标,获得一生产性能比出发菌株显著提高的突变株M_(?);其干菌体收率为46.8g/L、油脂产率达34.6g/L、γ-亚麻酸的产率达12.5g/L,分别是出发菌株的1.73倍、2.02倍和2.6倍。通过基因传代实验,说明突变株的基因可稳定遗传。

花生四烯酸高产突变株的选育及其发酵调控

以拉曼被孢霉（Mortierellaramanniana）SM541为原始菌株，经过紫外线复合氯化锂诱变处理，得到突变株SM541－9，其生物量由126g／L提高到28．8g／L，油脂含量由5．8g／L提高到15.7g／L。花生四烯酸含量由321mg／L增加到623mg／L。传代实验表明，SM541－9具有良好的遗传稳定性，以葡萄糖为碳源，硝酸钾为氮源的最适培养条件下，10L罐发酵，生物量和花生四烯酸含量较原始菌株分别提高了45．2％和109.5％。在液体发酵过程中，菌丝老化、增大溶氧量、间歇流加葡萄糖都有利于花生四烯酸的合成。