虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

miR-103通过抑制LATS2促进肝细胞肝癌侵袭转移的机制

目的研究原发性肝癌中miR-103的表达及对肝癌细胞系转移能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-103在肝癌组织及肝癌源性细胞系中的表达。分别转染miR-103 mimic至L02细胞、转染miR-103抑制剂至HepG2细胞,CCK8法检测miR-103对细胞增殖的影响,TUNEL法检测miR-103对细胞凋亡的影响,Transwell实验检测miR-103对肿瘤细胞侵袭和转移的影响。生物信息学分析miR-103的靶基因,western blot验证靶基因表达与rmiR-103的相关性。结果 miR-103在肝癌标本和肝癌源性细胞系中表达上调,miR-103可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,Transwell实验结果表明miR-103增加细胞侵袭和转移能力。生物信息学分析表明拉特抑癌基因同源分子2(LA,TS2)为miR-103的潜在靶基因。miR-103的表达与LATS2呈负相关。结论以上数据证明miR-103通过抑制LA,TS2促进肝细胞肝癌侵袭转移,miR-103/LA,TS2失调有可能成为治疗肝癌的新靶点。

抑癌基因SPRED2在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的在肾透明细胞癌进展过程中,初步探讨抑癌基因SPRED2所起到的生理学作用。方法收集遵义医科大学附属医院泌尿外科近年接受手术的肾透明细胞癌患者的癌组织及癌旁组织标本,另取材于良性肾脏病变组织作为正常肾组织对照。采用免疫组织化学法及Western-blot,分别检测SPRED2及LC3蛋白在肾透明细胞癌组织、癌旁组织以及正常肾组织中的表达情况,并将各组织中两种蛋白的具体表达水平进行两两比较。结果通过免疫组化染色(n=10),初步确定SPRED2及LC3蛋白在组织中的表达定位于细胞膜和胞浆,以细胞膜为主。Western-blot结果显示(n=9),SPRED2在癌组织、癌旁组织及正常肾组织中的表达水平分别为(0.52±0.24)、(0.86±0.30)及(1.47±0.55)。SPRED2在癌组织中的表达含量显著低于癌旁组织(P<0.05),在癌旁组织中的表达含量明显低于正常肾组织(P<0.01),差异均有统计学意义。LC3在癌组织、癌旁组织及正常肾组织中的表达水平分别为(1.34±0.40)、(0.72±0.32)及(0.33±0.12)。LC3在正常肾组织中的表达含量明显低于癌旁组织(P<0.01),在癌旁组织中的表达含量明显低于癌组织(P<0.05),差异均有统计学意义。结论SPRED2在肾透明细胞癌组织中的表达含量显著降低,并低于癌旁组织及正常肾组织,其在肿瘤进程中可能发挥抑制作用。

直肠癌组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达与上皮间质转化的关系及预后意义

目的研究直肠癌组织中YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTHDF2)、长链非编码RNA抑癌候选基因7(lncRNA TUSC7)表达与上皮间质转化(EMT)的关系及临床预后意义。方法选取该院自2018年5月至2020年5月诊治的98例直肠癌患者。采用实时荧光定量PCR检测直肠癌组织和癌旁组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达及EMT相关指标β-连环素(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)mRNA的表达。采用Pearson法分析YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与EMT相关指标的相关性。采用Kaplan-Meier曲线分析YTHDF2、lncRNA TUSC7表达对直肠癌无瘤生存预后的影响。采用多因素COX回归分析直肠癌无瘤生存预后的影响因素。结果直肠癌组织中YTHDF2、β-catenin、N-cad mRNA相对表达水平高于癌旁组织,而lncRNA TUSC7、E-cad mRNA相对表达水平低于癌旁组织(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与β-catenin、N-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05);lncRNA TUSC7与β-catenin、N-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与lncRNA TUSC7表达呈负相关(P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与TNM分期Ⅲ期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(均P<0.05)。YTHDF2高、低表达组3年无瘤生存率分别为59.57%(28/47)、88.24%(45/51)。lncRNA TUSC7高、低表达组3年无瘤生存率分别为88.00%(44/50)、60.42%(29/48)。YTHDF2高表达组3年累积无瘤生存率低于YTHDF2低表达组(Log Rankχ^(2)=11.370,P=0.001)。lncRNA TUSC7高表达组3年累积无瘤生存率高于lncRNA TUSC7低表达组(Log Rankχ^(2)=11.880,P=0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度、合并淋巴结转移、YTHDF2高表达、lncRNA TUSC7低表达是直肠癌患者无瘤生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论直肠癌组织中YTHDF2表达上调,lncRNA TUSC7表达下调,二者与不良临床病理特征及EMT有关,是新的评估直肠癌患者预后的标志物。

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P <0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P <0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达

为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点 ,收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本 ,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取 ,应用免疫组化方法和RT PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平 ,并通过DNA测序验证PCR产物的正确性 .免疫组化结果表明 ,在上述各组织均有NDR2蛋白不同程度的表达 .RT PCR结果显示 ,在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2mRNA表达 ,其表达水平以脑组织为最高 .NDR2mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织 ,而结肠与结肠癌组织 ,胃与胃癌组织NDR2mRNA表达水平则无显著差别 .以上结果表明 ,NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内 ,而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低 ,提示该基因可能与神经系统及呼吸系统肿瘤的发生发展有关 ,为进一步探讨该基因功能提供了线索 .

PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2的建立和鉴定

目的 :为了研究外源性基因PTEN对粘液表皮样癌细胞生物学行为的影响 ,建立稳定表达PTEN的粘液表皮样癌细胞系。方法 :应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2 ,嘌呤霉素筛选阳性克隆 ,用免疫印迹法和ABC免疫酶染色法检测转染细胞中PTEN蛋白的表达。结果 :野生型PTEN基因成功地导入细胞M3 SP2 ,转染细胞稳定表达PTEN蛋白 ,PTEN蛋白分布于细胞质。结论 :M3 SP2 细胞能稳定表达外源性基因PTEN。

Gadd45介导抑癌基因BRCA1诱导的G_2/M期阻滞

背景与目的:目前已经肯定,抑癌基因BRCA1是细胞周期监测点调控的重要因子,但BRCA1在细胞周期阻滞中的作用机制尚不完全清楚。本研究的目的是探讨Gadd45在BRCA1诱导的细胞周期阻滞中所起的作用。方法:应用转染、流式细胞仪细胞筛选(分选)、Westernblot检测分析BRCA1诱导Gadd45的表达;利用CAT酶活性测定的方法检测外源BRCA1对Gadd45启动子所起作用;以流式细胞周期分析方法检测反义Gadd45转染对BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞的影响;采用细胞生长集落形成分析反义Gadd45转染HeLa、HCT116细胞在BRCA1诱导的细胞生长抑制过程所起的作用。结果:外源转染BRCA1可诱导Gadd45蛋白的表达;BRCA1激活Gadd45启动子的转录;反义Gadd45可显著阻遏BRCA1诱导细胞G2/M期阻滞;反义Gadd45转染可明显降低BRCA1对HeLa、HCT116细胞集落形成的抑制作用。结论:Gadd45作为BRCA1的下游调控基因,在BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞过程和生长抑制中起介导作用。

大肠癌及癌旁组织中抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因bax的表达及意义

目的 研究抑凋亡基因bcl 2和促凋亡基因bax在大肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学S P法对 3 1例大肠癌患者的癌组织及距癌组织外缘 3cm内的癌旁组织和 3cm以远的正常大肠组织中bcl 2和bax基因的表达进行检测。结果 大肠癌及其癌旁组织中bcl 2蛋白表达阳性率分别为 64 .5 %和 60 .0 % ,显著高于正常组织 (3 5 .0 % ) ,P<0 .0 5 ;bax蛋白表达阳性率分别为 45 .2 %和 45 .0 % ,显著低于正常组织 (60 .0 % ) ,P<0 .0 5 ;大肠癌组织与癌旁组织中bcl 2和bax蛋白表达阳性率的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。bcl 2和bax蛋白在大肠癌组织中的表达与其病理类型和临床分期无明显关系 (P>0 .0 5 )。结论 大肠癌及其癌旁组织中有不同水平的bcl 2蛋白过度表达和bax蛋白低表达 ,两者通过参与调节细胞凋亡而与大肠癌的发生有关 ,但与大肠癌的病理类型、临床分期无关。距大肠癌组织外缘 3cm以内的癌旁组织应视为癌前期组织 。

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤

目的 研究GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后对人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤的治疗作用。方法 将人上皮性卵巢癌细胞株skov3ipl细胞种植于裸鼠腹腔内建立腹水瘤模型。将生理盐水、GE7 pcD NA3四元复合体及GE7 pcDNA3 NOEY2四元复合体导入荷瘤裸鼠体内研究其抑制肿瘤生长作用。结果 人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤的成瘤率达 90 % ,GE7 pcDNA3 NOEY2四元复合体腹腔注射后第 2周裸鼠的体重较对照组明显减轻 (P <0 .0 5) ,但第 3周起 3组体重无明显差异。 3组裸鼠的生存期无明显差异。结论 GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后能延缓但不能抑制上皮性卵巢癌腹水的生长 ,且对腹水瘤裸鼠的生存期无明显延长作用。人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤模型具有实用性。

癌基因bcl-2及抑癌基因p53在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨宫颈癌 bcl- 2和 p5 3基因表达的改变与其临床意义。方法 对 2 4例宫颈癌组织及对照组宫颈组织采用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测 bcl- 2和 p5 3基因蛋白的表达 ,结合临床资料分析基因改变的临床意义。结果 宫颈癌中 bcl- 2基因蛋白表达高于对照组 ,p5 3基因蛋白表达低于对照组 ,其中二者均为 期高于 期 , 期均低于 期和 期 ,P<0 .0 1。结论 bcl- 2和 p5 3基因的表达在宫颈癌的发生发展中起重要作用 ,在宫颈癌早期 ,bcl- 2主要抑制细胞凋亡 ,而 p5

LZTS2抑癌基因与肿瘤相关性的研究进展

亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2(leucine zipper tumor suppressor 2,LZTS2)是一种新的肿瘤抑制基因,近年受到越来越多的关注。目前许多研究表明,LZTS2与多种肿瘤的发生和细胞异常增殖等多个环节密切相关,是重要的候选肿瘤抑制基因,可为肿瘤的治疗提供新的思路。

大肠癌中B细胞异位基因-2的异常表达及其抑癌机制

目的研究B细胞异位基因-2(BTG2)在结肠癌中的表达特点及其抑癌机制。方法采用免疫组织化学方法检测BTG2在100例大肠癌、40例大肠腺瘤标本和40例正常大肠组织标本中的表达水平;分析BTG2的表达与肿瘤临床病理特征间的关系;Western blot方法检测结肠癌组织中BTG2、P21、c-Myc、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素E(cyclin E)、P53、细胞周期依赖蛋白激酶-2(CDK2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平,分析BTG2潜在的抑癌机制,并对患者进行随访。结果 BTG2在大肠癌中的表达率为43%,显著低于正常大肠组织和大肠腺瘤中的表达率,且与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、淋巴转移有关,与患者的性别、年龄、大肠癌的部位、肿瘤组织类型无关。Western blot结果显示BTG2、c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9、P53和P21在不同肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移组间差异有统计学意义,且BTG2蛋白表达水平与c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9呈显著负相关,与P53和P21呈正相关。随访结果显示BTG2表达水平与患者预后密切相关。结论 BTG2表达减少或缺失在大肠癌发生及演进过程中起重要作用,其分子机制可能与一些关键细胞周期因子和某些抑癌基因作用失调有关。

癌基因MDM_2和抑癌基因p53在肉瘤组织中的变化及其相关性

目的：研究ＭＤＭ２癌基因和ｐ５３抑癌基因在人肉瘤发生中的作用。方法：应用分子杂交和免疫组化技术检测了５０例肉瘤组织、１３例良性间叶瘤和１０例癌组织中ＭＤＭ２及ｐ５３的分子改变。结果：ｐ５３过表达率在肉瘤为２４／５０（４８％）；ＭＤＭ２扩增和过表达在肉瘤为１９／４９（３８．８％）和２７／４９（５５％），而在良性间叶瘤分别为１／１３（７．７％）和１／１２（８．３％），癌组均为１／１０（１０％）；ＭＤＭ２基因的异常在不同类型肉瘤间存在差异性；ＭＤＭ２扩增和过表达间存在不一致性：１９例扩增中１６例有过表达，而１１例过表达者无基因扩增。两基因改变的相关分析发现，２４例ｐ５３阳性中１８例有ＭＤＭ２改变。结论：ＭＤＭ２癌基因异常与间叶性肿瘤的恶性表型高度相关，并有一定类型特异性；

抑癌基因p27^(Kip1)及其Ser^(10)突变体对HepG_2细胞周期和增生的影响

目的:p27kip1氨基端第10号位置的丝氨酸(Ser10)磷酸化位点是该蛋白分子中最重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点丝氨酸为丙氨酸(S10A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增生的影响.同时比较野生型p27kip1和Ser10突变型p27kip1基因转染对肝癌细胞株HepG2细胞周期和增生的影响. 方法:应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1质粒DNA瞬时转染HepG2细胞,免疫细胞化学检测p27kip1蛋白的表达和细胞内分布,流式细胞计数仪分析细胞周期变化. 结果:野生型和突变p27kip1蛋白转基因后HepG2细胞均可以G0期阻滞,且突变型的阻滞作用强于野生型(P<0.05),细胞生长受到抑制.无血清培养96 h同步化于G0期,野生型和突变型p27kip1均分布于细胞核;而在20mL/L血清继续培养8 h后野生型向细胞质转运而主要分布于细胞质, 突变型仍然滞留于细胞核. 结论:p27kip1的过度表达可明显抑制HepG2细胞的增生, p27kip1Ser10磷酸可能介导其细胞核外转运的重要分子机制.

抑癌基因CDKN2的变异与原发性胃癌的关系

目的 研究ＣＤＫＮ２ 基因的突变、缺失与原发性胃癌发生发展的关系。方法 用ＰＣＲ和银染ＳＳＣＰ分析了４５ 例胃癌组织和２２ 例相应正常胃粘膜中ＣＤＫＮ２ 基因的突变和纯合性缺失情况。结果 发现ＣＤＫＮ２ 基因的纯合性缺失率为２８－９ ％ ，其中β型转录子的缺失率为１５－６ ％ ；无一例有ＣＤＫＮ２ 基因的突变。结论 胃癌的发生发展与ＣＤＫＮ２ 基因纯合性缺失密切相关，与ＣＤＫＮ２基因的突变无关，β型转录子参与维持ＣＤＫＮ２ 基因的正常功能，其纯合性缺失与胃癌的发生有关。

新的候选抑癌基因NOEY2在胰腺肿瘤中的表达

目的 探讨NOEY2基因与胰腺癌的相关性。方法 病理确诊的胰腺肿瘤26例（23例胰腺导管腺癌、3例胰岛细胞瘤）,12例正常胰腺,8株人胰腺癌细胞株（Pu-Pan-1、Miapaca-Ⅱ、Panc-1、CFpac-1、Aapc-1、BXPC3、HS766T、SW1990）。用NOEY2特异性抗体进行免疫组化检测NOEY2基因编码蛋白在胰腺癌组织的表达;用该基因的cDNA探针进行RNA印迹杂交分析上述胰腺癌细胞株有无NOEY2 mRNA表达;用免疫细胞化学的方法检测NOEY2基因编码蛋白在胰腺癌细胞株的表达。结果 （1）正常人胰腺导管、腺泡、胰岛细胞胞浆中均可见到NOEY2蛋白的表达;（2）23例胰腺导管腺癌组织中有11例胰腺癌组织无NOEY2蛋白表达,占47.8％,又可分为二种类型,一种为肿瘤组织表达阴性、正常组织表达阳性（2/11）,另一种为肿瘤组织、正常组织表达均阴性（9/11）;12/23例（52.2％）肿瘤组织癌旁组织表达均阳性。（3）本实验未发现NOEY2蛋白与胰腺癌分化程度之间有相关性;（4）3例胰岛细胞瘤均无NOEY2蛋白表达;（5）RNA印迹杂交分析及免疫细胞化学结果显示8个胰腺癌细胞株均无NOEY2基因在mRNA和蛋白水平的表达。结论 NOEY2基因蛋白在正常人胰腺广泛表达,但在胰腺癌组织中蛋白表达有较高比例的缺失,在胰腺癌细胞株中不仅有蛋白表达缺失,同时NOEY2基因mRNA表达?

抑癌基因GKN2在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测抑癌基因GKN2在人胃癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法选取70例胃癌组织及其相应的癌旁正常组织标本,利用RT-PCR法检测GKN2的mRNA表达。另外选取70例胃癌组织和70例正常人胃组织标本,利用免疫组织化学法检测GKN2的蛋白表达。结果 GKN2mRNA在癌旁正常胃组织中阳性表达率为100%,高于胃癌组织的10%(χ~2=63.00,P<0.001)。GKN2蛋白分布在正常胃黏膜上皮细胞的胞浆内,在正常胃组织中GKN2蛋白表达阳性率为100%,高于胃癌组织的7%(χ~2=121.33,P<0.001)。结论抑癌基因GKN2在正常胃黏膜中高表达,但是在胃癌中表达下调甚至缺失,这可能是导致胃癌发生的重要因素。