拉米夫定耐药与HBV YMDD变异关系的研究

探讨拉米夫定耐药与HBVYMDD变异之间关系。对拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎进行肝功能、乙肝病毒血清学指标、YMDD耐药基因变异检测。 10 2例慢性乙型肝炎血清中 ,HBVDNA阴性 6 3例 (6 1 8% ) ,39例阳性 ,其中HBVYMDD变异 2 2例 ,变异率为 5 6 4 % ,并与用药时间长短有关 ,9- 17个月和 18- 30个月变异检出率分别为5 1 7%和 70 % ,HBVYMDD变异组ALT为 (5 9 94± 8 6 0 )U/L ,显著高于无HBVYMDD变异组的 (5 0 6 0± 6 12 )U/L。基因芯片技术检测HBVYMDD变异有一定的临床意义 ,YMDD变异是HBV对拉米夫定耐药的原因之一。

基因芯片和聚合酶链反应限制性片段长度多态性法检测拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者YMDD变异

目的 对基因芯片和聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)两种方法检测YMDD变异进行比较。方法 取 40例临床考虑拉米夫定耐药的患者血清 ,分别用基因芯片和PCR RFLP法检测YMDD基序变异情况。随机抽取 8份血清标本进行测序验证两种方法的准确性。结果 40例患者血清标本中 ,用基因芯片法检测出YMDD变异阳性标本 2 7例 ,其中 ,YIDD变异 4例 ,YVDD变异 16例 ,YVDD/YMDD共存 12例 ;YIDD与YVDD混合变异 7例。用PCR RFLP法检测出变异阳性标本 2 1例。在变异株中 ,YIDD变异和YVDD变异各 9例 ,YIDD/YVDD混合变异 3例 ,明显低于基因芯片的检出率。结论 1、用基因芯片能快速灵敏地检测YMDD变异情况 ,并能检测到患者体内变异株与野生株混合存在形式 ;2、基因芯片能同时检测两种YMDD变异株和YMDD野生株 ,优于PCR RFLP法 ,适用于临床检测乙型肝炎病毒YMDD变异。

拉米夫定耐药者体内乙型肝炎病毒水平与YMDD变异关系的研究

目的 :探讨拉米夫定耐药者 YMDD变异类型、变异率及与体内病毒水平的关系。方法 :荧光定量 PCR检测拉米夫定耐药者血清 HBV-DNA浓度 ,PCR产物直接测序检测 YMDD变异情况。结果 :5 2例拉米夫定耐药者 YMDD变异检测结果 ,其中有 2 4例发生 YMDD变异 ,占 46.1 5 % ,并且 YMDD(酪氨酸、蛋氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸 )基序发生三种变异 ,第一种类型为 YVDD变异 ,共有 1 1例 (变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 A741→ G变异 ;第二种类型为 YIDD变异 ,共有 1 1例(变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 G743→ T变异 ,其中有 1例核苷酸 G743→ C变异也引起 YIDD变异 ;第三种类型为 YLDD变异 ,共有 2例 (变异率 3 .85 % ) ,即核苷酸 A741→ T变异。 YMDD野生型血清病毒浓度为 7.0× 1 0 6± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml,YVDD、YIDD、YLDD变异型病毒浓度分别为 7.5×1 0 6 ± 1 .5× 1 0 6 copies/ ml、7.6× 1 0 6 ± 1 .7× 1 0 6 copies/ ml、6.9× 1 0 6 ± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml;经 t检验 ,YMDD变异型与 YMDD野生型血清病毒浓度之间的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 :除已报道的拉米夫定耐药者 YMDD基序发生 YVDD和 YIDD变异外 ,还存在 YLDD变异 ;拉米夫定耐药者体内乙肝病毒水平与发生

拉米夫定耐药HBV毒株伴随变异与YMDD变异的关系

目的研究拉米夫定耐药（LAMr）HBV毒株伴随变异及其与YMDD变异的关系。方法PCR方法扩增LAMr病人血清的HBVRT区基因，直接测序PCR产物。对测序发现含有LAMr变异的105例病人血清检测变异时HBVDNA载量，分为第1组含rtV173L／M或rtV207M／L／I变异、第2组含rtS213T变异、第3组不含此3种变异，共3组进行分析。结果①拉米夫定（LAM）治疗B、C基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染的慢性乙型肝炎（CHB）病人耐药主要变异位点为YMDD变异，可以伴随rtL180M、rtV173L／M、rtV207M／L／I、rtS213T等变异，LAMr变异形式构成与基因型无关（P=0．2620）。②rtM204I、rtM204V、rtM204V／I变异分别有38．8％、89．2％、73.3％伴随其它位点变异（P〈0．0001）。③3组测序发现变异时HBVDNA载量分别为（7．43±0．16）log10拷贝／mL、（5．01±0．90）log10拷贝／mL、（5.75±0．34）log10拷贝／mL（F=4．48，P=0．0240）。结论LAM治疗B、C基因型HBV感染的CHB病人耐药变异形式构成无显著差异，rtM204V变异较rtM204I变异更易伴随其它位点变异，伴随变异rtV173L／M、rtV207M／L／I可以增强YMDD变异HBV毒株的复制能力。

YMDD变异阴性的拉米夫定表型耐药患者体内乙型肝炎病毒逆转录酶基因序列分析

目的:了解YMDD变异阴性的拉米夫定耐药患者体内HBV逆转录酶基因变异情况.方法:采用PCR产物直接测序方法对3例YMDD变异阴性的拉米夫定耐药患者体内HBVRT区基因序列进行分析.结果:3份标本核苷酸变异率为0.24—0.85%,氨基酸变异率均为0.73%,较既往GenBank中收录的HBVC型基因序列的变异率无明显差别.发现以往已发表序列中未出现的新型变异-rtQ125N变异.结论:部分拉米夫定表型耐药现象的出现可能与HBVRT区基因变异无关.

拉米夫定耐药株感染者基因型、HBV DNA及多聚酶P区基因变异的关系

目的分析拉米夫定耐药株感染者的基因型、HBV DNA及多聚酶P区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测83例拉米夫定耐药患者HBV基因型、HBV DNA及多聚酶P区的基因变异。结果 83例拉米夫定耐药患者B基因型26例,C基因型57例,B型YIDD变异率69.2%(18/26)、YVDD变异率30.8%(8/26),C型YIDD变异率63.2%(36/57)、YVDD变异率33.3%(19/57),B、C基因型发生YMDD变异模式无统计学差异(P>0.05);B型rtM204I突变率53.8%(14/26),综合变异率46.2%(12/26),C型rtM204I变异率26.7%(15/57),综合变异率73.7%(42/57),B、C基因型变异位点类型有统计学差异(P<0.05);耐药变异时C型HBV DNA水平(6.60±1.42)lg拷贝/毫升高于B型(5.88±1.46)lg拷贝/毫升,YIDD变异时C型(6.40±1.48)lg拷贝/毫升、B型(5.68±1.32)lg拷贝/毫升,YVDD变异时C型(6.18±1.87)lg拷贝/毫升、B型(6.82±1.45)lg拷贝/毫升;rtM204I变异时B型(6.12±1.45)lg拷贝/毫升、C型(5.57±1.45)lg拷贝/毫升(P>0.05);综合变异时C型(6.68±1.51)lg拷贝/毫升,B型(5.76±1.57)lg拷贝/毫升(P<0.05)。结论 C基因型拉米夫定耐药发生率高于B型;基因型与变异位点类型有关,与YMDD变异模式无关;耐药变异时HBV DNA水平C型高于B型,与综合变异有关,与YMDD变异模式无关。

拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒多聚酶区变异分析及恩替卡韦治疗观察

目的观察拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者多聚酶区耐药基因突变的分布,以及恩替卡韦治疗拉米夫定失效患者的疗效。方法采用PCR产物直接测序法对45例出现拉米夫定变异的慢性乙肝患者血清进行检测(HBV)P区基因RT区序列耐药变异;应用恩替卡韦1 mg/d进行治疗,分别在治疗前、治疗后12周、24周、36周、48周检测肝功能(ALT)、HBV-DNA水平、HBV血清标志物的变化;以初始应用恩替卡韦0.5 mg/d治疗的慢性乙型肝炎患者作为对照研究。结果 45例拉米夫定耐药患者中32例(71%)出现YMDD变异,19例(42%)发生rtL180M+rtM204V联合变异;LAM耐药患者经恩替卡韦治疗48周后有88.9%出现血清ALT复常和血清HBV DNA转阴,与对照组相比无显著差异(P>0.05);其中30例HBeAg阳性的LAM耐药患者中有3例发生HBeAg/抗-HBe血清转换率,明显低于对照组(P<0.05);治疗过程中HBV DNA均值的变化也明显低于对照组(P<0.05)。结论拉米夫定耐药患者HBV P区基因变异呈现多样性,恩替卡韦1 mg/d治疗拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者有效。

HBV PRt204+180以外位点变异与拉米夫定耐药关系探讨

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBVP区常见耐药位点Rt204±180以外位点变异与拉米夫定耐药关系。方法收集27例接受拉米夫定初治患者治疗基线和获得病毒学应答后出现病毒学反弹的血清标本,采用PCR产物直接测序技术,检测治疗基线和病毒学反弹时HBV DNA的P区变异位点,对位点变异与拉米夫定耐药关系进行分析。结果 HBVP区的rtA181V、rtM171R、rtN/H238T/A和rtI187V变异不伴随有P区rtM204V/I±rtL180M耐药位点的变异。结论 HBVP区的rtA181V、rtM171R、rtN/H238T/A和rtI187V变异可能是拉米夫定耐药的新变异位点。

耐拉米夫定HBV毒株伴随变异与YMDD变异的关系

目的研究耐拉米夫定（LAMr）HBV毒株伴随变异及其与YMDD变异的关系。方法PCR方法扩增LAMr病人血清的HBVRT区基因，直接测序PCR产物。对测序发现含有LAMr变异的105例病人血清检测变异时HBVDNA载量，分为第1组含rtV173L／M或rtV207M／L／I变异、第2组含rtS213T变异、第3组不含此3种变异，共3组进行分析。结果①拉米夫定（LAM）治疗B、C基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染的慢性乙型肝炎（CHB）病人耐药主要变异位点为YMDD变异，可以伴随rtLl80M、rtV173L／M、rtV207M／L／I、rtS213T等变异，LAMr变异形式构成与基因型无关（P=0．2620）。②rtM204I、rtM204V、rtM204V／I变异分别有38．8％、89．2％、73．3％伴随其它位点变异（P〈0．0001）。③3组测序发现变异时HBVDNA载量分别为（7．43±0．16）log10拷贝／mL、（5．01±0．90）log10拷贝／mL、（5．75±0．34）log10拷贝／mL（B=4．48，P=0．0240）。结论LAM治疗B、C基因型HBV感染的CHB病人耐药变异形式构成无显著差异，rtM204V变异较rtM204I变异更易伴随其它位点变异，伴随变异rtV173L／M、rtV207M／L／I可以增强YMDD变异HBV毒株的复制能力。

阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药变异的慢乙肝患者疗效观察

随应用拉米夫定抗病毒治疗时间的延长，患者产生病毒耐药变异者逐渐增多。阿德福韦酯由于其抗病毒的位点与拉米夫定不同，因而对拉米夫定耐药变异者有效。我们对此类患者使用阿德福韦酯抗病毒治疗．现报告如下：

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者HBV P基因区突变序列分析

目的探讨拉米夫定耐药慢性乙型肝炎(CHB)患者HBVP基因逆转录酶区(RT区)序列突变特点。方法收集115例接受拉米夫定治疗的CHB患者的临床资料,采用PCR产物直接测序法检测HBVP基因RT区序列耐药变异。结果入选的115例患者中103例检测到拉米夫定基因型耐药变异,最主要的耐药变异模式为rtL180M+rtM204V和rtM204I,分别占58.3%和22.3%,其他耐药位点包括rtL80V/I、rtT184S和rtA200V,并在5例患者中检测到RT区3个位点的联合变异。结论对拉米夫定治疗患者的耐药检测除了HBVP基因区常见的rtL180和rtM204位点变异外,还应考虑其他位点的联合耐药变异。

阿德福韦酯对拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者的疗效观察

目的观察阿德福韦酯(ADV)治疗拉米夫定(LAM)耐药的慢性乙型肝炎的疗效及ADV的耐药情况。方法152例拉米夫定耐药(也称YMDD变异)的慢性乙型肝炎患者分为治疗1组和治疗2组各76例。治疗1组停用LAM,单用ADV10mg/d口服。治疗2组继续服用LAM100mg/d,加用ADV10mg/d联合服用。通过测定HBVDNA、ALT、HBeAg水平,比较治疗12周、24周、48周、96周时的HBVDNA转阴(应答)率、ALT复常率及HBeAg阴转率。结果治疗12周时2组的HBVDNA阴转率、ALT复常均明显高于1组(P<0.05)。24周时、48周时两组大部分HBVDNA能阴转,ALT能复常;两组无统计学差别(P>0.05);96周时1组有12例出现HBVDNA又转阳性,ALT异常,即出现了ADV耐药。2组疗效稳定,没出现ADV耐药。96周时两组HBeAg阴转率无统计学意义(P>0.05)。结论ADV与LAM联合治疗LAM耐药的慢性乙型肝炎比单用ADV治疗能更早显效,且能降低ADV耐药的发生。

拉米夫定耐药患者变异类型检测及乙型肝炎病毒基因丙氨酸转氨酶水平分析

在抗病毒治疗历程中,拉米夫定是第一个被批准用于治疗慢性乙型肝炎的核苷类抗病毒药物,能有效抑制慢性乙型肝炎病毒的复制且没有严重不良反应。然而,随着用药时间的延长很容易出现病毒耐药。拉米夫定耐药导致病毒学突破,并可使肝功能及组织学恶化。然而拉米夫定的有效性、安全性及相对价格较低在临床的应用中仍较为广泛。

拉米夫定耐药HBV毒株的RT区序列分析

目的 分析拉米夫定耐药HBV毒株部分RT区序列 ,以了解RT区YMDD基序之外HBV的变异情况。方法 采用PCR方法对拉米夫定临床耐药患者治疗前及耐药后血清HBV部分RT区序列进行扩增 ,扩增的核苷酸片段覆盖HBVRT的B区～E区及S基因“a”决定簇 ,对PCR产物进行直接测序 ,将HBVRT区核苷酸和推导的氨基酸序列与治疗前 5 0株HBV野毒株序列和Genebank中 77株不同基因型野毒株序列进行比较 ,同时对HBV进行血清分型。结果 60例患者有YMDD变异 ,其中 2 6例为adw亚型 ,占 43 .3 3 % ;3 4例为adr亚型 ,占 5 6.67%。另外 12例患者( 16.67% )未发现YMDD变异。 16例患者出现 11个RT保守区氨基酸变异 (不包括 5 5 0和 5 2 6位氨基酸变异 ) ;2 5例患者出现 19个HBVRT非保守区氨基酸变异。结论 拉米夫定耐药株的氨基酸变异不仅见于RTB区的 5 2 6和C区 5 5 0两个位点 ,B、C区的其他位点、保守区以及RT非保守区也可发生多个变异。

阿德福韦酯对拉米夫定耐药慢性乙型肝炎的疗效观察

拉米夫定（LAM）是最早用于治疗慢性乙型肝炎（CHB）的核苷类似物，能有效抑制乙型肝炎病毒（HBV）的复制而广泛应用于临床，但其所带来的YMDD耐药变异问题也日益突出。我们采取单用或联用阿德福韦酯治疗拉米夫定YMDD耐药的CHB患者，取得了一定的效果，现报道如下。

分子杂交技术在乙型肝炎拉米夫定治疗后YMDD变异检测中的应用

目的:采用分子杂交技术检测乙型肝炎拉米夫定治疗后发生的YMDD变异基因。方法:对100例服用拉米夫定12个月以上的乙型肝炎患者的血清,采用聚合酶链反应后进行分子杂交技术测定YMDD变异情况,同时采用乙肝P区基因测序技术进行结果比较。结果:100例拉米夫定治疗患者血清经分子杂交技术共检出33例YMDD变异,同测序结果吻合率达96.97%,灵敏度达103IU/ml。33例YMDD变异者共有6种不同的变异组合。结论:分子杂交技术检测HB-VYMDD变异具有简单、准确、快速、经济实用等特点,具有很好的临床应用价值。

拉米夫定抗乙型肝炎病毒耐药性的研究

乙型肝炎是引起慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要因素。乙型肝炎的发病机理复杂,但病毒复制是肝损伤的起动因素。干扰素(IFN)作为抗HBV制剂已广泛用于临床,经过近20年的研究证明,α-IFN是治疗慢性乙型肝炎(CHB)的有效药物。但IFN疗效仅30％～40％,由于IFN的疗效、毒副反应、价格以及使用不便等因素使其应用受限。目前,对HBV逆转录酶有抑制作用的药物拉米夫定(Lamivudin,3TC)作为新核苷类抗病毒药已受到关注。在体外和动物模型中证明有很强的抗HBV复制作用。临床实验也证明3TC可迅速降低HBV DNA的浓度,改善肝组织学的病变。

基线维生素D3水平与拉米夫定耐药的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者使用拉米夫定抗病毒治疗后的耐药发生与治疗初期维生素D3的关系,为抗乙型肝炎病毒治疗方案的制订优化提供依据。方法采用病例对照研究设计,以采用拉米夫定抗病毒治疗超过3年以上的慢性乙型肝炎发生耐药性者为病例组,未发生耐药性者为对照组,回顾性收集和分析治疗初期维生素D3水平、基线HBV DNA水平等因素,并采用单因素和多因素回归模型进行分析。结果发生耐药性的病例组有38例,未发生耐药性的对照组49例。基线HBV DNA水平与维生素D3水平呈负相关(r=-0.534,P<0.0001)。单因素和多因素分析结果显示高HBV DNA水平是耐药发生的危险因素(OR=3.064,95%CI:1.077-8.719,P=0.036),高水平维生素D3却可以减少耐药性的发生(OR=0.920,95%CI:0.882-0.959,P<0.0001)。结论对慢性乙型肝炎使用拉米夫定抗病毒治疗患者,应关注其维生素D3水平以及HBV DNA水平,早期进行干预,从而减少耐药性的发生。