乳酸菌拓扑异构酶parC基因突变与其耐氟喹诺酮类药的相关性

目的探讨parC基因的改变与乳酸菌耐氟喹诺酮类抗生素的相关性。方法采用纸片法和打孔法测定15株菌对诺氟沙星和氧氟沙星的敏感性。PCR扩增检测parC基因氟喹诺酮类耐药决定区相关片段并测序,比对敏感菌株和耐药菌株的测序结果,分析突变位点。结果 NN、NN2、NN3等7株为耐药菌株,4对引物PCR扩增检测parC基因,耐药菌株和对照菌株比较,没有发现parC基因的变化。结论乳酸菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与其拓扑异构酶ⅣparC基因的突变无关。

铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法 ,扩增 2 6株临床分离铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA0 1菌株的Ⅱ类拓扑异构酶 gyrA、gyrB、parC和 parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区 (QRDR)基因片断 ;并对铜绿假单胞菌II类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明 90 %以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变 (2 6株中有 2 4株 )。突变主要发生在 gyrA基因 (2 2株 )和 parC基因 (14株 )上 ,其中 gyrA基因的第 83位氨基酸密码子表现出高频突变 (2 2株中有 2 1株 ,ACC→ATC ,占 90 % ) ,parC基因第 80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率 (14株中有 12株 ,TCG→TTG ,占 60 % ) ,4株耐药株的 gyrB和 3株耐药株的 parE基因发生单点突变 ,2株耐药株II类拓扑异构酶基因未检测到突变。用二倍稀释法 ,测定部分喹诺酮和 β 内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用 2 4株突变株对诺氟沙星呈现 10 0 %的耐药 ;对左氧氟沙星 65 %的耐药 ;40 %的菌株对哌拉西林表现出耐药 ;3 0 %的菌株对头孢他啶耐药 ;75

基底型乳腺癌中拓扑异构酶Ⅱα基因状态分析

目的探讨基底型乳腺癌中拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡalpha,TOP2A)基因的扩增或缺失状态。方法采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法对53例基底型乳腺癌和对照组33例管腔A型乳腺癌石蜡包埋标本进行TOP2A基因检测。结果 53例基底型乳腺癌中,TOP2A基因异常者21例,其中扩增14例(4例为簇状扩增、10例为点状扩增)、缺失7例;TOP2A基因正常者32例。管腔A型乳腺癌TOP2A基因1例扩增、6例缺失。基底型乳腺癌中TOP2A基因异常的发生率高于管腔A型乳腺癌(P<0.05)。结论基底型乳腺癌中存在较高比例的TOP2A基因异常,可作为蒽环类化疗药物的治疗靶点。

禽源多杀性巴氏杆菌拓扑异构酶基因突变与耐恩诺沙星的相关性

为探讨gyrA和parC基因的突变与禽源多杀性巴氏杆菌耐氟喹诺酮类药的相关性,采用微量稀释法测定84株临床分离菌对恩诺沙星的敏感性,PCR扩增其gyrA和parC基因并测序,分析基因编码的氨基酸序列与耐药表型的关系发现,GyrA发生单点突变(S94→I或S94→R)时,细菌对恩诺沙星的耐受性明显提高,发生双点突变(S94→I和D98→N),细菌则必然获得对恩诺沙星的耐药性。ParC发生单点突变(S84→L)时,细菌对恩诺沙星的耐受性也提高。ParC的变异能与GyrA的变异起协同作用,共同提高细菌对恩诺沙星的耐受性。这些结果为今后以gyrA和parC基因为靶位,建立快速鉴定禽源多杀性巴氏杆菌对氟喹诺酮类药耐药性的方法提供理论依据。

腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响

目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。

乳腺癌分子分型与拓扑异构酶Ⅱα基因异常关系的研究

目的探讨乳腺癌分子分型与拓扑异构酶Ⅱα基因(TOP2A)扩增或缺失的关系。方法采用免疫组织化学的方法,检测142例乳腺癌患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人类表皮生长因子受体2(Her-2),同时采用显色原位杂交(CISH)检测Her-2基因情况,根据结果进行分子分型,应用荧光原位杂交(FISH)检测TOP2A基因扩增或缺失状况。结果 142例中,LuminalA型53例,LuminalB型27例,Her-2过表达型49例,三阴型13例。TOP2A基因扩增19例,未扩增123例。不同分子分型中TOP2A基因的扩增情况差异有统计学意义(χ2=11.25,P<0.05),主要发生在Her-2型及LuminalB型。结论 TOP2A基因扩增主要存在于HER2基因扩增患者中,因此常规免疫组织化学检测之后,分子分型为Her-2型及LuminalB型的乳腺癌,应常规增加TOP2A的基因检测。

原发性肝癌拓扑异构酶Ⅱα的表达及其与P53基因突变之间的关系

目的研究原发性肝癌拓扑异构酶Ⅱα(Topoisom eraseⅡ,αToPoⅡα)的表达及临床意义,并探讨其与p53基因突变之间的关系。方法免疫组织化学法和W estern B lotting方法检测57例未经化疗过的原发性肝癌肿瘤组织和32例肝硬化组织ToPoⅡα蛋白的表达,并用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析p53基因7、8外显子的突变。结果To-PoⅡα蛋白在肝癌组织中阳性率为87.7%(50/57),在肝硬化组织中阳性率为50%(16/32),两者有显著差异(P<0.05)。蛋白印迹结果显示肝癌组织中ToPoⅡα蛋白表达显著高于肝硬化组织(P<0.05),高分化肿瘤与中、低分化的肿瘤组织之间有显著差异(P<0.05),有转移的病人高于无转移者(P<0.05).等级相关分析显示ToPoⅡα蛋白的表达与p53基因突变呈正相关(r=0.914,P=0.001)。p53基因突变组ToPoⅡ蛋白的表达显著高于野生型组(P<0.01)。结论ToPoⅡα的检测可作为肝癌分化程度的特异指标,同时p53基因突变可能诱导ToPoⅡα蛋白的表达。

耐药相关基因拓扑异构酶-Ⅱα在人胰腺癌细胞株中的表达

目的:探讨耐药相关基因拓扑异构酶鄄Ⅱα((TOPO鄄Ⅱα)在人胰腺癌细胞株中的表达。方法:通过逆转录鄄聚合酶链反应(RT鄄PCR)和Western鄄blot方法测定6株人胰腺癌细胞株(SW1990、Capan鄄2、AsPC鄄1、MiAPaCa鄄2、PANC鄄1、P3)中的TOPO鄄Ⅱα在基因和蛋白水平上的表达。结果:①TOPO鄄Ⅱα基因的表达以SW1990最高,PANC鄄1最低,与其他细胞株相比均具有显著性差异(P<0.05);②TOPO鄄Ⅱα蛋白的表达以SW1990、Capan鄄2较高,AsPC鄄1较低。SW1990,Capan鄄2与其余4株之间存在着显著性差异(P<0.05),而SW1990与Capan鄄2之间无显著性差异(P>0.05);AsPC鄄1、MiAPaCa鄄2、PANC鄄1、P3之间均无显著性差异(P>0.05)。结论:胰腺癌细胞对TOPO鄄Ⅱα抑制剂的低敏感性与TOPO鄄Ⅱα蛋白的低水平表达有关,TOPO鄄Ⅱα可能参与了胰腺癌对化疗的耐药。

玉米DNA拓扑异构酶Ⅰ基因片段的克隆

采用同源克隆结合cDNA末端快速扩增反应策略,对玉米DNA拓扑异构酶基因Top1片段进行克隆。结果表明:所克隆基因片段编码的氨基酸序列与水稻DNA拓扑异构酶序列具有较高的相似性。Top1在玉米胚乳中表达量最高,在玉米其他组织中也有表达。对玉米自交系1145 BAC文库进行筛选,获得了Top1基因的阳性BAC克隆。

拓扑异构酶II基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌

目的：探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR～RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法：用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2，先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR（nested PER）扩增，扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶HincⅡ和HinfⅠ酶切，进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析，根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌。结果：通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3390bp、dPsD2能扩增出2380bp的片段，而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带。扩增出的产物分别经HincⅡ和HinfⅠ酶切后表现为58—1670bp长短不等的片段组合，根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌。结论：拓扑异构酶Ⅱ基因区的巢式PCR—RFLP方法，是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法。

拓扑异构酶Ⅱα mRNA在乳腺癌中的表达及其临床意义与基因富集分析

目的探讨拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)mRNA在乳腺癌中的表达情况及其临床意义,并预测受TOP2A调控而影响乳腺癌发展的基因集。方法在基因表达汇编数据库中收集GSM42568表达谱数据及对应的临床信息,分析TOP2A mRNA在104例乳腺癌组织和17例正常乳腺组织间的表达情况,以及TOP2A mRNA与乳腺癌临床病理特点的相关性;比较TOP2A mRNA高表达组、低表达组的生存情况;在TOP2A mRNA高表达样本中利用基因富集分析方法预测受TOP2A调控的相关基因集。结果乳腺癌组织TOP2A mRNA表达水平高于正常乳腺组织(P<0.05);在乳腺癌患者中,TOP2A mRNA的表达与T分期有关(P<0.05),与年龄、肿瘤分级、淋巴结转移状态、雌激素受体状态无相关性(P>0.05)。TOP2A mRNA高表达组的中位生存时间及无病生存率低于低表达组(P<0.05)。在TOP2A mRNA高表达样本中富集了碱基切除修复、细胞周期、DNA复制、蛋白酶体、RNA降解、剪接体等相关基因集。结论 TOP2A可能是乳腺癌的致癌基因,其能影响乳腺癌患者的预后,有可能成为乳腺癌的新诊疗靶点。

拓扑异构酶Ⅱα基因状态与乳腺癌对蒽环类药物化疗敏感性的关系

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。全球每年的发病人数超过100万。我国一些大中城市的发病率近年来呈直线上升状态，以蒽环类药物为主的化疗方案在术后辅助化疗中应用广泛，拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）是蒽环类药物的主要作用靶点。虽然肿瘤对药物有很高的反应性，但蒽环类药物有显著的心脏毒性，因此有必要掌握蒽环类药物的疗效预测指标，本研究回顾222例术后使用蒽环类药物化疗的乳腺癌患者（术前未使用其他药物治疗）结合TopoⅡα基因状态进行疗效分析。

粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

目的检测粪肠球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性，探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对60株粪肠球菌临床分离株的体外抗菌活性，随机筛选出11株对环丙沙星不同程度耐药菌，PCR扩增gyrA，gyrB，parC，parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR），产物测序后分析。结果6种药物的相对抗粪肠球菌活性（MIC50，MIC90）从强到弱为：妥舒沙星〉加替沙星，司帕沙星〉左氧氟沙星〉氧氟沙星，环丙沙星；以妥舒沙星抗菌活性最强，氧氟沙星和环丙沙星抗菌活性最差；序列比较发现，有9株耐药株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变，突变发生在gyrA基因（6株）和parC基因（9株），其中编码gyrA的Ser83→Ile，Arg和编码parC的Ser80→Ile，Arg的密码子表现出高频突变，gyrB和pare编码的氨基酸序列没有改变；未发现gyrA突变单独存在，同时具gyrA和parC突变的MIC值是仅具parC突变菌株MIC值的4倍以上。结论氟喹诺酮类抗菌药新品种妥舒沙星、加替沙星和司帕沙星的抗粪肠球菌活性较老一代药物更强；粪肠球菌对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药；gyrA基因83，87位突变及parC基因80，84住突变都可引起粪肠球菌对氟喹诺酮类药物产生耐药，但以parC基因80住突变为主；低耐药株往往是parC基因单位点突变，高耐药株同时合并有gyrA基因双位点突变。

拓扑异构酶Ⅱa基因表达检测对乳腺癌多西他赛+阿霉素+环磷酰胺新辅助化疗方案疗效的预测作用

目的探讨拓扑异构酶Ⅱa(TOPⅡA)基因表达检测对乳腺癌多西他赛+阿霉素+环磷酰胺(TAC)新辅助化疗方案疗效的预测作用。方法选择我院2012年1月至2016年12月收治的原发乳腺癌患者40例作为研究对象,给予多西他赛+阿霉素+环磷酰胺(TAC)新辅助化疗方案治疗,并评价化疗疗效,同时检测TOPⅡA基因扩增和蛋白表达情况。结果 40例可评价疗效的乳腺癌患者中,CR 4例(10.0%),PR 23例(57.5%),SD 12例(30.0%),PD 1例(2.5%);Miller-Payne分级:5级2例(5.0%),4级10例(25.0%),3级9例(22.5%),2级13例(32.5%),1级6例(15.0%)。TOPⅡA基因扩增13例,无扩增27例;TOPⅡA蛋白表达(-)～(+)27例,(++)～(+++)13例。27例TOPⅡA蛋白表达(-)～(+)组患者中,TOPⅡA基因扩增8例,无扩增19例;13例(++)～(+++)组患者中,扩增5例,无扩增8例。TOPⅡa基因扩增和TOPⅡA蛋白过表达无关(P>0.05)。结论 TOPⅡa不是能够有效预测乳腺癌新辅助化疗敏感性的指标。

乳腺浸润性导管癌拓扑异构酶Ⅱa基因及其相关蛋白与临床病理特征的关系

目的探讨乳腺浸润性导管癌拓扑异构酶Ⅱa基因(TOP2A)及其相关蛋白与临床病理特征的关系。方法选择2017年6月至2018年6月本院收治的乳腺浸润性导管癌患者80例,对其TOP2A基因进行检测,观察分析其异常情况及与相关蛋白和病理特征的关系。结果 80例乳腺浸润性导管癌患者中16例存在TOP2A基因异常,异常率为20.00%,包括14例(17.50%)基因扩增和2例(2.50%)基因缺失。TOP2A基因异常与年龄、部位及腋窝淋巴结转移无相关性(P>0.05),与组织学分级、肿瘤大小呈显著相关(P<0.05)。TOP2A基因异常与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)蛋白表达无相关性(P>0.05),其基因扩增随着Ki67蛋白和表皮生长因子受体2(HER2)蛋白表达增强而增高(P<0.05)。结论乳腺浸润性导管癌TOP2A基因及其相关蛋白与部分病理特征存在显著相关性,检测TOP2A基因及其相关蛋白可为治疗提供依据。

抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ可抑制炎性基因的表达并保护机体免受炎症损伤

固有免疫反应是机体抵御病原微生物的第一道防线。机体感染病原微生物后，有许多基因的转录和表达异常与过度炎症导致的组织损伤相关。来自美国西奈山伊坎医学院的Marazzi研究团队在对DNA拓扑异构酶I（DNA topoisomerase I，TopI）的研究中发现，TopI能够在病原微生物感染后特异地上调RNA聚合酶Ⅱ的转录活性，从而引起过度炎症反应和组织损伤。

鸡源性沙门氏菌氟喹诺酮类耐药株与拓扑异构酶Ⅳ关系研究

采用常规PCR法,以雏鸡沙门氏菌NCTC5776作为质控菌株,取临床分离的对5种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星和沙拉沙星)均耐药的9株鸡源性沙门氏菌耐药株,提取其染色体DNA。设计引物parCF和parCR、parEF和parER,分别扩增菌株拓扑异构酶Ⅳ parC基因和parE基因的氟喹诺酮类耐药决定区(QRDR),对PCR扩增产物进行测序及序列分析。与质控菌株相比,9株临床分离耐药株parC基因QRDR的核苷酸未发生任何突变,菌株37的parE基因第1434位碱基发生T→C突变,菌株55的parE基因第1434位碱基发生T→C突变,菌株60的parE基因第1517位碱基发生T→C突变。菌株60的parE基因第506位氨基酸发生F→S突变,即Phe→Ser取代,且位于QRDR内,其余菌株的氨基酸均未发生变化。上述结果提示,parE基因突变与耐药性有一定关系,但是拓扑异构酶Ⅳ变异可能并非沙门氏菌耐药性产生的主要原因。

鼻咽癌组织拓扑异构酶Ⅱα的表达及其临床意义

背景与目的:拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡα,TopoⅡα)是真核细胞中与DNA复制、修复等密切相关的一种蛋白酶,在多种肿瘤中TopoⅡα的表达水平与预后有关。本文探讨鼻咽癌组织中拓扑异构酶Ⅱα的表达与临床病理特征及其与预后的关系。方法:应用免疫组化法检测114例鼻咽癌患者的鼻咽肿瘤组织中TopoⅡα的表达。按TopoⅡα的表达水平将患者分为两组,用Kaplan-Meier法分析TopoⅡα的表达与肿瘤根治性放疗后复发、转移的关系。用多因素Cox模型分析患者复发的相关因素。结果:TopoⅡα在鼻咽癌组织中表达从0～90%不等,平均(22.63±21.92)%,以大于或等于20%的癌细胞表达TopoⅡα为阳性的判断标准,则阳性率为43.9%(50/114)。在不同性别、年龄、不同的WHO病理分型以及各T分期、N分期、临床分期的患者中,TopoⅡα的表达率无显著性差异(P>0.05)。TopoⅡα表达阴性组和阳性组患者的3年无复发生存率分别为93.1%vs74.3%(P=0.0027);3年无病生存率分别为77.9%vs58.9%(P=0.0091);3年无远处转移生存率分别为81.1%vs77.6%(P=0.566);多因素Cox模型分析筛选出TopoⅡα的表达是独立的与复发相关的因素,TopoⅡα阳性者无复发生存时间短。结论:部分鼻咽癌组织中存在TopoⅡα的高表达。

非小细胞肺癌拓扑异构酶Ⅱα的表达及其与Ki67、p53的关系

目的 研究非小细胞肺癌患者拓扑异构酶Ⅱα (TopoisomeraseⅡα ,TopoⅡα)的表达 ,并探讨其与Ki6 7蛋白、p5 3基因的关系。 方法 免疫组织化学SP法检测 94例无术前化疗史的非小细胞肺癌患者肿瘤组织TopoⅡα、Ki6 7蛋白的表达 ,并用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析p5 3基因 5、 6、 7、 8外显子的突变。结果TopoⅡα、Ki6 7蛋白阳性率分别为 30 % ( 2 8/ 94 )和 39% ( 37/ 94 ) ,且TopoⅡα的表达在鳞癌中明显高于腺癌 (P <0 0 5 ) ,中、低分化的肿瘤组织高于分化较好的肿瘤 (P <0 0 5、P <0 0 1) ,吸烟患者高于非吸烟患者 (P <0 0 1)。等级相关结果显示TopoⅡα的表达与Ki6 7呈正相关 (r =0 7381,P <0 0 1)且与p5 3基因也相关 (r =0 2 6 2 3,P<0 0 5 ) ,p5 3基因突变型组TopoⅡα的表达显著高于野生型组 (P <0 0 5 )。 结论 ①TopoⅡα的表达与肿瘤分化程度以及核增殖抗原Ki6 7显著相关 ,其检测可作为研究非小细胞肺癌增殖活性、分化程度的特异指标。②p5 3基因与TopoⅡα的相关性提示TopoⅡα的过表达可能受 p5