西洋参特有成分——拟人参皂苷F_(11)的分离、鉴定与含量测定

为了筛选西洋参的特有成分,以利对西洋参生药及其制品的定性鉴别和含量测定,为研制开发新药提供理论依据,本试验采用大孔树脂法和硅胶柱层析分离法对西洋参甲醇提取物进行分离纯化,将所得单体应用质谱1、3C-核磁共振谱、电子轰击质谱(EL-MS)鉴定,并用高效薄层层析法比较了人参、西洋参和三七的甲醇提取物,用薄层扫描法对西洋参各部位拟人参皂苷F11的含量进行了测定。结果表明:西洋参特有皂苷成分为拟人参皂苷F11,在西洋参的花蕾、花柄、果肉、茎叶和根中的含量依次为2.34%,1.93%,1.54%,0.97%和0.28%。

拟人参皂苷F_(11)在大鼠体内的药物代谢研究

目的 探讨拟人参皂苷F11在大鼠体内的药物代谢产物及其过程。方法 ip拟人参皂苷F11后 ,应用TLC分析排泄物中的代谢产物 ,并利用制备薄层分离制备代谢产物 ,通过波谱解析 (MS ,1HNMR ,13CNMR ,1H 1HCOSY)确定其结构。结果 从粪便中分离鉴定了 3种代谢产物 ,分别为拟人参皂苷RT5,ocotillol和 1个新的代谢产物F 3 1,并确定其结构为 6 O α L 吡喃鼠李糖基 ( 1- 2 ) β D 吡喃葡糖基 ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) 达玛 2 0 ( 2 4 ) 环氧 3 β ,6α,12 β,2 3 ,2 5 五醇 ( 6 O α L rhamnopyranosyl ( 1- 2 ) β D glucopyranosyl ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) dammar 2 0 ( 2 4 ) epoxy 3 β ,6α,12 β ,2 3 ,2 5 pentanol)。但在尿液和胆汁中并未发现任何代谢产物。 结论 拟人参皂苷F11不被肝脏代谢 。

HPLC测定妇康颗粒中拟人参皂苷F_(11)的含量

目的建立妇康颗粒中拟人参皂苷F11的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，以Xterra RP18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱为固定相，乙腈-水（32：68）为流动相；柱温为25℃；流速为1．0ml/min，检测波长为203nm。结果拟人参皂苷F11的测定在2．3—57．5μg范围内线性关系良好，平均回收率为99．97％，RSD为0．64％（n=6）。结论方法简便、准确，重复性好，可用于妇康颗粒的质量控制。

拟人参皂苷F11的生物活性研究进展

中药西洋参是五加科多年生的草本植物西洋参干燥的根,拟人参皂苷F11(PF11)最早在西洋参中发现,是西洋参区别于人参、三七的主要特征成分。本文旨在综述西洋参中特有皂苷PF11的生物活性,对揭示西洋参科学内涵及潜在药物研发具有重要意义。

人参皂苷Rg_1和拟人参皂苷PF_(11)的质谱区分

通过对人参皂苷Rg1和拟人参皂苷PF11进行电喷雾多级串联质谱比较,从而可以快速、简便、准确地区分2种人参皂苷的异构体:Rg1和PF11。

应用HPLC/ELSD法测定西洋参中拟人参皂苷F_(11)的含量

目的：测定西洋参中拟人参皂苷Ｆ１１的含量。方法：应用高效液相色谱法－蒸发光散射检测器（ＨＰＬＣ／ＥＬＳＤ），ＰｌａｔｉｎｕｍＣ１８色谱柱，乙腈－水（３０∶７０）为流动相，并优化选择了蒸发光散射检测器参数，测定了西洋参中拟人参皂苷Ｆ１１的含量。结果：拟人参皂苷Ｆ１１在２１９２～１０９６μｇ范围内呈良好线性（ｒ＝０９９９２，ｎ＝５），回收率为（１０２６±４１）％。结论：本方法精密度、重现性良好，适用于人参皂苷类成分的分析测定。

源内裂解液相色谱-质谱鉴别人参皂甙Rf和拟人参皂甙F_(11)

研究了利用源内碰撞诱导解离(in-source collision-induced d issoc iation)的高效液相色谱-大气压化学电离质谱(HPLC-APC I/MS)获取人参和西洋参的化学标志物———人参皂甙R f和拟人参皂甙F11的特征结构信息及鉴别人参和西洋参的方法。在乙腈-水梯度洗脱反相液相色谱及源内碰撞诱导解离条件下,能获得人参皂甙R f和拟人参皂甙F11的母核离子及去糖基离子的源内碰撞诱导解离谱,从其差别能清楚区分这对同分异构体。本方法对人参皂甙R f和拟人参皂甙F11的检出限能达到10-7g柱上样量,简单、快速,单次质谱实验就能鉴别人参和西洋参。

基于响应面法优化-UPLC-MS/MS测定西洋参中拟人参皂苷F_(11)的方法研究

目的利用响应面法优化西洋参质量标记物拟人参皂苷F_(11)的超声辅助提取工艺。方法超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定西洋参中拟人参皂苷F_(11)的含量。考察超声功率、超声时间、乙醇体积分数及液料比对拟人参皂苷F_(11)提取率的影响。在单因素试验基础上,采用Box-Beknhen设计优化超声辅助提取西洋参中拟人参皂苷F_(11)的提取工艺。结果单因素试验的结果显示,超声功率360 W,超声时间40 min,乙醇体积分数80%,液料比25 ml∶1 g时提取率最高。采用Box-Beknhen设计优化后的最佳工艺条件为:超声功率为370 W,超声时间为35 min,乙醇体积分数81%,液料比27 ml∶1 g,此条件下拟人参皂苷F_(11)提取率为(2.679±0.016)mg/g,与预测值一致。结论经优化得到的提取工艺稳定,提取率高,可用于西洋参中拟人参皂苷F_(11)的提取。

拟人参皂苷F11抗阿尔茨海默病作用的Aβ相关机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为Aβ过度沉积形成的老年斑、Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结等。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物。我们前期研究结果显示,PF11具有拮抗东莨菪碱、D-半乳糖和LPS所致实验动物的认知障碍的作用,同时显著降低过度磷酸化Tau并减轻神经炎症,提示PF11可能通过干预AD发病的多种机制来实现改善认知障碍的作用。本文进一步评价PF11对AD模型动物认知功能障碍的改善作用,尤其对Aβ的产生及清除的相关机制。方法 (1) 6月龄和12月龄APP/PS1转基因小鼠灌胃给予PF11(8 mg·kg-1),分别在给药3个月、1个月后进行行为学实验,并检测小鼠海马和皮质脑区中淀粉样蛋白前体蛋白(APP)及Aβ1-40的表达水平。(2)灌胃给予6月龄雄性SAMP8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg-1),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP、β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。(3)构建p EGFP-Rab5及p RFP-Rab7质粒并转染至原代小胶质细胞中,观察Rab转换。考察PF11对小胶质细胞吞噬、降解Aβ寡聚体(o Aβ)作用的影响,研究PF11对小胶质细胞内吞-自噬-溶酶体系统的保护作用。结果 (1) PF11给药可明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,并可显著减少小鼠海马和皮质脑区中APP与Aβ1-40的表达水平。(2) PF11(8和32 mg·kg-1)可显著改善SAMP8小鼠的认知能力,显著减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积,降低BACE1的表达水平,并可促进APP从细胞质向质膜的转运,提示PF11可能通过影响APP的剪切过程及亚细胞定位来减少Aβ的生成。此外,PF11(8和32 mg·kg-1)显著增加小鼠海马和皮质脑区中APP与Rab11的共定位,提示PF11可以促进APP与循环内含体结合从而减少Aβ的生成。(3) o Aβ可通过调节转录因子EB(TFEB)的核易位和延缓Rab的转化而阻碍溶酶体的自噬降解系统。PF11(30~100μmol·L-1)可通过促进自噬小体及内含体的成熟并恢复溶酶体功能,发挥促进小胶质细胞吞噬及降解Aβ的作用。结论 PF11可显著改善APP/PS1转基因小鼠、SAMP8小鼠的学习记忆障碍,同时减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积。其机制与减少Aβ生成、促进其降解等多环节有关。

拟人参皂苷-F11对大鼠血栓栓塞性脑卒中的防治作用及血栓性炎症相关调控机制

目的对缺血性脑卒中发病机制的深入研究发现,血小板参与的血栓性炎症在缺血-再灌注损伤中具有重要作用。拟人参皂苷-F11(PF11)是西洋参茎和叶中的一种三萜皂苷,本课题组前期研究发现其能够显著抑制大鼠永久性和短暂性脑缺血损伤。然而,PF11能否通过调节血栓性炎症而改善栓塞性脑缺血损伤尚未见报道。方法采用大鼠血栓大脑中动脉阻塞(eMCAO)模型,结合神经行为学、Western印迹、免疫荧光等检测技术,考察PF11对eMCAO所致大鼠脑缺血损伤的改善作用及血栓性炎症相关的调控机制。结果每天单次尾静脉注射(iv)给予PF11(4,12和36 mg·kg^(-1)),连续3 d,能够显著减小eMCAO大鼠的脑梗死体积、减轻脑水肿、改善神经功能障碍、抑制缺血侧皮质神经元的缺失以及改善缺血侧局部脑血流量。PF11(4,12和36 mg·kg^(-1),iv)可显著降低eMCAO大鼠缺血侧脑内血栓形成数量,减少缺血侧脑内纤维蛋白和血小板在微血管中的沉积,显著抑制大鼠缺血侧脑内炎症细胞的浸润和活化以及炎症介质的生成。进一步研究显示,PF11能够抑制eMCAO大鼠体内血管性血友病因子-糖蛋白Ib(vWF-GPIb)轴和接触-激酶通路的激活,表现为显著抑制血小板受体GPIbα和GPVI蛋白水平的上调,下调缺血侧脑内的vWF蛋白的表达,降低缺血侧皮质内FXIIa、前激肽释放酶水平和激肽释放酶生成,抑制激肽原释放缓激肽以及缓激肽1受体的上调。结论PF11可能通过抑制血栓性炎症发挥对eMCAO所致脑损伤的改善作用,其机制可能与抑制vWF-GPIb轴和接触-激酶通路的激活以及抑制血小板的黏附功能有关。

拟人参皂苷-F11对SAMP8小鼠认知障碍的改善作用及机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的、以认知障碍为主要症状的中枢神经系统退行性疾病。β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的淀粉样斑块(SP)和过度磷酸化的Tau蛋白引发的神经原纤维缠结(NFT)是AD临床上的主要病理特征。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物,本文通过自发快速老化(SAMP8)模型小鼠,从Aβ沉积和Tau过度磷酸化等方面,结合神经行为学、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等手段,进一步评价PF11对AD模型动物认知障碍的改善作用及潜在机制。方法灌胃给予6月龄雄性SAMP 8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg-1),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP和β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。结果灌胃给予PF11(8和32 mg·kg-1)3个月可以显著改善SAMP8小鼠的识别记忆和空间学习记忆障碍,显著增加SAMP8小鼠海马和皮质中突触后致密蛋白95的水平;显著降低SAMP8小鼠海马和皮质中胞浆淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和β-分泌酶(BACE1)的水平,减少海马和皮质中APP与晚期内含体(LE)的共定位,从而降低脑内Aβ的沉积;PF11可以显著提高SAMP8小鼠海马和皮质中异常降低的亮氨酸羧甲基转移酶(LCMT-1)水平,增加甲基化蛋白磷酸酶2A(PP2A)的水平,从而减少过度磷酸化的Tau。结论 PF11能够明显改善SAMP8小鼠的认知障碍,其机制与抑制海马和皮质脑区中APP淀粉样剪切途径进而减少Aβ沉积,以及增加PP2A活力进而减少Tau蛋白的过度磷酸化相关。

不同生长年限、不同采收月份加拿大原产地西洋参根中9种人参皂苷和2种拟人参皂苷含量动态变化研究

目的：研究加拿大原产地1-5年生5-9月采收西洋参根中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3和拟人参皂苷F11、RT5的含量动态变化。方法：采用RP-HPLC-ELSD法。Dimaonsil C18柱（250 mm×4.6mm,5μm）,柱温30℃,流动相为乙腈（A）-水（B）,流速1.0 m L/min,进样量为10μL,ELSD载气为氮气,气体流量为2.8 L/min,漂移管温度为100℃。采用SPSS 19.0统计软件对试验结果进行主成分和系统聚类分析。结果：建立了同时测定西洋参根中9种人参皂苷和2种拟人参皂苷类成分含量的RP-HPLC-ELSD方法。人参皂苷积累表明,1、2年生含量低,5-9月呈增加趋势;3-5年生样品,6、7月呈下降趋势,随后缓慢增加,9月均达到最大积累;从3年生9月开始样品的含量接近;除人参皂苷Rc的含量较低和部分样品中未检测到外,其他组分含量均很高,其中以人参皂苷Rd、Rb3和拟人参皂苷F11的含量最高。主成分分析表明,人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3和拟人参皂苷F11、RT5为加拿大西洋参的特征皂苷成分。系统聚类分析表明,除4年生7月（S18）样品外,1年生和2年生的西洋参根样品在皂苷组成和含量变化上接近;3-5年生各月的皂苷组成和含量变化没有明显的界限划分。结论：基于人参皂苷含量、西洋参栽培第4-5年的栽培种植成本、遭受涝害和病虫害的风险,建议从3年生9月开始,西洋参根可以视为同等质量。

西洋参中24(R)-拟人参皂苷提取工艺研究

目的 对西洋参中24(R) 拟人参皂苷(p F11)的提取工艺进行优化。方法 以p F11为指标物质,采用高效液相色谱 离子阱质谱联用正离子全扫描法检测,经方差分析筛选p F11的提取工艺。结果 p F11的提取工艺为:8倍量70%的乙醇加热回流3次,每次3h。结论 提取溶剂浓度对西洋参中p F11提取效率的影响最大。

荧光光谱法研究24(R)-拟人参皂苷元DQ与牛血清白蛋白的相互作用

采用荧光光谱法对24(R)-拟人参皂苷元DQ[24(R)-PDQ]与牛血清蛋白(BSA)的相互作用及机制进行了研究,并利用取代试验确定了24(R)-PDQ在BSA上的结合位点。结果表明:24(R)-PDQ与BSA在298,303,310 K下的结合常数分别为2.076×103,1.587×103,1.303×103L·mol-1;24(R)-PDQ对BSA的荧光猝灭类型为静态猝灭,主要作用力是氢键和范德华力;结合位点数近似为1,24(R)-PDQ与BSA的结合位点在BSA的SiteⅠ上。

UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、拟人参皂苷F_(11)、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F1的含量测定方法。方法:使用Waters ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为40℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果:6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r>0.998),平均加样回收率(RSD)分别为96.9%(2.2%)、100.1%(1.5%)、97.2%(1.8%)、98.5%(2.3%)、96.6%(2.8%)、100.2%(3.5%)。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。

拟人参皂苷元对急性心肌缺血损伤的保护作用

目的研究拟人参皂苷元对急性心肌缺血损伤的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉造成急性心肌缺血模型,观察拟人参皂苷元对大鼠心肌缺血后梗死范围和血清乳酸脱氢酶(LDH)的影响;用玻片法测定小鼠的凝血时间。结果拟人参皂苷元5、10、20mg/kg,可显著减小心肌缺血坏死面积,降低血清LDH的活性;5、10mg/kg拟人参皂苷元可显著延长小鼠的凝血时间。结论拟人参皂苷元对心肌缺血性损伤具有一定的保护作用。

威布尔分布拟合法预测人参皂苷Rh_2静脉注射亚微乳的化学稳定性

目的:研究人参皂苷Rh2静脉注射亚微乳(Rh2-SME)的化学稳定性,并预测其有效期。方法:采用高效液相色谱法测定乳剂中人参皂苷Rh2的含量,分别采用威布尔分布拟合法和经典恒温法处理恒温加速试验数据来预测其有效期,通过对长期试验数据进行统计分析估算其有效期。结果:威布尔分布拟合法预测的有效期与长期试验数据经统计分析估算的有效期较为接近,分别为29.58个月和30.44个月,经典恒温法预测的有效期为40.94个月,与长期试验结果有较大的误差。结论:威布尔分布拟合法与经典恒温法相比,更加适合微粒分散体系Rh2-SME化学稳定性的预测。

反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定西洋参和西洋红参中人参皂苷的含量

目的 建立一种同时测定西洋参和西洋红参中拟人参皂苷和人参皂苷含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定。色谱条件：迪马公司Diamonsil^TM C18色谱柱（5μm，250mm×4．6mm）；流动相为甲醇-水（71：29）；流速为0．95ml／min。ELSD参数：漂移管温度40℃；氮气压力：2．8Bar。结果 在选定的色谱条件下，反相高效液相色谱-蒸发光检测法符合精密度、准确度、线性（r〉0．999）的基本要求。3个浓度水平的回收率测定值在97．0％-104．9％之间，RSD在1．47％-2．89％之间。结论 该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好，可用于西洋参和西洋红参单体皂苷的含量测定。