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化学诱导激活型拟南芥突变体库的构建及分析 被引量:25
1
作者 张健 徐金相 +12 位作者 孔英珍 纪振动 王兴春 安丰英 李超 孙加强 张素芝 杨晓辉 牟金叶 刘新仿 李家洋 薛勇彪 左建儒 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1082-1088,共7页
利用化学诱导激活XVE(LexA-VP16-ER)系统构建了一个包含40000余个独立转化株系的拟南芥突变体库,并对其中的18000余个株系进行了初步的遗传学和表型分析鉴定。卡那霉素抗性分离比表明,51.6%的株系为单位点插入株系,T-DNA插入的平均拷贝... 利用化学诱导激活XVE(LexA-VP16-ER)系统构建了一个包含40000余个独立转化株系的拟南芥突变体库,并对其中的18000余个株系进行了初步的遗传学和表型分析鉴定。卡那霉素抗性分离比表明,51.6%的株系为单位点插入株系,T-DNA插入的平均拷贝数为每株系1.38个。部分T1代和T2代植株表现出了可见的形态变异,包括下胚轴长度、根长度、植株大小和颜色、叶子颜色和形态、开花时间、种皮颜色及结实情况等。对数个代表性突变株系表型及T-DNA插入位点侧翼序列进行了分析,结果表明突变体的表型是由于T-DNA的插入造成的,而且这些突变体中包括前人发现的AP2和AGAMOUS的等位基因。由于T-DNA标记或相邻的基因可被XVE系统诱导性的激活,或被T-DNA破坏导致功能缺失,该突变体库可以用于大规模筛选鉴定功能缺失性和功能获得性突变体。 展开更多
关键词 拟南芥 诱导性激活 突变体 T—DNA XVE
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烟草突变体筛选与鉴定方法篇:6.烟草T-DNA激活标签突变体侧翼序列筛选与鉴定 被引量:1
2
作者 崔萌萌 《中国烟草科学》 CSCD 2012年第6期109-111,共3页
通过激活标签技术(activation tagging)得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法,应用此种方法研究基因功能,不管是用正向或反向遗传学方法,都必须先获得插入位点的侧翼序列(flanking sequence)。随着拟南芥、水稻及烟草等作... 通过激活标签技术(activation tagging)得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法,应用此种方法研究基因功能,不管是用正向或反向遗传学方法,都必须先获得插入位点的侧翼序列(flanking sequence)。随着拟南芥、水稻及烟草等作物的侧翼序列数据库的不断完善及烟草全基因组测序的完成,越来越体现出激活标签技术对于推动烟草功能基因组学研究具有巨大的潜力。 展开更多
关键词 突变体筛选 激活标签 侧翼序列 鉴定方法 烟草 DNA 全基因组测序 功能基因组学
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烟草激活标签突变体库的创制和突变表型的初步鉴定 被引量:1
3
作者 刘峰 刘贯山 +5 位作者 张芊 王卫锋 丁昌敏 吕婧 路铁刚 王元英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期180-185,共6页
突变体库在烟草功能基因组研究中具有重要的作用,本研究建立了快速、高效农杆菌介导的烟草遗传转化体系,目前已经创制了3万份激活标签(pSK1015)突变体。利用PCR扩增对突变体库进行阳性检测,扩增结果表明其阳性率接近90%。大田T1代可视... 突变体库在烟草功能基因组研究中具有重要的作用,本研究建立了快速、高效农杆菌介导的烟草遗传转化体系,目前已经创制了3万份激活标签(pSK1015)突变体。利用PCR扩增对突变体库进行阳性检测,扩增结果表明其阳性率接近90%。大田T1代可视突变表型调查结果表明,在团棵期具有可视突变表型的概率为5.4%,在现蕾期具有可视突变表型的概率为3.6%。 展开更多
关键词 烟草 突变体 激活标签 表型
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影响拟南芥转化效率和激活标签丢失的因素分析 被引量:8
4
作者 王爱荣 吴智芳 +5 位作者 张丽丽 张春华 张冬梅 鲁国东 周洁 王宗华 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第3期298-302,共5页
用激活标签载体pSK I015和农杆菌介导的浸花转化法创建拟南芥激活标签突变体,优化了浸花法转化方案,采取原地转化的措施,减少了工作量,又保证了植株在转化期间的正常生长,转化效率高达1.434%.突变体分析表明,57.5%含单拷贝T-DNA插入,100... 用激活标签载体pSK I015和农杆菌介导的浸花转化法创建拟南芥激活标签突变体,优化了浸花法转化方案,采取原地转化的措施,减少了工作量,又保证了植株在转化期间的正常生长,转化效率高达1.434%.突变体分析表明,57.5%含单拷贝T-DNA插入,100%整合了Bar基因,87%含有CaMV 35S增强子,进一步分析发现CaMV 35S增强子丢失机率与农杆菌继代次数呈正相关. 展开更多
关键词 拟南芥 农杆菌 激活标签 转化
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拟南芥隐花色素突变体抑制子的筛选及其表型分析 被引量:4
5
作者 陈福禄 李宏宇 +1 位作者 林辰涛 傅永福 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第3期93-97,共5页
隐花色素(cryptochrome,简称CRY)是与DNA光解酶氨基酸序列高度同源的黄素蛋白,但不具有光解酶活性。拟南芥的隐花色素家族中隐花色素1(CRY1)主要抑制下胚轴伸长,隐花色素2(CRY2)主要调节光周期开花,并且这两个光受体具有部分重叠的功能... 隐花色素(cryptochrome,简称CRY)是与DNA光解酶氨基酸序列高度同源的黄素蛋白,但不具有光解酶活性。拟南芥的隐花色素家族中隐花色素1(CRY1)主要抑制下胚轴伸长,隐花色素2(CRY2)主要调节光周期开花,并且这两个光受体具有部分重叠的功能。cry1cry2双突变体在长日条件下比野生型晚开花。采用激活标签的方法,在cry1cry2双突变体背景下筛选到一个早开花突变体scc17-D(suppressor of cry1cry2#17-Dominant)。TAIL-PCR结果表明,scc17-D突变体的T-DNA插入在第一条染色体上的At1g25440和At1g25450两个基因之间。scc17-D突变体表现出植株矮化、叶片变小、果荚变小和子叶表皮细胞形状发生改变等性状。 展开更多
关键词 拟南芥 隐花色素 光周期 激活标签 开花
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拟南芥耐旱、耐高盐突变体sdt1的获得 被引量:1
6
作者 李志邈 闫成仕 +2 位作者 吴刚 曹家树 何祖华 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期461-466,共6页
在有20000个独立转化株系的拟南芥(Arabidopsis thaliana)激发标签突变体库中,筛选到1 株耐旱、耐盐突变体sdt1(high-salinity and drought tolerant 1)。实验结果表明在连续26d不浇水的干旱胁迫条件下,sdt1可保持正常生长而野生型全部... 在有20000个独立转化株系的拟南芥(Arabidopsis thaliana)激发标签突变体库中,筛选到1 株耐旱、耐盐突变体sdt1(high-salinity and drought tolerant 1)。实验结果表明在连续26d不浇水的干旱胁迫条件下,sdt1可保持正常生长而野生型全部萎蔫死亡。此外,在外施150 mmol/L NaCl水溶液的高盐胁迫条件下.sdt1可正常生长,而野生型全部死亡。在0.5xMS培养基上进行的发芽实验表明sdt1对内源和外施ABA的敏感性均低于野生型,为一个ABA不敏感突变体。对叶片失水率的测定结果表明,在干旱胁迫下sdt1的失水率显著小于野生型。Southern杂交结合sdt1的遗传分析表明该突变体为紧密相邻的2个T-DNA串联插入,对突变的功能基因有待进一步分子鉴定。 展开更多
关键词 拟南芥 突变体 激发标签 耐旱耐盐
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拟南芥耐盐突变体stg2的筛选 被引量:2
7
作者 吕思敏 《氨基酸和生物资源》 CAS 2007年第1期25-29,共5页
采取在高盐平板上萌发的方法,对一个雌激素诱导激活型拟南芥突变体库进行了耐盐突变体的筛选,最终得到了2株稳定的耐盐突变体。本文中对其中的一株耐盐突变体,命名为stg2(salt tolerance during germination 2),进行了研究。遗传实验表... 采取在高盐平板上萌发的方法,对一个雌激素诱导激活型拟南芥突变体库进行了耐盐突变体的筛选,最终得到了2株稳定的耐盐突变体。本文中对其中的一株耐盐突变体,命名为stg2(salt tolerance during germination 2),进行了研究。遗传实验表明它的耐盐特性是受雌激素诱导的,是功能获得型的耐盐突变体。本实验中还探讨了stg2突变体的筛选过程及耐盐生理特点。 展开更多
关键词 拟南芥 诱导激活突变体 耐盐突变体
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激活标签法及其在植物基因工程上的应用 被引量:4
8
作者 郑继刚 李成梅 +1 位作者 肖英华 李雅轩 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期471-474,共4页
激活标签法是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。它通过诱变使特定内源基因发生过量表达,而产生显性功能获得型突变,从而对基因进行鉴定和分析。因为具有独特的性质已使其成为发现新基因和进行基因功能分析的有效工具。本文... 激活标签法是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。它通过诱变使特定内源基因发生过量表达,而产生显性功能获得型突变,从而对基因进行鉴定和分析。因为具有独特的性质已使其成为发现新基因和进行基因功能分析的有效工具。本文综述了激活标签法的原理、研究现状和在植物基因工程上的应用。 展开更多
关键词 植物 拟南芥 T—DNA 激活标签 激活标签 基因工程
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激活标签转化结球甘蓝的研究 被引量:2
9
作者 王凤华 陈双臣 +1 位作者 李光远 王丽敏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期905-909,共5页
以夏光甘蓝下胚轴为材料,采用含激活标签pSKI015的农杆菌GV3101进行遗传转化研究,对预培养时间、侵染时间和共培养时间等转化条件进行优化.结果表明,预培养2d,侵染6min,共培养1d是遗传转化的较优组合.采用GV3101转化下胚轴结合glufosin... 以夏光甘蓝下胚轴为材料,采用含激活标签pSKI015的农杆菌GV3101进行遗传转化研究,对预培养时间、侵染时间和共培养时间等转化条件进行优化.结果表明,预培养2d,侵染6min,共培养1d是遗传转化的较优组合.采用GV3101转化下胚轴结合glufosinate筛选,获得了2株表型变异植株:一株叶片中心绿色,边缘黄化;另一株叶片卷曲.PCR检测显示这2株植株均含有pSKI015增强子序列,Southern blot结果显示这2株植株具有明显的杂交信号,说明这2株植株为激活标签突变体. 展开更多
关键词 甘蓝 遗传转化 激活标签 突变体
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Ac/Ds转座子激活标签技术研究进展 被引量:2
10
作者 王文静 马浩然 +1 位作者 李加纳 张洪博 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期2845-2855,共11页
随着植物基因组测序工作的迅速发展,植物功能基因组学已经成为植物分子生物学研究的重要内容,而大量有表型的突变体是进行功能基因组学研究的重要基础。Ac/Ds转座子激活标签技术(Ac/Ds transposonactivation tagging system)的产生使Ac... 随着植物基因组测序工作的迅速发展,植物功能基因组学已经成为植物分子生物学研究的重要内容,而大量有表型的突变体是进行功能基因组学研究的重要基础。Ac/Ds转座子激活标签技术(Ac/Ds transposonactivation tagging system)的产生使Ac/Ds转座子标签技术具有了产生显性突变的功能,并可避免在突变体库创建过程中进行大量繁重的人工转基因操作,是比较理想的植物功能基因组学研究工具。本文将对Ac/Ds转座子激活标签技术在发展过程中利用不同激活标签创建植物突变体库的研究进行介绍,并对近二十几年来报道的相关应用研究展开论述,以期对该领域的技术进步和应用研究提供一些有益的启发和参考。 展开更多
关键词 AC Ds转座子激活标签技术 突变体 功能基因组学
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基因激活标签体系及其在植物功能基因组学研究中的应用
11
作者 宛淑艳 张治国 赵桂兰 《中国农学通报》 CSCD 2008年第4期58-65,共8页
利用传统的基因缺失产生的突变体的方法来鉴定基因的功能效率很低,因为对于发育早期的基因特别是配子发育相关的基因以及冗余基因,这种突变体显得无能为力,前者基因纯合突变体导致死亡、而后者由于冗余基因之间的功能互补而不显示任何... 利用传统的基因缺失产生的突变体的方法来鉴定基因的功能效率很低,因为对于发育早期的基因特别是配子发育相关的基因以及冗余基因,这种突变体显得无能为力,前者基因纯合突变体导致死亡、而后者由于冗余基因之间的功能互补而不显示任何表型。而通过基因激活标签技术可以获得显性突变体即功能获得型突变体,为研究这类基因的功能提供了一个重要的手段。基因激活标签技术是指含有35S增强子或启动子的T-DNA或转座子若插入基因内,可导致插入突变,引起插入失活突变体的产生;若插入基因附近(上游或下游),则可能激活正常情况下不表达或表达极弱的基因,导致显性功能获得(dominantgain-of-function)性突变。近年来通过T-DNA或转座子介导的方法建立了多种植物的基因激活标签突变体库,在植物基因功能研究中发挥了重要作用,使一些由多个基因或基因家族决定的功能的研究获得突破性进展。就植物基因激活标签技术的原理,特点和创制方法以及在植物生长发育、代谢等一系列方面研究中的应用进行了阐述,并对该技术的发展趋势进行了较为详细的探讨。 展开更多
关键词 功能基因组学 突变体 激活标签系统
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甜瓜T-DNA插入突变体的构建
12
作者 许荣华 姜陆 +1 位作者 宁雪飞 李冠 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1048-1053,共6页
【目的】构建激活标签载体并将其转入甜瓜中,获得甜瓜T-DNA插入突变体,为甜瓜功能基因组学的研究奠定基础。【方法】用PCR法扩增目的 DNA片段,经EcoRI和Sac I顺序酶切,将目的片段连接到p CAMBIA2301载体上,构建含4×35s Enhancer DN... 【目的】构建激活标签载体并将其转入甜瓜中,获得甜瓜T-DNA插入突变体,为甜瓜功能基因组学的研究奠定基础。【方法】用PCR法扩增目的 DNA片段,经EcoRI和Sac I顺序酶切,将目的片段连接到p CAMBIA2301载体上,构建含4×35s Enhancer DNA片段的激活标签载体。以甜瓜品种‘伽师’为材料,利用农杆菌介导的转化体系转化甜瓜愈伤组织,获得甜瓜T-DNA插入突变体。【结果】获得4株T0代甜瓜转化幼苗,通过Kan筛选和PCR鉴定甜瓜转化幼苗的DNA中是否含有目的基因,证明其中3株甜瓜转化幼苗为转基因植株。【结论】获得了突变植株,为甜瓜重要性状基因发掘奠定基础。 展开更多
关键词 甜瓜 激活标签 T-DNA插入突变体
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拟南芥抗根结线虫和蚜虫的功能基因鉴定 被引量:1
13
作者 陈曦 冯辉 +3 位作者 张金凤 卢小雪 陈怀谷 魏利辉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1250-1256,共7页
为了鉴定出增强植物对根结线虫和蚜虫抗性的功能基因,从9个抗蚜虫的拟南芥激活标签突变体中筛选增强根结线虫抗性的突变体。利用反向PCR技术定位激活标签在基因组上的插入位点,并通过荧光定量PCR技术分析插入位点上、下游基因表达水平,... 为了鉴定出增强植物对根结线虫和蚜虫抗性的功能基因,从9个抗蚜虫的拟南芥激活标签突变体中筛选增强根结线虫抗性的突变体。利用反向PCR技术定位激活标签在基因组上的插入位点,并通过荧光定量PCR技术分析插入位点上、下游基因表达水平,结合根结线虫和蚜虫在过量表达转基因植株上的表现验证基因功能。结果显示接种根结线虫后7 d,侵入3个拟南芥突变体根系的根结线虫数量明显少于野生型。其中2个突变体中的激活标签插入位点只相差2个碱基,SKS13基因表达水平提高;另一个株系中激活标签导致PERK2基因的表达水平提高。与野生型植株相比,分别过量表达SKS13和PERK2的转基因植株能明显减少侵入根系的根结线虫数量,同时蚜虫的繁殖数量也较低。 展开更多
关键词 根结线虫 蚜虫 拟南芥激活标签突变体 抗性鉴定
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激活标签法构建拟南芥突变体库及其表型分析 被引量:4
14
作者 关艳龙 李婉莎 +2 位作者 殷奎德 杨永平 胡向阳 《云南植物研究》 CSCD 北大核心 2010年第1期53-59,共7页
以拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生生态型(Columbia)植株为实验材料,以含有激活标记双元质粒pCB260的农杆菌进行转化,并以抗除草剂Basta为筛选标记,构建了拟南芥激活标签突变体库,所用pCB260双元质粒含有两个Ds位点、一个GFP标记基因... 以拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生生态型(Columbia)植株为实验材料,以含有激活标记双元质粒pCB260的农杆菌进行转化,并以抗除草剂Basta为筛选标记,构建了拟南芥激活标签突变体库,所用pCB260双元质粒含有两个Ds位点、一个GFP标记基因与一个抗basta标记基因,可以方便高效地筛选转基因植物。目前经初步筛选获得了约10000个独立转化株系(T1代),其中约50个株系具有明显的表型变化,包括花期改变、株型变异、叶形特异、育性降低、花发育异常、种子颜色变浅等。运用TAIL-PCR技术,成功获得了其中10个表型特异株系的T-DNA侧翼序列,分别分布于拟南芥基因组的5条染色体上。 展开更多
关键词 激活标签 拟南芥 突变体 TAIL-PCR
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T-DNA插入突变及其研究进展 被引量:9
15
作者 王凤华 李光远 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第6期12-14,共3页
T-DNA插入突变在反向遗传学和功能基因组学研究中发挥着重要作用。文中综述了T-DNA插入突变的原理以及在拟南芥和水稻等模式植物中的研究现状,同时指出了该技术的优缺点及发展方向。
关键词 T-DNA插入 突变体 激活标签
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拟南芥18srRNA参与隐花色素介导的信号传导途径的研究 被引量:1
16
作者 汪启明 屠小菊 +2 位作者 唐冬英 赵小英 刘选明 《湖南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期66-71,共6页
通过筛选以拟南芥蓝光受体隐花色素双突变体cry1cry2为遗传背景的激活标签突变体库,得到一株SCC98-D株系,该突变体具有早开花,下胚轴变短,并具有花瓣数目增加等表型,彻底恢复了cry1cry2的晚开花和长下胚轴表型.通过Tail-PCR的方法克隆得... 通过筛选以拟南芥蓝光受体隐花色素双突变体cry1cry2为遗传背景的激活标签突变体库,得到一株SCC98-D株系,该突变体具有早开花,下胚轴变短,并具有花瓣数目增加等表型,彻底恢复了cry1cry2的晚开花和长下胚轴表型.通过Tail-PCR的方法克隆得到SCC98-D突变体中激活标签插入位点的侧翼序列,通过对该侧翼序列测序发现插入位点在18srRNA的1751bp处,运用RT-PCR方法分析插入位点周围基因的表达,发现只有18srRNA的表达被激活,由此证实了18srRNA参与隐花色素介导的信号传导途径. 展开更多
关键词 拟南芥 隐花色素 激活标签突变体 18s核糖体RNA
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一个水稻大叶角度突变体lla的遗传分析及基因克隆 被引量:13
17
作者 汪得凯 张红心 +3 位作者 胡国成 付亚萍 斯华敏 孙宗修 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期399-401,共3页
关键词 水稻基因 突变体 遗传分析 T-DNA标签 基因克隆 性状 利用 克隆植物 拟南芥 功能基因组学
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2013年35卷第9期《遗传》封面说明
18
作者 张海瑞 徐冉 +3 位作者 高玉梅 金维环 郜刚 李云海 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1116-1116,共1页
器官形状和大小的控制是一个基本的发育生物学过程,受细胞分裂和细胞扩展的影响。到目前为止,对器官形状和大小调控机制的了解还很少。本研究通过激活标签的方法筛选到一个叶子形状发生改变的半显性突变体(yuan1-1D)。
关键词 《遗传》 封面 细胞分裂 生物学过程 调控机制 激活标签 形状 突变体
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水稻细胞程序死亡基因OsLSD1的功能研究
19
《作物育种信息》 2005年第4期7-7,共1页
拟南芥ISD1基因编码一个含有三个锌指结构域(zinc finger dcmnin)的负调控因子,推测LSD1蛋白通过转录调控,抑制拟南芥的prodeath pathway或激活antideath pathway,从而调控拟南芥类似HR的细胞死亡。ISD1突变体的假病斑表型在长光照... 拟南芥ISD1基因编码一个含有三个锌指结构域(zinc finger dcmnin)的负调控因子,推测LSD1蛋白通过转录调控,抑制拟南芥的prodeath pathway或激活antideath pathway,从而调控拟南芥类似HR的细胞死亡。ISD1突变体的假病斑表型在长光照条件下才表现出来,是隐性突变。该突变体对细菌和真菌表现为非特异性抗性。研究表明, 展开更多
关键词 细胞程序死亡 功能研究 水稻 锌指结构域 负调控因子 拟南芥 基因编码 转录调控 D1蛋白 细胞死亡 光照条件 非特异性 突变体 激活 真菌 细菌
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Illumina Sequencing Technology as a Method of Identifying T-DNA Insertion Loci in Activation- Tagged Arabidopsis thaliana Plants 被引量:3
20
作者 Joanna K. Polko Mohamed-Ramzi Temanni +5 位作者 Martijn van Zanten Wilbert van Workum Sven Iburg Ronald Pierik Laurentius A.C.J. Voesenek Anton J.M. Peeters 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2012年第4期948-950,共3页
Dear Editor, Forward genetic screens are commonly used as unbiased tools to isolate genes responsible for a phenotype of interest. In Arabidopsis thaliana, especially T-DNA activation tagging pop- ulations are freque... Dear Editor, Forward genetic screens are commonly used as unbiased tools to isolate genes responsible for a phenotype of interest. In Arabidopsis thaliana, especially T-DNA activation tagging pop- ulations are frequently employed. These populations are gener- ated using vectors containing multiple copies of the constitutive 35S promoters derived from cau and often result in isolation i flower mosaic virus (35S CaMV) of dominant gain-of-function alleles (Weigel et al., 2000; Nakazawa et al., 2003). This allows the study of members of large gene families that are often func- tionally redundant and, therefore, hard to identify in loss-of- function screens. Moreover, due to the dominant nature, 展开更多
关键词 T-DNA 激活标签 拟南芥 测序技术 插入位点 35S启动子 识别 中国农业大学
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