野生拟目乌贼不同组织营养成分分析及评价

本研究通过对野生拟目乌贼4种组织(胴体肌肉、腕、卵巢、缠卵腺)的营养成分进行分析,旨在对其营养价值进行评价。随机选取雌雄野生拟目乌贼各3尾,分离胴体肌肉、腕、卵巢、缠卵腺,采用国家标准方法测定各组织中水分、灰分、粗蛋白质、粗脂肪、多糖、氨基酸、脂肪酸、矿物元素含量。结果表明:4种组织中水分含量为67.95%～79.41%,粗脂肪含量为0.17%～0.27%,均以腕中最高;灰分含量为1.38%～2.09%,以缠卵腺中最高;粗蛋白质含量为13.39%～24.18%,多糖含量为0.20%～0.68%,均以卵巢中最高。在4种组织中均检测出钾(K)、钠(Na)、钙(Ca)、镁(Mg)、铁(Fe)、锌(Zn)矿物元素,在卵巢和缠卵腺中还检测出锰(Mn)和铜(Cu)。4种组织中均含有17种氨基酸,总氨基酸(TAA)含量为145.74～205.14 mg/g,鲜味氨基酸(DAA)含量为52.38～66.11 mg/g,均是卵巢、缠卵腺含量较高(P>0.05),与依次降低的腕、胴体肌肉差异显著(P<0.05);4种组织中第一限制性氨基酸均为蛋氨酸+胱氨酸(Met+Cys)。4种组织中共检测出21种脂肪酸,其中多不饱和脂肪酸(PUFA)含量为52.14%～58.48%,表现为卵巢>缠卵腺>胴体肌肉>腕,卵巢中PUFA含量与缠卵腺相近(P>0.05),与腕、胴体肌肉差异显著(P<0.05);二十碳五烯酸(EPA)含量为7.72%～8.65%,4种组织之间差异不显著(P>0.05);二十二碳六烯酸(DHA)含量为27.14%～28.66%,4种组织之间差异不显著(P>0.05)。由此得出,野生拟目乌贼的营养价值较高,尤以卵巢、缠卵腺为佳。

几种生态因子对拟目乌贼胚胎发育的影响

研究盐度、光照周期、孵化密度、溶解氧对拟目乌贼(Sepia lycidas)胚胎发育的影响,以确定其胚胎发育最佳生态条件。在室内控制条件下,采用单因子试验研究了不同盐度(18、21、24、27、30、33、36),光照周期L∶D(0 h∶24 h、6 h∶18 h、12 h∶12 h),孵化密度(3、6、9、12、15个/L)等对其胚胎孵化率、培育周期、孵化周期、卵黄囊完全吸收率和初孵幼体大小的影响。结果表明:不同盐度对胚胎发育影响显著(P<0.05),适宜盐度为27—33,最适盐度为30,最适盐度下孵化率达(93.33±2.89)%、培育周期为(25.67±0.58)d、孵化周期为(5.33±0.58)d、卵黄囊完全吸收率达(89.27±0.33)%、初孵幼体体重达(0.247±0.006)g;光照周期对孵化周期影响不显著(P>0.05),对其它指标影响显著(P<0.05),适宜光照周期为L∶D(6 h∶18 h),最适光照周期下孵化率达(80.33±2.89)%,培育周期为(35.67±0.57)d、孵化周期为(4.67±0.57)d、卵黄囊完全吸收率达(82.18±7.72)%、初孵幼体体重达(0.243±0.012)g;在各孵化密度下充气与否,对胚胎发育有显著影响(P<0.01),水中含氧量≤5.55 mg/L时,胚胎发育受阻。在充气情况下不同孵化密度对胚胎发育影响显著(P<0.05),适宜孵化密度3—9个/L,最适宜孵化密度6个/L,最适孵化密度下孵化率达(96.67±2.89)%、培育周期为(29.67±0.58)d、孵化周期为(5.67±1.15)d、卵黄囊完全吸收率达(89.65±0.31)%、初孵幼体体重达(0.244±0.005)g。由此确定,其适宜的孵化盐度为27—33,光照周期为L∶D(6 h∶18 h),孵化密度为3—9个/L。

拟目乌贼繁殖行为学的初步研究

拟目乌贼在繁殖期间的行为较为复杂,包括求偶、雄性争斗、交配、雄性陪护、产卵等行为。拟目乌贼在生殖策略上并非"一夫一妻"制,交配时,雄性用第1、2对腕固定雌性的头部,然后用茎化腕将精荚输送至雌性纳精囊内。雌性受精后不久便产卵,拟目乌贼雌性轮流在产卵区产卵。卵白色,半透明,卵群葡萄状,分枝,刚产出的卵短径约1.2cm,长径约2.4cm,拟目乌贼平均产卵量为354枚。

拟目乌贼的胚胎发育

采捕野生拟目乌贼进行室内培育,利用显微成像系统观察其胚胎发育过程。结果表明,拟目乌贼受精卵乳白色,半透明,呈椭圆形,乳头状,一端呈圆环状套住附卵基质,如葡萄般成串有规律地聚集一起。刚产出的受精卵长径为(39.7±1.7)mm,短径为(17.1±1.1)mm,体质量为(4.3±0.2)g。胚胎呈椭圆形,长径(8.85±0.41)mm,短径为(7.74±0.54)mm。在水温为27℃,盐度为30条件下,孵化第10天卵粒变得最小,长径为(27.2±0.6)mm,短径为(13.3±0.6)mm,体质量为(2.02±0.02)g。第11天后受精卵开始膨大,孵化前受精卵长径为(32.7±0.8)mm,短径为(19.3±0.6)mm,体质量为(4.68±0.02)g。胚胎发育分为11个阶段:受精卵期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、胚体形成期、器官形成期、红珠期、心跳出现期、色素出现期、内骨骼形成期和孵化期。胚胎发育历时20 d,初孵乌贼胴长(8.1±0.2)mm,胴宽(6.1±0.2)mm,体质量(0.18±0.02)g。

拟目乌贼生殖系统的组织学研究

为了丰富拟目乌贼人工繁育理论,采用组织学方法,对其雌雄生殖系统的结构进行了研究。结果显示,雄性生殖系统可分为精巢、输精管、黏液腺、放射导管腺、中被膜腺、外被膜腺、硬腺、终腺和精荚囊9部分,其中输精管可分为前段、中段(壶腹)和后段3部分。精子发生不同步,成熟精子自精巢产生后,通过输精管,在黏液腺和放射导管腺中形成精团,在中被膜腺和外被膜腺中按规律进行重新排列,硬腺的主要作用是吸水使精荚变硬,最后在终腺中成熟,储存于精荚囊中,在生殖季节分批排出。雌性生殖系统可分为卵巢、输卵管、输卵管腺、1对缠卵腺和1对副缠卵腺5部分,可推测卵子发生不同步,分批成熟,在输卵管腺、缠卵腺和副缠卵腺共同作用下形成三级卵膜结构。拟目乌贼雌雄生殖系统的结构与其受精和产卵方式是相适应的。

饲料蛋白质水平对拟目乌贼生长前期的生长性能、肌肉成分和酶活的影响

以鱼粉、豆粕和明胶为主要蛋白源配制成蛋白质水平分别为31.5%、35.0%、38.5%、42.0%、45.5%、49.0%的试验饲料。选取初始均重（3.99±0.08）g的拟目乌贼（Sepia lycidas）540只,随机分成6组,每组3个重复,每个重复30只。结果表明：拟目乌贼的生长性能指标（增重率、特定生长率、成活率）均在饲料蛋白质水平为45.91%时达到最佳,除与蛋白质水平为49.72%时差异不显著（P〉0.05）外,与其他各组均有显著差异（P〈0.05）。饲料系数随蛋白质水平的升高呈先降后升的趋势,在饲料蛋白质水平为45.91%时达到最低,显著低于除49.72%组外的其他各组;蛋白质效率随着饲料中蛋白质水平的升高而显著下降（P〈0.05）。饲料蛋白质水平对肥满度与肝体比影响不显著（P〉0.05）。胃蛋白酶、胰蛋白酶、肠道脂肪酶和肝脏超氧化物歧化酶活性,随饲料蛋白质水平的增加呈先升后降的趋势,均在饲料蛋白质水平为45.91%时达到最高,胃蛋白酶和胰蛋白酶活性除与蛋白质水平为42.22%时差异不显著（P〉0.05）外,与其他各组均有显著差异（P〈0.05）;脂肪酶和肝脏超氧化物歧化酶活性与其他各组均有显著差异（P〈0.05）,而肠道淀粉酶活性则相反。肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性随饲料蛋白质水平的增加呈先升后稳定的趋势,均在饲料蛋白质水平为49.72%时达到最大,显著高于除45.91%组外的其他各组（P〈0.05）;而饲料蛋白质水平对碱性磷酸酶活性影响不显著（P〉0.05）。乌贼肌肉粗蛋白质在饲料蛋白质水平45.91%时含量最高,显著高于除49.72%组外的其他各组（P〈0.05）;粗脂肪含量最低,显著低于其他各组（P〈0.05）;而肌肉水分和粗灰分含量不受饲料蛋白质水平的影响（P〉0.05）。拟目乌贼生长前期（4~10 g）配合饲料适宜的蛋白质水平为45.91%。

拟目乌贼受精卵孵化及室内附卵基附卵效果的研究

在实验室条件下,对福建沿海的拟目乌贼受精卵进行了孵化实验,研究结果表明,在水温为21℃~30℃,盐度为24~33条件下,受精卵均能孵化。在盐度为30的条件下,最适温度为24℃,孵化率达（93.3±2.9）%,孵化高峰期为23~24 d;在温度为24℃的条件下,最适盐度为30,孵化率达（93.3±2.9）%,孵化高峰期为23~24 d。不同附卵基的附卵效果研究结果表明：不同附卵基的附卵效果差异显著（P〈0.05）,网目为27 mm的聚乙烯网片附卵效果最佳,平均附卵量为193.4粒,平均附卵率32.51%;其次是15 mm的网片,平均附卵量为137.5粒,平均附卵率23.14%。直径为8 mm和10 mm的尼龙绳附卵效果也较好,平均附卵量分别为119.6粒和120.0粒,平均附卵率分别为20.09%和20.13%;直径为2 mm和4 mm的尼龙绳以及网目为2.5 mm的网片的附卵效果明显较差,平均附卵率分别为0.92%、1.45%和1.76%,基本不附卵。无论是尼龙绳还是网片,都是以直径或网目较大的附卵效果较好。

拟目乌贼幼体日摄食量及其对体重影响

在人工养殖条件下,对拟目乌贼幼体的日摄食量和日增重率进行了分析。结果显示,在水温、盐度、pH等条件相对稳定的环境下,10～15d的拟目乌贼幼体平均日摄食虾苗(体长0.5mm)的条数分别是8、11、12、13、78、83条,在这种摄食量下,拟目乌贼幼体的日增重率分别为6.8%、5.68%、6.44%、8.81%、12.5%。其胴长、体重的生长符合S型曲线生长规律。

不同盐度下拟目乌贼(Sepia lycidas)胚胎发育过程研究

分别配置盐度为13、18、23、28、33、38和43的海水,(23±0.5)℃温度条件下孵化拟目乌贼(Sepia lycidas)卵,并对拟目乌贼胚胎发育情况进行观察与分析。结果表明,拟目乌贼胚胎在盐度为28时发育最佳,孵化历期为28—30天,胚胎发育经过受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、胚芽原基形成期、胚体形成期、漏斗形成期、眼点形成期、红眼期、心跳出现期、内壳发生期、色素形成期、墨囊形成期、黑眼期、内壳形成期和幼体出膜期等16个典型时期。盐度为13、18、38和43时,发育停滞,说明海水盐度是拟目乌贼胚胎发育过程中一个很重要的影响因素。

拟目乌贼卵子发生与卵巢发育

为了丰富拟目乌贼(Sepia lycidas)生物学资料,为人工育苗与养殖提供理论依据,采用解剖学和组织学的方法,对水泥池养殖条件下拟目乌贼卵子发生和卵巢发育进行了研究。结果表明:经过6个月水泥池养殖,平均体重为256.34 g,最大体重达到457.08 g,个别发育成熟,绝大部分未达性成熟。卵子发生不同步,根据细胞形态、细胞大小、滤泡细胞形态和卵黄形成情况可分为卵原细胞阶段(卵原细胞期)、原生质生长阶段(无滤泡期、单层滤泡期和双层滤泡期)、间质生长阶段(滤泡内折早期、滤泡内折中期和滤泡内折晚期)和营养质生长阶段(卵黄发生早期、卵黄发生晚期和成熟期),共4个阶段10个时期。卵巢发育根据外观形态、性腺指数变化和切面上各期细胞所占的比例,可分为形成前期、形成期、小生长期、大生长期、成熟前期和成熟期6个时期。拟目乌贼繁殖周期为一年。

温度对拟目乌贼幼体日生长率和存活率的影响

以温度为单因素变量,在人工饲养环境中,分析水温对拟目乌贼幼体日生长率与存活率的影响。实验结果表明,当水温处于28.1～32℃之间时,拟目乌贼幼体的日生长率与水温呈正相关关系;当水温处于32～32.67℃时,拟目乌贼幼体的日生长率与水温呈负相关关系;当水温处于29.5～32.6℃时,拟目乌贼幼体不易出现幼体死亡(死亡率<6.25%),适宜拟目乌贼幼体的存活;而当水温处于32.3～34℃之间时,拟目乌贼幼体出现了13.16%～61.16%的幼体死亡,不适宜拟目乌贼幼体的存活。实验结果表明,当水温处于29.5～32℃之间时,拟目乌贼幼体的存活率高(存活率>93.75%),且日生长率处于0.24%～1.76%,适宜拟目乌贼幼体的存活。

盐度对拟目乌贼受精卵卵径、重量和孵化率的影响

在水温(23±0.5)℃、pH 7.0~8.0、溶解氧>5mg·L-1的条件下,研究孵化过程中不同盐度对拟目乌贼胚胎发育和孵化率的影响。结果表明,拟目乌贼卵透明略带奶油色,近椭圆形,短径为0.596~1.758cm,长径为1.452~3.136cm,刚产出的卵重约2g;孵化完成时,卵膜内的重量达到4.5g。在盐度为28‰时,经过28~30d孵化,卵的短径和长径平均分别增加了0.601、0.615cm,孵化率为57.0%;盐度为23‰时,卵的长径和短径也相应增加,增幅分别为0.567、1.263cm,孵化率为13.5%;盐度为33‰时,经过28~30d孵化,卵短径平均增长0.150cm,而长径却缩短了0.141cm,孵化率为9.5%;在盐度为13‰、18‰、38‰和43‰条件下,胚胎停止发育,孵化率为0。结果表明,拟目乌贼属于狭盐性种类,盐度变化对拟目乌贼胚胎发育和孵化有直接影响。

运输密度和时间对拟目乌贼受精卵孵化的影响

为探究拟目乌贼受精卵长途运输的最佳条件,通过单因子试验研究了受精卵运输密度及运输时间对拟目乌贼受精卵孵化的影响.结果表明：运输密度对孵化率、幼体成活率、初孵幼体体重及卵黄完全吸收率均有显著影响（P〈0.05）,各项指标均随着密度的增加而降低;运输时间对受精卵孵化也有显著影响（P〈0.05）,各项指标也随着时间的增加而降低.因此建议运输密度为100~300 ind·L-1,运输时间为36 h以内.

拟目乌贼生殖腺多糖提取工艺优化及自由基清除能力研究

以拟目乌贼生殖腺为材料,在对料液比、提取时间及提取温度进行单因素实验的基础上,采用Box-Benhken实验设计优化热水浸提法提取多糖工艺,并通过清除超氧阴离子和羟基自由基的能力探究其体外抗氧化活性。结果表明:拟目乌贼生殖腺多糖热水浸提法最佳提取工艺条件为料液比1∶30g/m L,提取温度90℃,提取时间1h,在此条件下拟目乌贼生殖腺多糖得率为0.751%;拟目乌贼生殖腺多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基均有一定的清除能力,清除率与多糖浓度呈正相关性;红外图谱显示该多糖主要是β-型糖苷键连接的吡喃型葡聚糖。

拟目乌贼生殖腺碱提多糖的抗氧化及吸湿保湿特性

以拟目乌贼生殖腺为材料,采用碱法提取多糖,并对其抗氧化活性和吸湿保湿性进行研究。结果表明:拟目乌贼生殖腺碱提多糖最佳工艺为NaOH溶液浓度0.3 mol/L、料液比1∶40(g/m L)、提取时间3 h、提取温度80℃,此条件下多糖得率为7.697%。拟目乌贼生殖腺碱提多糖具有良好的抗氧化活性,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较好的清除效果,清除率与多糖质量浓度呈正相关。拟目乌贼生殖腺碱提多糖的吸湿性能高于壳聚糖、聚乙二醇6000等常规保湿剂,保湿性能和壳聚糖、聚乙二醇6000、丙三醇接近;吸湿保湿能力均高于翡翠贻贝多糖、近江牡蛎多糖等海洋动物多糖。综上表明,拟目乌贼生殖腺碱提多糖作为天然的抗氧化剂和保湿剂具有一定的应用前景。

拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究。结果表明,拟目乌贼肌肉多糖脱蛋白最佳工艺条件为:加酶量3.0 g/100 m L、酶解温度53℃、p H 8.2、酶解时间1.5 h。此条件下蛋白脱除率为89.43%,多糖损失率为1.78%,优于三氯乙酸法和等电点法。清除自由基结果显示,多糖质量浓度为10 mg/m L时,酶法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对羟自由基清除率分别为45.72%、38.72%和25.18%,相应的IC_(50)值分别为12.44、16.37、34.64 mg/m L;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率分别为68.00%、30.08%和23.10%,相应的IC50值分别为7.62、16.71、28.96 mg/m L。3种脱蛋白方法所得拟目乌贼肌肉多糖清除自由基效果依次为:酶法>三氯乙酸法>等电点法。

碱提拟目乌贼肌肉多糖工艺优化及抗氧化活性研究

为研究碱提拟目乌贼肌肉多糖工艺优化,在探索提取温度、Na OH浓度及料液比单因素试验基础上,采用响应面法进行优化设计,得出最佳提取工艺为:提取温度90℃、Na OH浓度3%、料液比1∶28 g/m L,在此条件下,多糖提取率为0.68%。此外,对多糖抗氧化活性研究结果显示,多糖浓度为10 mg/m L时,对DPPH自由基的清除率为68%、其相应的IC50值为7.62 mg/m L;对·OH的清除率为45.72%,其相应IC50值为12.44 mg/m L,还原力大小为0.263。红外光谱显示该提取物具备一般多糖类物质的光谱特征。

温度对拟目乌贼胚胎发育及幼体的影响

为确定拟目乌贼发育生长最佳温度条件,采用单因子试验研究了不同温度(15、18、21、24、27、30、33℃)对拟目乌贼胚胎发育及幼体生长的影响.结果表明:不同温度对拟目乌贼胚胎发育及幼体影响显著(P<0.05).胚胎发育适宜温度为21～30℃,最适温度为24℃.最适温度下孵化率达(93.3±2.9)%,培育周期为(24.33±0.58)d,孵化周期为(6.00±1.00)d,卵黄囊完全吸收率为(96.4±3.1)%,初孵幼体体质量为(0.258±0.007)g.有效积温模型为N=284.42/(T-12.57).幼体生长适宜温度为21～30℃,最适温度为24～27℃.最适宜温度下幼体存活率达70.0%～73.3%,特定生长率为2.4%～3.8%.

盐度对拟目乌贼生长及生化成分的影响

为探究盐度对拟目乌贼（Sepia lycidas）幼体生长和体生化成分的影响,采用突变和渐变两种实验方法研究了不同盐度（18、21、24、27、30、33）对其存活率、特定生长率、增重率、饵料系数与体生化成分的影响。结果表明：不同盐度对其存活率、特定生长率、增重率、饵料系数、体水分含量和粗蛋白质含量有显著的影响（P〈0.05）,其粗脂肪和灰分影响不显著（P〉0.05）。存活率、特定生长率、增重率和粗蛋白质含量随着盐度升高先增后减,饵料系数先减后增,水分含量随着盐度升高而增加的趋势。其生长适宜的盐度是21~33,最适盐度为27~30。

拟目乌贼精子发生和精子的超微结构

应用扫描电镜和透射电镜观察了拟目乌贼(Sepia lycidas)精子的发生过程和超微结构。结果表明,精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和成熟精子5个阶段,其中精细胞可以分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ5个时期,精细胞Ⅱ期又可分为前期和后期。细胞核经历了一个横向收缩、纵向拉长的过程,由圆形或椭圆形,变为不规则的纺锤形、稍弯曲的长柱形;核内染色质由絮状,变为絮块状、致密颗粒状、细纤维状、粗纤维状和片层状,直至高电子密度均质状;顶体由圆形,变为头盔形、圆锥形、倒"U"字形,直至子弹头形;线粒体由空泡状经过融合和迁移,变为内嵴丰富的椭球形,形成不完全包围鞭毛的线粒体距。成熟精子全长101.28μm,由头部和尾部组成,头部呈长辣椒状,长7.73μm,宽1.51μm,由顶体和细胞核组成;尾部细长,为93.18μm,为典型的"9+2"结构,由中段、主段和末段三部分组成。