肺癌合并达松威尔拟诺卡菌肺部感染1例

拟诺卡菌是一种罕见的机会性致病菌,随着器官移植、肿瘤患者增多及临床诊疗水平和实验室技术的提高,有关拟诺卡菌感染的文献报道日益增多,但由达松威尔拟诺卡菌引起的肺部感染文献报道较少见。肺癌合并达松威尔拟诺卡菌肺部感染更是较为罕见,因其临床表现和影像学无特异性,细菌培养难度大,容易漏诊、误诊,且患者预后较差。大理大学第一附属医院收治1例肺癌合并达松威尔拟诺卡菌肺部感染患者,通过化疗联合磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、莫西沙星抗感染治疗后病情好转,复习既往相关文献,以期提高临床医生对该病的认识。

拟诺卡菌及其次级代谢产物

为发现新抗生素,在从海洋、盐湖、荒漠等盐碱环境勘探药用放线菌的过程中,不断分离到拟诺卡菌属新物种和该属中有生物活性的菌株,从中发现的次级代谢产物数量和种类也随之增多。截至2015年底,该菌属已有41个典型种和1个亚种,次级代谢产物超过100个,结构可分为9大类,26亚类,分别为由α-吡喃酮和γ-吡喃酮组成的吡喃酮类、二酮哌嗪和多肽组成的肽类、δ-内酯环和大环内酯组成的环内酯类、吡喃萘醌类、由二联吡啶、哌啶、四氢嘧啶、吩嗪、吩噁嗪、吲哚内酯、吲哚咔唑、吲哚核苷、喹啉、喹唑啉、噁唑啉、β-咔啉、苯骈恶唑和氨基咪唑等亚类组成的杂环类、含氯芳香类、三联苯类、由香豆素和异香豆素组成的香豆素类和骈四苯二醌类化合物。它们的生物活性涵盖抗肿瘤、抗菌、神经元细胞保护、细菌群体感应抑制、酶抑制等多个方面。本文调研了几乎所有拟诺卡菌属相关文献,首次对该菌属菌株产生的次级代谢产物及其新化合物进行了全面的综述。

基于16S-23S rDNA间隔区序列(ITS)、REP序列的基因指纹图谱及UPGMA聚类法的拟诺卡菌属分类方法

拟诺卡菌属(Nocardiopsis)是拟诺卡菌科(Nocardiopsaceae)的唯一属.该属内进行物种鉴别时通常是在多相分类方法基础上,以全基因组杂交同源性在70%以下的为不同物种,此为国际公认的定种标准;但在进行大量菌株的比对时操作比较复杂,于是多种基于DNA的基因图谱技术发展起来.本实验利用适宜引物,对拟诺卡菌属15株基准株基因组DNA的16S-23S rDNA间隔区序列(ITS)和REP序列进行了扩增,获得了两种基因指纹图谱,同时根据UPGMA聚类法构建了相应的进化距离树图.结果表明,对于拟诺卡菌属中不同物种的区分,两种基因图谱技术的分辨力相当,均可以较好的呈现物种间差异,可以作为拟诺卡菌属菌株多相分类的组成部分,应用于物种水平的分类与鉴定.

拟诺卡菌感染1例并文献复习

目的了解拟诺卡菌感染的临床特征及诊治方案。方法对1例拟诺卡菌所致皮肤感染的患者资料进行分析。以"拟诺卡菌"为主题词检索万方、维普和中国知网数据库,以"Nocardiopsis"为主题词检索PubMed数据库,获取文献报道的拟诺卡菌所致感染的病例,筛选并总结分析病例资料。结果福建医科大学附属泉州第一医院报道的1例病例因鱼刺刺伤左手指出现左臂多发性肿物,诊断为拟诺卡菌所致皮肤感染,经甲氧苄啶-磺胺甲[口恶]唑治疗5个月后基本痊愈。文献检索到7例拟诺卡菌感染患者,包括该院病例共8例,其中皮肤感染4例、播散性感染2例、肺部及鼻感染各1例。4例皮肤感染患者中,3例患者分别被土豆叉、牙签、鱼刺刺伤所致感染。另外4例患者可能因免疫功能低下导致感染。3例皮肤感染患者采用甲氧苄啶-磺胺甲[口恶]唑治疗,最终均治愈;其余5例患者治疗方案不一,1例患者死亡,其余患者均治愈。结论拟诺卡菌可在多种环境中定植,皮肤被刺伤后可致感染。临床诊断需要依赖分子生物学方法进行鉴定。不宜经验性选用头孢菌素进行治疗,建议将甲氧苄啶-磺胺甲[口恶]唑作为拟诺卡菌感染的首选治疗药物。

播散性拟诺卡菌病1例

拟诺卡菌(Nocardiopsis)为机会性致病菌,能够通过血标本培养获得菌落的较为少见。感染引起的主要病理表现为化脓性改变,以播散性病变为其特点,由于拟诺卡菌感染起病隐匿,临床症状缺少特异性,血行播散难以控制的特点,临床病死率极高,本文报告1例播散性病例。1临床资料患者男,69岁,主因“头痛、颈痛伴发热5 d”(2021-01-28)住河北北方学院附属第一医院神经内科。患者5 d前感冒后出现头痛、颈痛。

海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中次生代谢产物的分离及其抗肿瘤活性研究

目的探索海洋来源的拟诺卡菌(Nocardiopsis sp.)SCSIO 11492的抗肿瘤活性次生代谢产物。方法采用硅胶、凝胶、ODS等色谱分离方法对海洋来源的拟诺卡菌SCSIO 11492的发酵粗提物进行分离、纯化,根据次生代谢产物的核磁数据及相关的理化性质确定化合物的结构,最后利用活性测试发现活性成分。结果从海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中分离纯化得到5个化合物,经鉴定分别为2′-脱氧腺苷(2′-deoxyadenosine,1)、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷(2′-deoxythymidine,2)、2′-脱氧尿苷(2′-deoxyuidine,3)、尿嘧啶核苷(uridine,4)、1-O-棕榈酰基-3-O-β-D-半乳糖基甘油酯(1-O-hexadecanoyl-3-O-β-D-galactopyranosylglycerol,5)。活性测试结果表明化合物5对RAW264.7显示出较好的生长抑制活性(IC50=10.9μmol/L)。结论从海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中分离得到5个化合物,均为首次从该属中分离得到。其中化合物5可能是该菌抗肿瘤的活性成分。

海洋拟诺卡菌来源的天然产物

海洋拟诺卡菌由于其独特的代谢功能,成为海洋放线菌次级代谢产物的重要来源。根据2010-2013年初的海洋放线菌天然产物的统计表明,对拟诺卡菌的研究仅次于链霉菌。本文综述了从2001年的第一个海洋来源的拟诺卡菌天然产物至2018年6月17年间报道的65个海洋拟诺卡菌天然产物的微生物来源、结构及其生物活性。其结构包括吡喃酮类、二酮哌嗪类、多肽类等,其中吡喃酮类化合物是主要类型,占海洋拟诺卡菌天然产物总数的46%;而29%的海洋拟诺卡菌天然产物表现出抑菌、细胞毒、抗炎等生物活性。

拟诺卡氏菌16S rRNA,gyrB,sod和rpoB基因的系统发育分析

为了更好地了解拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)各物种间的系统发育关系,该属现有有效描述种的gyrB,sod和rpoB基因的部分序列被测定,结合16S rRNA基因,对拟诺卡氏菌属进行了系统发育重建。研究发现拟诺卡氏菌属gyrB,sod和rpoB基因的平均相似性分别为87.7%、87.3%和94.1%,而16S rRNA基因的平均相似性则达到96.65%,3个看家基因均比16S rRNA具有更高的分歧度。比较基于不同基因的系统树发现,由gyrB基因得到的系统树拓扑结构与16S rRNA得到的结构在亚群上基本一致。因此,gyrB基因在拟诺卡氏菌属的系统分类上比16S rRNA基因更具优越性。

海洋拟诺卡氏菌株HY-G转化大豆异黄酮苷发酵条件的优化

目的:优化大豆异黄酮苷微生物转化的发酵条件。方法:利用本实验室筛选出的海洋拟诺卡氏菌株HY-G进行生物转化,采用单因素和正交试验,对发酵条件和培养基组成及条件进行优化。结果:筛选的最佳发酵工艺为在高氏一号基础培养基中加入1g/100mL蔗糖、0.03g/100mL硫酸铵和200mg/L诱导物的培养基进行培养,培养基装液量150mL/250mL,起始pH8.0,培养温度40℃,摇瓶转速120r/min,培养72h。优化后的酶活力分别达3621U/mL(对染料木素)和4862U/mL(对大豆苷元)。结论:经过优化,得出了较好的产酶发酵工艺,有利于进一步采用大规模发酵法转化大豆异黄酮苷元。

小麦白粉病生防菌拟诺卡氏菌属TMG-8菌株的筛选研究

为更好地利用生防菌防控小麦白粉病危害,从不同省份、不同生态环境中采集52份土样,用稀释分离法得到150株菌株,通过小麦白粉孢子萌发抑制试验、小麦离体叶片药效试验及温室苗期药效试验筛选得到1株对小麦白粉病抑制作用较强的生防菌株TMG-8。采用16S r DNA序列分析法结合部分生化测定试验对生防菌TMG-8进行初步鉴定,并采用抗生素抗性标记法测定生防菌TMG-8的定殖能力。初步鉴定菌株TMG-8为拟诺卡氏菌属;生防菌可在叶面上短暂定殖,在小麦叶片上的定殖量为下部>中部>上部,在小麦苗上的定殖量为根部>茎部>叶部;菌株TMG-8可在土壤中短期稳定定殖,其含量随着时间逐步增加并趋于稳定,但增加幅度不大;无论是浸根处理还是灌根处理,生防菌都能在小麦苗上定殖,定殖量为根部>茎部>叶部,灌根处理比浸根处理含菌量多。

一种海洋拟诺卡氏菌产生的胞内中性β-葡萄糖苷酶

从一株海洋放线菌株HY-G中纯化得到了一种胞内中性β-葡萄糖苷酶。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Superdex 200凝胶柱层析估计酶分子质量分别是43.3 kD和45.0 kD,两者估计值接近,表明该酶是一个单聚体,不含亚基。采用对硝基酚基-β-D-葡萄糖苷(p-NPG)做底物,测得该酶的最适pH和最适温度分别为pH 7.5和40 C。该酶在pH 6.0～7.0最稳定,在70 C保温30 min仍能保留56%的酶活力,表明具有一定的温度稳定性。基于16S rRNA基因的分类研究表明,该菌株属于拟诺卡氏菌属。

拟诺卡氏菌次级代谢产物的研究

[目的]研究拟诺卡氏菌次级代谢产物的化学成分。[方法]应用多种色谱方法进行分离和纯化,并用NMR和MS等方法解析其结构。[结果]得到4个单体化合物,其结构分别鉴定为白鲜碱、6-羟基-4-(4-羟苯基)-7-甲氧基香豆素、4-异丙基苯甲酸、β-吲哚甲酸。[结论]所有化合物均为首次从该菌中分离得到。

拟诺卡氏放线菌YIM90087的代谢产物研究

对拟诺卡氏菌YIM90087的固体发酵提取物进行了化学成分研究,从中分离得到10个化合物。通过波谱数据分析,鉴定其结构分别为:(3S)-3-苄基-2,5-哌嗪二酮(1)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(2)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-羟甲基-2,5-哌嗪二酮(3)、(4S)-4-苄基-1,3-恶唑-2,5-二酮(4)、6'-羟基-4,2',3',4''-四甲氧基-对三联苯(5)、(3S,6S)-3-(4-羟苄基)-6-异丁基-2,5-哌嗪二酮(6)、(3R,8aS)-3-异丙基-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(7)、(3S,6S)-3-异丁基-6-甲基-2,5-哌嗪二酮(8)、(3S,6S)-3-苄基-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(9)和(3S,6S)-3-苄基-6-(1-羟丙基)-2,5-哌嗪二酮(10)。化合物4目前只见化学合成报道,为新天然产物。

拟诺卡氏菌骨架对凡纳滨对虾生长及免疫功能的影响

将研究室分离纯化的卢森坦拟诺卡氏菌扩大培养,发酵液经过超声波破碎、离心、胰蛋白酶酶解、脱脂、冷冻干燥,得到白色细胞壁骨架。在基础饲料中添加0.1%和0.2%的拟诺卡氏菌细胞壁骨架,饲喂凡纳滨对虾幼虾[体质量(4.21±1.28) g],养殖周期为4周,测定各处理组对虾体质量,统计各组存活率,使用南京建成试剂盒测定对虾血淋巴和肝胰腺组织中的一氧化氮合酶、超氧化物歧化酶、酚氧化酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛的含量,佛波豆蔻酸乙酯法检测对虾血淋巴中呼吸爆发活性,采用副溶血弧菌对剩余对虾进行攻毒,统计对虾死亡率。试验结果显示,拟诺卡氏菌细胞壁骨架能够明显促进凡纳滨对虾的生长,显著提高对虾血淋巴和肝胰腺中的超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、酚氧化酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性( P <0.05, P <0.01),显著降低丙二醛浓度( P < 0.01 ),显著增强对虾血淋巴的呼吸爆发活性( P <0.05, P <0.01),可提高对虾的免疫保护率,从而提高凡纳滨对虾的存活率。研究结果表明,拟诺卡氏菌细胞壁骨架的适宜添加量为0.1%。

藏北高原盐湖放线菌Nocardiopsis sp.N85的活性次级代谢产物研究

目的对藏北高原当穹错盐湖来源放线菌N85进行初步分子鉴定及活性次级代谢产物研究。方法通过菌株16S rRNA序列比对、系统发育树构建及全基因组序列分析,初步确定N85的分类地位;以抗菌活性及代谢物丰富度为指标,采用OSMAC策略确定最佳发酵条件;基于HPLC-UV、UPLC-Q-TOF-MS及UNIFI数据库筛查技术,对活性化合物进行结构预测;通过硅胶柱色谱和反相HPLC分离纯化活性成分;经NMR波谱数据分析并与文献对比确定化合物的结构。结果菌株N85隶属于拟诺卡菌属放线菌,经过OSMAC培养基优化,从菌株粗提物中预测并分离鉴定3个活性产物,分别为萘醌类化合物2-methoxy-1,4-naphthoquinone(1),吡喃酮类化合物norcardiatone A(2)和norcardiatone C(3),其中化合物1为主要活性成分。化合物1~3首次从内陆盐湖来源放线菌中分离获得。结论应用光谱、质谱等多谱学数据分析结合UNIFI数据库筛查等策略,可快速实现天然产物的早期结构排重,对加速新型抗生素的高效发现具有指导意义。

海洋放线菌 Nocardiopsis dassonvillei JS106 的抗群体感应活性物质研究

群体感应抑制剂能够通过调控致病菌的群体感应系统来降低其致病力,且不易使其产生抗性突变,有望治疗或协同治疗细菌性感染,以应对细菌耐药性问题。本文研究了一株海洋来源的放线菌达松维尔拟诺卡氏菌JS106中的抗群体感应活性物质。采用减压柱层析和高效液相色谱从JS106的发酵液中分离到6个化合物:1,6-二羟基吩嗪(1)、6-羟基-1-甲氧基吩嗪(2)、4',7-二甲氧基异黄酮(3)、N-(2-羟基苯基)乙酰胺(4)、1-甲氧基吩嗪(5)和2-氨基吩恶嗪-3-酮(6)。在测试浓度下,所有化合物均表现出很好的抗群体感应活性,对紫色色杆菌的色素产生有显著的抑制作用,但没有明显的生长抑制。菌株JS106可产生丰富的吩嗪类化合物,在抗群体感应方面有出色的应用潜力。

海洋放线菌Nocardiopsis sp.HM-01的抑菌活性及抑菌物质鉴定

该研究针对一株海洋放线菌HM-01进行形态学及16S rDNA分析,并对该菌株的发酵液提取物进行抑菌特性研究,采用antiSMASH对该菌株亲缘性较高的基因组序列进行次级代谢产物基因簇预测,并结合液相色谱-质谱分析,鉴定主要抑菌活性物质。结果表明,该菌株被鉴定为拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)。Nocardiopsis sp.HM-01发酵液提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌等均有明显抑制活性,且以RP培养基在发酵第9天时效果最明显。鉴定出主要的抑菌活性物质为desferrioxamine E和icosalide B。

塔克拉玛干沙生植物来源放线菌抗铜绿假单胞菌活性的筛选及菌株38-7L-1活性产物的研究

目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-7L-1进行初步分类鉴定;基于菌株38-7L-1 PKS I基因的KS域序列分析结果 ,结合活性峰的液-质联用数据,比对微生物天然产物数据库,预测活性化合物201的结构;通过色谱方法纯化化合物201;结合光谱数据分析及文献比对,确定和验证化合物201的结构。结果从81株沙生植物内生放线菌中获得7株活性菌株,包括链霉菌属菌株4株、考克菌属菌株1株、多形孢菌属菌株1株和拟诺卡菌属菌株1株。其中菌株38-7L-1活性最强并具有I型聚酮合酶基因,16S r RNA基因序列分析表明该菌株与Nocardiopsis alba DSM 43377T(X97883)的相似率为100%。菌株3 8-7L-1抗铜绿假单胞菌活性次级代谢产物,化合物201为十六元大环内酯类化合物,蔷薇霉素。结论 首次从拟诺卡菌中分离到常见于小单孢菌的蔷薇霉素,多策略组合对次级代谢产物结构预测具有指导意义。

放线菌R2A14A-1的活性代谢产物分离及菌株鉴定

目的抗金黄色葡萄球菌化合物FFF-13的分离鉴定及其塔克拉玛干沙漠南麓来源产生菌R2A14A-1的初步鉴别。方法以琼脂平板扩散法和化合物紫外特征追踪R2A14A-1发酵液中抗金黄色葡萄球菌的amicoumacin类化合物,通过大孔吸附树脂和高效液相等色谱法建立空白培养基与菌株发酵液比对指纹图谱,通过比对分离获得活性次级代谢产物FFF-13,根据高分辨质谱、核磁共振氢谱和碳谱数据并结合文献确定化合物FFF-13的结构;综合菌株R2A14A-1的形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对菌株R2A14A-1进行初步鉴定。结果化合物FFF-13为amicoumacin B,菌株R2A14A-1为拟诺卡菌属放线菌。结论菌株R2A14A-1为首个发现产生amicoumacin类抗生素的拟诺卡菌株。