外源性拟载脂蛋白E肽对脑血管痉挛后血管内皮生长因子介导的脑动脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨外源性拟载脂蛋白E（apoE）肽对脑动脉痉挛后内皮细胞凋亡的调节作用及对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血模型并给予apoE-1410肽，术后行神经功能评分并检测大脑中动脉直径变化，应用原位杂交法、免疫印迹法检测各组右侧大脑动脉VEGF表达，TUNEL法检测大脑中动脉内皮细胞凋亡。结果：出血组小鼠神经功能评分均降低，大脑中动脉直径减小，VEGFmRNA及VEGF蛋白显著升高，TUNEL显色阳性。治疗组小鼠神经功能评分及大脑中动脉管径增加，VEGF表达降低，内皮细胞凋亡数目减少。VEGFmRNA表达与TUNEL呈正相关。结论：蛛网膜下腔出血后痉挛脑动脉内皮细胞凋亡与VEGF高表达有关；拟apoE-1410肽对脑血管痉挛具有一定的治疗作用，其机制之一可能是通过抑制VEGF活化，减少大脑中动脉内皮细胞凋亡。

载脂蛋白E拟肽在脑血管痉挛中的保护机制

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）-细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路在脑血管痉挛后早期脑损伤中的作用,探讨载脂蛋白E（apoE）拟肽通过此途径发挥的保护机制.方法：采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血（SAH）和脑血管痉挛模型,给予apoE-1410肽,术后脑血管铸型检测大脑中动脉（MCA）直径变化,分别在术后12、 24、 48h 3个时相点取右侧大脑动脉标本,应用免疫印迹法检测各组VEGF、 p-ERK1/2蛋白表达,TUNEL法检测MCA内皮细胞凋亡.结果：模型组MCA出现严重的血管痉挛,管腔直径减小,随脑血管痉挛时间延长,各组小鼠VEGF、 p-ERK1/2蛋白均有不同程度上调,凋亡细胞增多.与模型组比较,治疗组MCA管腔直径增加,各时相点3项指标的表达均不同程度下调.蛛网膜下腔出血12～48h VEGF表达与p-ERK1/2呈正相关;p-ERK1/2与TUNEL呈正相关.结论：脑血管痉挛后VEGF表达增强可通过激活ERK信号途径诱导大脑动脉内皮细胞凋亡;拟apoE-1410肽对脑血管痉挛具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过部分阻抑VEGF/ERK通路活化减少凋亡实现的.

载脂蛋白E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑脊髓CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞表达的影响

目的探讨载脂蛋白(Apo)E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响。方法 40只C57BL/6J雌性小鼠随机分成EAE组、EAE治疗组、正常对照组、正常治疗组;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白制备的完全抗原诱导EAE模型小鼠。免疫诱导次日,EAE治疗组和正常治疗组小鼠每隔2 d皮下注射ApoE拟肽,EAE组和正常对照组小鼠皮下注射等量的生理盐水。免疫诱导后各组每日进行神经功能缺损评分(NDS);35 d后用免疫组化检测各组小鼠脑脊髓CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达。结果 EAE治疗组NDS的峰值及终末评分显著低于EAE组(均P<0.05)。与正常对照组及正常治疗组比较,EAE组大脑、脑干和脊髓中CD4+T细胞数明显增高,大脑CD8+T细胞数明显增高(均P<0.05)。EAE治疗组小鼠大脑、脑干、脊髓组织CD4+T细胞表达显著低于EAE组(均P<0.05);两组间CD8+T细胞表达水平的差异无统计学意义。结论 ApoE拟肽可抑制CD4+T细胞的表达,减轻免疫炎症反应,对EAE小鼠有神经保护作用;而对CD8+T细胞的表达无明显影响。

载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E（ApoE）拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为ApoE拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。ApoE拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/（kg·d）背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0-35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。ApoE拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。ApoE拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义（P=0.72）。ApoE拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期（第35 d）均明显低于EAE组（均P〈0.05）。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;ApoE拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组（均P〈0.05）。ApoE拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组（均P〈0.05）,其中ApoE拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异（均P〉0.05）。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组（均P〈0.05）。而ApoE拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 ApoE拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。

一种新的载脂蛋白E拟肽对小鼠局灶性脑缺血再灌后c-Jun氨基端激酶通路的影响

目的：研究小鼠局灶性脑缺血再灌（Ⅰ/R）后c-Jun氨基端激酶（JNK）通路在皮质神经元凋亡中的作用,探讨新的拟apoE-1410肽通过此途径发挥的保护机制.方法：建立小鼠可逆性大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,在预定时间点观察皮质区组织学变化,采用免疫组织化学法检测p-c-Jun、 caspase-3的表达;免疫印迹法检测p-c-jun的表达,TUNEL法检测皮质区凋亡细胞数.结果：与对照组比较,模型组12h后存活神经元数目明显降低;各组小鼠p-c-Jun、 caspase-3阳性反应均有不同程度增强;随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并于24h达高峰.与模型组比较,治疗组各时相点3项指标的表达均不同程度下调. Ⅰ/R 3h～24h皮质区p-c-Jun表达与caspase-3呈正相关;caspase-3与TUNEL呈正相关.结论：缺血侧皮质区p-c-Jun表达的增强可能通过激活caspase依赖的凋亡途径诱导Ⅰ/R后神经元凋亡;拟apoE-1410肽对Ⅰ/R具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制JNK通路活化实现的.

ApoE肽段预处理通过调节c-jun氨基端激酶阻抑小鼠脑缺血再灌后神经细胞的凋亡

目的:为探讨外源性载脂蛋白E(apoE)肽段对局灶性脑缺血再灌(I/R)的保护机制,观察apoE-1410拟肽对I/R小鼠脑组织磷酸化c-jun氨基端激酶(JNK)表达变化的影响。方法:实验选用160只雄性ICR小鼠,随机分为3组:假手术对照组(sham组),模型组(I/R组),apoE治疗组(apoE组),采用可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,术后行神经功能评分。I/R3、6、12、24、48h行HE染色观察皮质区神经细胞的形态变化,并计算存活神经元的数目。利用WesternBlot法、免疫组织化学法检测p-c-jun的表达,行TUNEL法检测凋亡细胞数。结果:与对照组比较,模型组小鼠神经功能评分均降低,I/R12h后存活神经元数目明显减少;p-c-jun阳性反应术后3、6、12、24h显著增高(P<0.05);随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并于48h达高峰(P<0.05)。与模型组比较,治疗组小鼠神经功能评分增加,各时相点p-c-jun和TUNEL表达均不同程度下调(P<0.05)。I/R3h至48h皮质区p-c-jun表达与TUNEL呈正相关(r=0.716,P<0.01)。结论:缺血侧皮质区p-c-jun表达的增强可诱导I/R后神经细胞凋亡;拟apoE-1410肽对I/R具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制JNK活化实现的。

APOE基因亚型对创伤性脑损伤后COG1410早期神经保护作用的影响

目的探讨载脂蛋白E（apolipoprotein E,APOE表示其基因,apo E表示其相应蛋白）基因亚型对创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）后apo E拟肽（COG1410）早期神经保护作用的影响。方法以APOE转基因鼠（ε3、ε4）及APOE敲除鼠[APOE（-/-）]作为研究对象,各型鼠随机分为TBI＋COG1410组（30只）、TBI＋生理盐水组（30只）和假手术组（10只）,TBI＋COG1410组和TBI＋生理盐水组又分为3个亚组：1、3、7 d,每组10只,采用PSI脑损伤撞击器精确打击制备TBI模型,并于伤后30 min内首次经尾静脉注射COG1410（1 mg/kg）或生理盐水（同容积）。早期脑损伤检测指标包括伤后连续7 d的神经功能学测试（转棒时间）,以及伤后1、3、7 d的脑水肿和淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）在创伤周围胼胝体区的半定量表达。结果在不同APOE基因型小鼠中,ε3鼠在伤后前3 d的转棒时间明显优于ε4鼠（P〈0.05）。而在TBI＋COG1410组和TBI＋生理盐水组的对比中,COG1410在ε3鼠中具有增加伤后4~7 d的转棒时间（P〈0.05）,同时也可减轻伤后3、7 d的脑组织含水量（P〈0.05）;而在ε4鼠和APOE（-/-）鼠中,COG1410不仅可以增加伤后1~7 d的转棒时间（P〈0.05）,同时也可改善伤后1、3 d及7 d的脑组织含水量（P〈0.05）;此外,COG1410可以减轻ε3鼠和APOE（-/-）鼠在伤后1、3、7 d的APP表达（P〈0.05）,却在ε4鼠伤后1、3、7 d的APP表达中没有统计学差异（P〉0.05）。结论 APOEε4基因作为一种高危基因,在急性颅脑创伤中预示不良的预后;在APOEε3/3和APOEε4/4基因型中,COG1410均具有降低早期脑损伤、改善预后的作用。