靶向髓样分化蛋白—2特异性抗炎多肽的优化

目的对原始多肽即靶向髓样分化蛋白-2（MD-2）拮抗多肽T6、T11 进行突变多肽库的构建、筛选和功能鉴定,以获得具有更高抗炎活性的多肽.方法：以前期合成的可阻断MD-2 与内毒素（LPS） 结合但效率不高的原始多肽T6 和T11 序列为基础,每次随机突变相邻的3~5 个氨基酸,保留剩余氨基酸,并同时在肽链的氨基端和羧基端引入额外的两个氨基酸,构建大容量的噬菌体突变肽库;再用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合的多肽.最后用细胞实验和动物实验验证所获特异多肽的抗炎效果：①用获得的多肽200 μg/ml 分别孵育巨噬细胞和人单核白细胞2 h,再用内毒素（LPS）1 μg/ml 刺激6 h.以单纯细胞培养液培养的细胞和LPS 刺激6 h 的细胞作对照.② C57 小鼠腹腔注射获得的多肽200 μg/ml, 1 h 后腹腔注射LPS 400 μg/ml,6 h 后取血.以腹腔注射生理盐水1 ml 或LPS 的小鼠作对照.每组5 只小鼠.采用ELISA 法测定各组细胞培养上清和各组小鼠血清的肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平.结果：成功构建出原始多肽T6 和T11 序列为基础的突变肽库,用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合多肽A8、H2、F5、H5、H9,通过细胞实验筛选得到有抑炎效果的多肽2 条（A8、H2）,可以明显抑制LPS 所致细胞分泌TNF-α 和IL-6 水平的增高.动物实验发现只有1 条多肽（H2）可以明显抑制LPS 所致小鼠血清TNF-α 和IL-6 水平的增高.结论：成功构建了突变肽库,并从中筛选出一条具有高效抗炎效应的多肽.

新型微生物源生防乳剂对稻瘟病的防效

以清水、乳化剂和溶剂病指的加权均数为参比,以来源于多粘类芽孢杆菌LM-3菌株的极端嗜热多肽APPLM3为主效成分配得的5种微生物源生防乳剂对水稻稻瘟病进行了室内和田间防效试验。结果表明,母液对稻瘟病菌产生足够强的拮抗作用,拮抗活性较稳定;5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾,其中处理AB4的防效最佳,达80.73%,其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50∶6.5∶1.75∶41.75。首次报道了常温细菌产生的极端嗜热多肽对稻瘟病菌表现出强的拮抗作用。