CCR5第二胞外环的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响

目的:研究与CC趋化因子受体5(CC chemokine receptor 5,CCR5)第二胞外环特异性结合的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响。方法:筛选最适宜的卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏浓度,构建OVA诱导的BALB/c小鼠哮喘模型。模型构建成功后通过尾静脉注射不同浓度拮抗短肽干预模型小鼠,HE染色对肺组织进行病理细胞学分析及炎症分级,real-time PCR与Western blot实验分别检测小鼠肺组织TNF-α的mRNA和蛋白表达水平。结果:筛选出的OVA最佳致敏浓度为500 mg/L(0.1 mL)。尾静脉注射0.2m L不同浓度(1.5 g/L、2.5 g/L和3.5 g/L)拮抗短肽干预哮喘小鼠,能减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达,以2.5 g/L浓度效果最佳,较模型组炎症程度减轻2级,炎症细胞数明显减少,TNF-α的mRNA表达量较模型组下降近90%,蛋白表达水平下降约70%。同时该短肽(2.5 g/L)也起到了一定的预防作用,炎症程度改善1级,TNF-α的mRNA及蛋白水平较模型组下降约50%左右。结论:CCR5第二胞外环的拮抗短肽能有效减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达。

CCR5第2胞外环特异性拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织自噬相关基因的表达和自噬泡形成的影响

目的研究CC趋化因子受体5(CCR5)第2胞外环特异性拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织自噬相关基因Beclin1、ATG5、LC3的表达和自噬泡形成的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为5组,每组各8只,空白对照组小鼠予生理盐水腹腔注射致敏、生理盐水滴鼻激发,致敏组小鼠予鸡卵白蛋白(OVA)致敏、生理盐水激发,哮喘模型组小鼠予OVA致敏、OVA激发,地塞米松磷酸钠(Dex)组小鼠予OVA致敏、激发后予Dex尾静脉注射,拮抗短肽组予OVA致敏、激发后予拮抗短肽尾静脉注射。分别采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法和透射电镜评估哮喘小鼠肺组织中自噬水平的变化。结果哮喘模型组的Beclin1、ATG5和LC3mRNA表达水平及LC3蛋白表达水平均低于空白对照组(P均<0.05),拮抗短肽组的Beclin1、ATG5、LC3mRNA和蛋白表达水平均高于哮喘模型组(P均<0.05)。透射电镜显示,哮喘模型组小鼠肺组织中自噬泡数量较空白对照组稍减少,自噬泡主要位于具有免疫功能的2型肺泡上皮细胞。拮抗短肽组、Dex组中自噬泡数量较模型组增多,但多为未成熟的自噬泡,且自噬泡同样主要位于2型肺泡上皮细胞中。结论哮喘小鼠存在自噬功能障碍,CCR5第2胞外环的特异性拮抗短肽能升高哮喘小鼠肺组织中自噬相关蛋白Beclin1、ATG5和LC3的表达水平。

CCR5第一、二胞外环特异性结合短肽对大鼠损伤性结肠上皮细胞的重建作用与机制

目的探究CC趋化因子受体5(CCR5)第一、二胞外环拮抗短肽对大鼠损伤性结肠上皮细胞的重建作用与机制。方法原代培养大鼠结肠上皮细胞并鉴定;建立由TNF-α诱导的损伤性结肠上皮细胞模型;CCK8法检测两短肽(分别简称GH和HY短肽)对损伤性上皮细胞生长的影响;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测各组(正常对照组、损伤模型组、各浓度GH短肽组、各浓度HY短肽组)黏蛋白2、occludin、CCR5、表皮生长因子(EGF)、三叶因子3(TFF3)的mRNA和蛋白表达水平。结果150ng/ml TNF-α作用细胞48h后可获得损伤性上皮细胞;GH和HY短肽在0.125~0.500mg/ml浓度下均能促进损伤性上皮细胞增殖;0.125~0.500mg/ml浓度的GH短肽组和HY短肽组occludin、EGF、TFF3的mRNA和蛋白水平均比损伤模型组高(P均<0.05);0.500mg/ml浓度的GH短肽组和HY短肽组黏蛋白2的mRNA和蛋白的表达均比损伤模型组高(P均<0.05);0.250~1.000mg/ml浓度的GH短肽组、0.500~1.000mg/ml浓度的HY短肽组CCR5的mRNA和蛋白表水平达均比损伤模型组低(P均<0.05)。结论CCR5第一、二胞外环特异性结合短肽在一定浓度范围内可促进损伤性上皮细胞的增殖,其机制可能与促进黏蛋白2、occludin、EGF、TFF3的表达有关。