指甲DNA提取及其STR分型

指甲DNA提取以往仅采用Chelx100方法[1、2],其提取的DNA量少,且含大量抑制剂,影响STR分型.为提高DNA提取浓度,有效去除抑制剂,本文作者在以往方法的基础上进行改进,取得较好的效果,现报道如下.

游离缘指甲DNA检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合状态的变化

目的 探讨异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）后用患者指甲游离缘标本进行短片段重复序列（short tandem repeat,STR）基因分型和供受者嵌合率检测的适用性,并观察移植后患者指甲中供受者嵌合状态变化.方法 选取2009年7月至2011年9月在北京市道培医院行allo-HSCT的25例患者及25名供者.采集患者及其供者外周血、骨髓、指甲游离缘和口腔黏膜标本.提取标本中基因组DNA,进行15个STR位点的基因分型和嵌合状态分析.将患者分为2组：第1组包括12例患者,在接受allo-HSCT后1个月内分别同时采集患者的指甲游离缘标本和口腔黏膜标本,并做嵌合状态的比较；第2组包括13例患者,观察患者行allo-HSCT后3个月指甲标本中的嵌合状态,并对其中3例患者进行多次指甲标本采集和嵌合状态检测.结果 在第1组12例患者中,指甲标本均检测为患者自身的STR基因型；在4份口腔黏膜标本中检测到供受者混合嵌合状态,供者STR基因型所占比例分别为16.7％、32.1％、35.8％和60.7％.在第2组13例患者中,5例患者存在供受者细胞的混合嵌合状态,即受者指甲中出现供者的STR基因型,嵌合率在6.7％至82.6％之间.3例行allo-HSCT后多次检测指甲嵌合率的患者中,1例始终未检测到供者基因型的嵌合,另2例患者中检测到持续存在的供者基因型的嵌合.结论 移植后1个月内采集的指甲游离缘标本可用于患者STR基因型鉴定和供受者嵌合率分析,优于口腔黏膜标本.供者的移植物中具有可以分化成为皮肤组织的细胞,部分患者移植后皮肤中可长期存在供者来源细胞的嵌合状态.

压力循环技术用于人指甲DNA提取及方法学评价

目的将压力循环技术（PCT）用于指甲DNA提取,并对方法学进行评价。方法收集10份人指甲样本,剪碎约为1mm×1mm大小,采用10%漂白粉水,10%SDS,10%漂白粉水,无菌水清洗样本。10份样本各分成两组,1组用压力循环技术处理,另1组不作处理,提取DNA经复合扩增并进行STR分型检测,用于评价压力循环技术的作用。取5份指甲样本用血浸泡,5份用去离子水浸泡,之后采用上述清洗方法各清洗1-3次,收集各次清洗用的无菌水提取DNA,经STR分型检测,用于评价清洗对去除外源性DNA的效果。结果 10份经压力循环技术处理的样本中有7例比相应未经处理样本DNA提取量更高,但两组进行统计学处理,差异不具有统计学意义（P〉0.05）;两组样本中提取DNA含量在0.026 ng以上的样本均得到完整的STR分型,与相应口腔拭子样本对照准确无误。血污染和非血污染样本清洗二次以上,均可避免外源性DNA的污染。结论使用压力循环技术并配合本文清洗方法,可有效提高人指甲DNA的提取效率,并避免外源性生物DNA的干扰,保证DNA分型结果的准确。

指甲内侧DNA检验成功率影响因素探讨

人体指甲接触其他个体时,指甲内侧会留下少量的其他个体DNA,对它的检验是当代案件侦破的热点。在不同情况下,指甲内侧DNA检验的成功率差异较大。影响指甲内侧DNA检验成功率的主要因素有个体差异、案件性质和案件发展过程、检材的前处理、检材提取是否正确以及能否正确判读分型结果等,该文详细综述了指甲内侧DNA检验成功率的影响因素。