干性增强的小鼠胚胎成纤维细胞来源的挤压囊泡抑制多种肿瘤细胞生长

目的:探究小分子化合物联合3D培养对小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)干性的影响,及其挤压囊泡对不同肿瘤细胞生长的影响。方法:首先,分别采用不同浓度的小分子药物β-烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)、甜菜碱、雷帕霉素和维生素C在2D培养条件下处理MEF,实时定量荧光PCR检测八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)mRNA表达水平,筛选出促进MEF干性的最适浓度;将4种药物按最适作用浓度进行2种、3种、4种组合处理MEF,筛选最适组合。其次,将筛选出的药物组合联合3D培养,通过实时定量荧光PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测干性指标Oct-4和Nanog的mRNA和蛋白表达水平,筛选出促进MEF干性的最适组合培养方法。最后,再利用挤压法将MEF制备成囊泡,并处理小鼠肝癌细胞Hepa1-6、肺癌细胞Lewis和胶质瘤细胞GL261,CCK8法分别检测囊泡对3种肿瘤细胞和MEF生长的影响。结果:NMN、甜菜碱和雷帕霉素促进MEF干性的最适浓度为10μmol/L,维生素C的最适浓度为100μmol/L;NMN+甜菜碱组合促进MEF干性的效果最强。与2D培养组相比,NMN+甜菜碱联合3D培养组MEF Oct-4 mRNA表述水平明显增高,提高近600倍(P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示,甜菜碱+维生素C、NMN+甜菜碱、雷帕霉素+甜菜碱等联合3D培养组Oct-4、Nanog蛋白表达水平明显升高,其中NMN+甜菜碱联合3D培养组表达水平最高(P<0.05)。NMN+甜菜碱联合3D培养组细胞挤压囊泡明显抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6、胶质瘤细胞GL261和肺癌细胞Lewis生长(P<0.05),而对MEF的抑制作用不明显。结论:NMN+甜菜碱联合3D培养能够明显增强MEF干性,其挤压囊泡能够明显抑制Hepa1-6、Lewis和GL261等肿瘤细胞生长。