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过表达类光捕获蛋白3降低水稻籽粒中三烯生育酚含量
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作者 赖晓凤 罗凯晴 +4 位作者 万小荣 陈洁 郎兴宣 马晓智 李春梅 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2022年第3期28-33,共6页
类光捕获蛋白3(Light-harvesting like protein 3,LIL3)是光捕获复合物蛋白超家族(Light-harvesting complex,LHC)的一员,其特征是存在一个保守的LHC motif序列.水稻(Oryza sativa L.)LIL3参与叶绿素、生育酚侧链的生物合成.维生素E包... 类光捕获蛋白3(Light-harvesting like protein 3,LIL3)是光捕获复合物蛋白超家族(Light-harvesting complex,LHC)的一员,其特征是存在一个保守的LHC motif序列.水稻(Oryza sativa L.)LIL3参与叶绿素、生育酚侧链的生物合成.维生素E包括生育酚和三烯生育酚2种,是一类重要的脂溶性化合物,具有抗氧化活性.为了探究LIL3对水稻籽粒维生素E含量的影响,在日本晴(Oryza Sativa spp.Japonica.)中过表达LIL3,得到了稳定的转基因株系.分别对野生型和过表达植株穗长、每穗粒数、粒长、粒宽以及籽粒中的维生素E含量做了分析.结果表明:与野生型相比,LIL3过表达植株的穗长、粒长和粒宽没有明显变化,每穗籽粒数略有所下降.籽粒中三烯生育酚含量降低. 展开更多
关键词 水稻 维生素E 类光捕获蛋白LIL3
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小飞蓬捕光叶绿素结合蛋白基因CcLhca-J9克隆及表达分析 被引量:2
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作者 李祖任 罗丁峰 +5 位作者 柏浩东 徐晶晶 韩进财 徐强 王若仲 柏连阳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期86-94,共9页
【背景】恶性杂草小飞蓬(Conyza canadensis)危害严重,有效治理手段匮乏。植物源羊脂酸可高效抑制小飞蓬光合作用,是一种具有开发潜力的灭生型植物源除草化合物。捕光叶绿素a/b结合蛋白(LHC)是光合系统I(PSI)中重要复合体蛋白,在植物进... 【背景】恶性杂草小飞蓬(Conyza canadensis)危害严重,有效治理手段匮乏。植物源羊脂酸可高效抑制小飞蓬光合作用,是一种具有开发潜力的灭生型植物源除草化合物。捕光叶绿素a/b结合蛋白(LHC)是光合系统I(PSI)中重要复合体蛋白,在植物进行光合作用中发挥关键作用。【目的】挖掘羊脂酸抑制小飞蓬的潜在靶标基因,为植物源羊脂酸除草剂的开发提供理论依据。【方法】采用同源克隆和RACE技术从小飞蓬叶片中克隆CcLhca-J9的全长序列,并利用DNAMAN分析其核酸序列特征。在NCBI中搜索LHC的高相似度氨基酸序列,采用邻接法构建系统进化树。利用SWISS-MODEL和ExPaSy在线预测分子量、等电点和蛋白结构。以同源建模结果作为模型,采用AutoDock 4.2软件分析羊脂酸与CcLhca-J9蛋白之间的亲和力。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析羊脂酸和对照药剂阿魏酸及清水处理小飞蓬叶片后CcLhca-J9表达差异。【结果】成功获得小飞蓬CcLhca-J9,基因编码区全长为744 bp,编码247个氨基酸,分子量为26.766 kD,理论等电点为6.43,属于Chloroa_b-bind家族蛋白。系统进化分析表明,CcLhca-J9与除虫菊(GEW73959.1,Tanacetum cinerariifolium)和黄花蒿(PWA35049.1,Artemisia annua)Lhca蛋白进化程度最为接近,同处于菊科这一分支,一致性超过85%,表明该基因家族保守性较强。CcLhca-J9蛋白二级结构具有螺旋、β转角、延伸链、无规则卷曲;以4y28.1.O(2.80Å)为模板进行同源建模,三级结构是单分子物体,具有6个叶绿体a配体,是一个典型的捕光复合物I叶绿素a/b结合蛋白。分子对接显示,羊脂酸与CcLhca-J9蛋白的氨基酸残基Gly68、Phe67、Phe69和Arg197在结合过程中产生了氢键和p-π的作用力。RT-qPCR结果显示,羊脂酸胁迫处理小飞蓬叶片条件下,CcLhca-J9的表达量存在明显差异,药后0—8 h内随时间延长表达量表现出下降的趋势。与对照阿魏酸和清水处理相比,羊脂酸处理抑制了CcLhca-J9的表达。【结论】CcLhca-J9具有典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能,可能参与了羊脂酸抑制小飞蓬叶片生长过程,是具有开发除草剂潜力的抑草靶标。 展开更多
关键词 小飞蓬 捕获蛋白 基因克隆 分子对接 羊脂酸
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筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
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作者 李小勤 唐宜桂 +2 位作者 刘琛 雷婷 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第7期879-882,共4页
目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.co... 目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 乳源抗癌六肽 GST pull-down 诱饵蛋白 捕获蛋白 靶点蛋白
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小飞蓬捕光蛋白CcLhca-Z6基因克隆及羊脂酸胁迫下的表达分析
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作者 徐晶晶 苑平 +2 位作者 柏浩东 廖海民 李祖任 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期932-938,共7页
为了探究羊脂酸对小飞蓬的化感作用,以羊脂酸处理小飞蓬的蛋白质组学数据信息为基础,采用同源克隆和RACE技术克隆了编码CcLhca-Z6基因的完整cDNA序列,利用荧光定量PCR比较了羊脂酸处理后不同时间CcLhca-Z6表达量的差异。结果表明,CcLhca... 为了探究羊脂酸对小飞蓬的化感作用,以羊脂酸处理小飞蓬的蛋白质组学数据信息为基础,采用同源克隆和RACE技术克隆了编码CcLhca-Z6基因的完整cDNA序列,利用荧光定量PCR比较了羊脂酸处理后不同时间CcLhca-Z6表达量的差异。结果表明,CcLhca-Z6基因序列全长1016 bp(Gene Bank序列号为MH512007.1),编码266个氨基酸,分子量为28.14 kDa,理论等电点为5.29;小飞蓬Lhca-Z6蛋白与黄花蒿(PWA84283.1)蛋白进化程度最为接近,处于同一分支,亲缘比较近。RT-qPCR分析结果显示,羊脂酸处理显著影响小飞蓬叶片CcLhca-Z6基因的表达,并随着处理时间的延长呈现先升高后降低的趋势。由此推测,CcLhca-Z6基因可能是小飞蓬响应羊脂酸胁迫的关键基因。本研究结果为进一步探索植物源除草剂羊脂酸的作用机理奠定了基础。 展开更多
关键词 小飞蓬 羊脂酸 捕获蛋白 基因克隆 基因表达
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胃癌组织中HEG1、KRIT1的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 方玲 夏永欣 张向东 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2022年第6期778-785,共8页
目的:分析胃癌患者癌组织中具有表皮生长因子(EGF)样结构域的心脏发育蛋白1(HEG1)、Krev相互作用捕获蛋白1(KRIT1)的表达及其临床意义。方法:选取我院2014年9月至2016年9月收治的胃癌患者85例,术中收集胃癌组织85例以及癌旁正常黏膜组... 目的:分析胃癌患者癌组织中具有表皮生长因子(EGF)样结构域的心脏发育蛋白1(HEG1)、Krev相互作用捕获蛋白1(KRIT1)的表达及其临床意义。方法:选取我院2014年9月至2016年9月收治的胃癌患者85例,术中收集胃癌组织85例以及癌旁正常黏膜组织57例。采用免疫组化法检测组织中HEG1、KRIT1蛋白表达,分析HEG1、KRIT1蛋白水平与患者临床病理特征及预后的关系,并通过Ualcan数据库分析HEG1、KRIT1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者总生存率的关系;Cox回归分析影响胃癌患者预后的因素。结果:Ualcan数据库显示,胃癌组织中HEG1、KRIT1 mRNA水平均高于正常黏膜组织(P<0.05),HEG1 mRNA高表达患者总生存率低于低表达患者(P<0.05);胃癌组织中HEG1、KRIT1蛋白阳性率均高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05),胃癌组织中HEG1、KRIT1蛋白阳性率与患者胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05),HEG1、KRIT1蛋白阳性患者5年生存率均低于阴性患者(P<0.05),且二者同时表达阳性的患者生存率更低(P<0.05)。肿瘤低分化、有淋巴结转移、HEG1及KRIT1蛋白阳性是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中HEG1、KRIT1均呈高表达,二者水平可预测患者预后。 展开更多
关键词 胃癌 具有表皮生长因子样结构域的心脏发育蛋白1 Krev相互作用捕获蛋白1 临床病理特征 预后
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盐藻LHCB3蛋白的表达纯化及抗体制备
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作者 赵锐 金楠 +4 位作者 陈卫民 马根 徐青锐 乔代蓉 曹毅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期847-850,共4页
为了解盐生杜氏藻(Dunaliella salina)主要光捕获蛋白LHCB蛋白的功能,将已获得的盐藻Lhcb3基因构建到原核表达载体pET32a-DsLhcb3,通过优化表达条件,建立了高效的重组系统.pET32a-DsLhcb3在大肠杆菌中的优化表达条件为1 mmol/L IPTG在3... 为了解盐生杜氏藻(Dunaliella salina)主要光捕获蛋白LHCB蛋白的功能,将已获得的盐藻Lhcb3基因构建到原核表达载体pET32a-DsLhcb3,通过优化表达条件,建立了高效的重组系统.pET32a-DsLhcb3在大肠杆菌中的优化表达条件为1 mmol/L IPTG在37℃下诱导4 h.采用镍离子亲合层析纯化获得LHCB3蛋白,并以此为抗原制备了多克隆抗体,经琼脂糖扩散检测效价,在1:16处有明显沉淀.提取盐藻总蛋白,经过制备的LHCB3抗体杂交,在29 000处获得两条明显的杂交条带,为进一步研究盐藻LHCⅡ蛋白表达机理奠定了基础. 展开更多
关键词 盐生杜氏藻 光系统Ⅱ 捕获蛋白 表达纯化 抗体
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Dynamics of gene regulatory networks with stochastic propensities
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作者 O. Akman T. Comar +2 位作者 A. L. Harris D. Hrozencik Y. Li 《International Journal of Biomathematics》 SCIE 2018年第3期23-35,共13页
Gene regulatory networks (GRNs) control the production of proteins in cells. It is well-known that this process is not deterministic. Numerous studies employed a non- deterministic transition structure to model thes... Gene regulatory networks (GRNs) control the production of proteins in cells. It is well-known that this process is not deterministic. Numerous studies employed a non- deterministic transition structure to model these networks. However, it is not realistic to expect state-to-state transition probabilities to remain constant throughout an organ- ism's lifetime. In this work, we focus on modeling GRN state transition (edge) variability using an ever-changing set of propensities. We suspect that the source of this variation is due to internal noise at the molecular level and can be modeled by introducing addi- tional stochasticity into GRN models. We employ a beta distribution, whose parameters are estimated to capture the pattern inherent in edge behavior with minimum error. Additionally, we develop a method for obtaining propensities from a pre-determined network. 展开更多
关键词 Molecular noise network simulation beta distribution
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