基于捕集柱阵列的制备型二维液相色谱纯化烟草中的4个组分

二维液相色谱(2D-LC)因具有较高的峰容量,在复杂样品的分离分析中获得了广泛的关注。然而,制备型2D-LC以纯化高纯单体为目标,在方法开发和设备构成等方面与分析型2D-LC有较大的不同,目前尚未得到充分的开发,在大规模的制备纯化中应用较少。本文以一套制备液相色谱模块为分离系统,以稀释泵、切换阀和捕集柱阵列为接口,构建了新型的制备型2D-LC系统,旨在规模化纯化多个活性成分。以烟叶中可以用作医药原料的烟碱、绿原酸、芦丁和茄尼醇等组分为目标物,考察了不同类型填料对样品的捕集效率、过载条件下的色谱保留行为等,优化了制备色谱条件。进而利用在线2D-LC系统实现了烟叶提取物的纯化,通过一次运行获得了4个高纯化合物。该系统具有中压色谱纯化成本低、系统在线运行自动化程度高、稳定性好及容易放大等优点。烟叶中活性化学成分的回收利用对促进烟草行业的发展及带动地方农业经济开发具有重大的意义。

基于2D-HPLC结合捕集柱技术测定人血中双氯芬酸钠浓度及其应用

目的建立二维高效液相色谱法(2D-HPLC)结合捕集柱技术测定健康受试者血中双氯芬酸钠的浓度,并将其应用到药代动力学和生物等效性研究。方法采用随机交叉试验设计,18例健康男性志愿者分别高脂饮食后口服双氯芬酸钠缓释片受试制剂或参比制剂,2D-HPLC测定血浆中双氯芬酸钠的血药浓度,计算药动学参数及相对生物利用度。结果 18名受试者单次口服100 mg双氯芬酸钠缓释片受试制剂或参比制剂后的主要药动学参数AUC0→16、AUC0→∞、tmax、ρmax分别为(2 591.6±705.8)和(2 588.8±772.0)ng·h·m L^(-1)、(2 896.4±839.7)和(2 700.3±806.1)ng·h·m L^(-1)、(4.6±0.7)和(4.4±0.9)h、(1 332.8±912.5)和(1 325.7±706.3)ng·m L^(-1)。受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(102.4±15.1)%。结论2D-HPLC结合捕集柱技术测定人血浆中双氯芬酸钠浓度简单、快速、专属性高,高脂饮食后单次口服双氯芬酸钠缓释片受试制剂和参比制剂生物等效。

2D-HPLC结合捕集柱同时测定黄连药材中6个生物碱

目的：建立二维高效液相色谱法（2D—HPLC）结合捕集柱同时测定黄连药材中非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法：第一维液相色谱系统色谱柱为Kromasil—C18（100mm×4．6mm，5μm），流动相为100mmol·L^-1磷酸二氢铵溶液（pH为5．30）-乙腈（50：50）；第二维液相色谱系统色谱柱为Ultimate XB—Phenyl柱（250mm×4．6mm，5μm），以100mmol·L^-1磷酸二氢铵溶液（用磷酸调节pH为3．30）（A）一乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（1～2min，36％B-30％B；2—10min，30％B→34％B；10—16min，34％B→64％B）。采用“中心切割”模式及捕集柱转移目标物，检测波长345nm，柱温40℃。结果：不同产地黄连药材中非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱在19rain内完成分析，含量分别为3．8—4．4、3．3—4．0、10．1～11．2、18．9—20．8、14．4～16．6、55．6～61．3mg·g^-1。6个生物碱的平均回收率为95．5％-104．2％，RSD为0．23％～1．4％。结论：该方法能同时测定黄连药材中非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量，可用于黄连药材的质量评价。

二维液相色谱接口的改进及其在蛋白质组学研究中的应用(英文)

随着蛋白质组学、本草物质组学等组学概念的提出,所需分析的样品的成分越来越复杂,因此具有强大分离能力的多维液相色谱技术受到人们越来越多的关注。二维液相色谱中第二维的分离性能和速度是整个分离系统性能的关键。基于捕集柱模式,我们采用经特殊设计的流路系统,使得双捕集柱型接口具有预分离的功能。样品从第一维流出以后被富集在捕集柱1的柱头,经过脱盐后,正冲捕集柱,捕集柱1与第二维色谱柱联用对富集的样品进行分离,增加了第二维分离效率。当捕集柱上的样品全部被洗脱到第二维色谱柱上时,捕集柱2已经完成对第一维洗脱液中样品的捕集和脱盐,此时将阀进行切换,捕集柱2与第二维色谱柱直接相连进行洗脱。循环切换捕集柱1和捕集柱2,维持较高的阀切换频率,实现了第二维色谱柱的连续洗脱。因此保证了第二维分离具有较快速度,同时具有较高的分离效率。使用35mm长捕集柱和十通阀为接口,以弱阴离子交换(WAX)色谱为第一维分离模式,以反相(RP)色谱为第二维分离模式,构建了WAX-RP二维液相色谱系统(2D-LC system)。以小鼠血清为样品对系统进行了初步评价。色谱流出曲线出现了明显的界面现象,这是由于捕集柱流动相中含有的较多盐分流出时的背景吸收造成的。同时,由于界面两侧的流动相黏度不同产生了黏性指进(VF)现象。当第二维色谱柱长度为50mm时,理论上可将第二维分离效能提高70%。该接口可以应用于多种二维液相色谱模式,适用于蛋白质组学和本草物质组学研究中对于复杂样品的分离分析。

高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱质谱法测定饮用水中22种邻苯二甲酸酯

建立了一种同时测定饮用水中22种邻苯二甲酸酯(PAEs)的高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱质谱方法:饮用水样品经针头过滤器过滤,选用Biphenyl液相色谱柱进行分离,以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相,电离模式为电喷雾正离子,选用多反应监测触发增强子离子扫描模式进行检测。结果表明,22种PAEs的灵敏度良好,定量限为0.001~0.1μg/L。配制浓度为0.1~100.0μg/L的混标溶液进行进样分析,分析结果显示,22种PAEs在该范围内的线性关系良好,相关系数均大于0.995,方法的平均回收率为82.9%~108.9%,相对标准偏差为0.9%~11.2%。同时,使用增强子离子扫描谱图进行搜库匹配,定性准确性高。该方法适用于饮用水中PAEs的检测。

二维液相色谱(SCX/RP)系统的构建及对珠蛋白水解产物的研究

以十通阀为切换接口,构建了SCX/RP常规柱二维液相色谱系统,并以珠蛋白水解产物的分析对其加以评价.样品首先由第一维阳离子交换色谱(HypersilSCX,100mm×4.6mmI.D.)在pH4.0的磷酸盐缓冲体系中分离,洗脱产物进入切换接口,样品组分被富集在捕集柱(HypersilBDSC18,15mm×4.6mmI.D.)中,进一步脱盐后被导入第二维反相色谱(HypersilBDSC18,250mm×4.6mmI.D.)分离分析.阳离子交换色谱采用逐步增加盐浓度的12步台阶等度间断方式洗脱,每次将洗脱产物捕集在捕集柱中进而由反相色谱分析,实现对第一维洗脱产物的切割转移及第二维分析.与一维色谱相比,二维液相色谱系统的分辨率、峰容量也得到提高,系统峰容量达到2280.