不同环境和营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌生长、产孢及几丁质酶表达的影响

[目的]研究温度、pH和不同营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)生长及产孢特性的影响,分析其在碳氮饥饿条件下几丁质酶的表达水平,优化该菌的培养条件,为该菌的扩大培养提供参考依据。[方法]将圆锥节丛孢菌AC-shz1菌株接种于YPSSA培养基,分别置于不同温度(15、20、25、30和35℃)、pH(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0)、碳源(果糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素、几丁质)、氮源(甘氨酸、苯丙氨酸、蛋白胨、酵母粉、硫酸铵、尿素)和碳氮比(1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、40∶1)环境条件下进行培养,观察并记录菌丝的生长速度及形态,测定其产孢能力;在碳氮源饥饿条件下,采用实时荧光定量PCR方法对4种几丁质酶基因的表达水平进行分析。[结果]圆锥节丛孢菌在温度15~30℃均能生长,其中以25℃时菌丝生长最快且产孢能力最强;在pH为6.5~7.5时菌丝生长良好,其中以pH 7.0时产孢能力最强。圆锥节丛孢菌最适菌丝生长和产孢碳源为葡萄糖和蔗糖,其中含葡萄糖的培养基产孢量最高;最适氮源为酵母粉和蛋白胨,含酵母粉的培养基产孢量最高,以葡萄糖和酵母粉为碳氮源的最适碳氮比为5∶1。与对照组相比,在碳饥饿条件下,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-14(AC-14,P<0.01)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-190(AC-190,P>0.05)基因转录水平上调,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-379(AC-379,P>0.05)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-483(AC-483,P<0.01)基因转录水平下调;在氮饥饿条件下,上述4种几丁质酶基因转录水平均极显著下调(P<0.01)。[结论]菌丝生长和产孢最适温度为25℃,最适pH为7.0,最适碳氮源分别为葡萄糖和酵母粉,最适碳氮比为5∶1。本研究结果为进一步研发具有高效的捕食线虫真菌生物防控制剂奠定了基础。

三江并流区澜沧江干流捕食线虫真菌的水陆分布模式探究

为研究三江并流区澜沧江干流水、陆生境中的捕食线虫真菌(Nematode-TrappingFungi,NTF)多样性分布差异,在该区域布设9个采样区对NTF进行调查,并分析NTF在澜沧江流域不同空间尺度下的水陆分布模式。每个样区设置水、陆对称采样点各5个,每个采样点用5点法采集水、陆样品各1份,共采集90份样品。采用单孢子挑离法获得NTF纯培养,结合形态学和分子生物学方法鉴定物种。共获得2属13种76株NTF,其中陆生土壤中检出2属11种49株,水体底泥中检出1属6种27株。结果显示,NTF物种组成在三江并流区澜沧江干流水、陆生境间存在较大差异,具有水陆异质性分布模式,干流陆地上具有比水生环境中更高的物种检出率和物种多样性;此外,与之前对澜沧江支流NTF的水陆分布研究结果相比,NTF在干流上水陆分布差异比支流更大,表明在流域生态系统中,NTF的监测结果同时也能反映不同空间尺度下的环境异质性,以流域为研究单元,以NTF为研究对象,可能更有助于了解微生物的空间分布格局。

捕食线虫真菌rDNA ITS区间RFLPs分析

利用PCR-RFLP方法对捕食线虫真菌进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4为引物对3属14种16个菌株的核糖体DNA转录间区（ITS）进行了PCR扩增，4种内切酶（AluI、HaeIII、HpaII、TaqI）酶切，结果表明不同属的ITS区长度没有明显差异，其长度范围在585～695之间。酶切图谱种间差别明显，种内基本一致，同属菌株图谱没有特异性，暗示传统的分属可能过细，某些属的成立还有待商榷，PCR-RFLP对确定疑难种的地位有重要意义，但不适用于种下水平的系统学研究。

洱海捕食线虫真菌生物多样性研究

[目的]调查洱海底泥中捕食线虫真菌生物多样性。[方法]采集洱海底泥616份,应用传统的分类鉴定方法分离、纯化和鉴定。[结果]共分离鉴定3属22种捕食线虫真菌,其中少孢节丛孢、弯孢节丛孢和长孢隔指孢为优势种,检出率分别为28.05%、16.04%和8.92%。通过对4个季节捕食线虫真菌多样性分析,发现夏、春和秋3季的生物多样性较丰富,多样性指数分别为2.59、2.47和2.34,冬季多样性指数较低,为1.48。在所分离到的捕食线虫真菌中,产黏性菌网的菌种占优势(41.00%)。[结论]洱海中存在丰富的捕食线虫真菌资源,其生物多样性具有季节性变化的特点,产黏性菌网的捕食线虫真菌为洱海中捕食线虫真菌的优势种群。

捕食线虫真菌捕食器相关基因标记Ⅰ.——REMI转化捕食线虫真菌及转化子特征分析

采用REMI技术转化了少孢节丛孢、指状节丛孢和贵州节丛孢3种捕食线虫真菌,并对转化条件、转化子的形态特征、胞外蛋白酶的分泌差异、抗性稳定性进行了测定,分析了转化子对线虫的致病性和对土壤抑菌作用的忍耐性。

洱海捕食线虫真菌生物多样性研究(英文)

[目的]调查洱海底泥中捕食线虫真菌生物多样性。[方法]采集洱海底泥616份,应用传统的分类鉴定方法分离、纯化和鉴定。[结果]共分离鉴定3属,22种捕食线虫真菌,其中少孢节丛孢(Arthrobotrysoligospora),弯孢节丛孢(A.musiformis)和长孢隔指孢(Dactylellaleptospora)为优势种,检出率分别为28.05%,16.04%和8.92%。通过对4个季节捕食线虫真菌多样性分析,发现夏、春和秋3季的生物多样性较丰富,多样性指数分别为2.59,2.47和2.34,冬季多样性指数比较低,为1.48。在所分离到的捕食线虫真菌中,产黏性菌网的菌种占优势(41.00%)。[结论]洱海中存在丰富的捕食线虫真菌资源,其生物多样性具有季节性变化的特点,产黏性菌网的捕食线虫真菌为洱海中捕食线虫真菌的优势种群。

漾濞核桃根际捕食线虫真菌多样性研究

2009～2010年从采自漾濞彝族自治县的500份核桃根际土壤样品中分离到3个属18种捕食线虫真菌,其中检出频率较高的是Arthrobotrys musiformis和Monacrosporium thaumasium,检出率分别为16.97%和12.96%。通过对四个季节捕食线虫真菌多样性分析,发现夏季和秋季的物种多样性指数较高,分别为2.38和2.35;其次是春季,为2.00;冬季的相对较低,为1.76。在所有检测到的捕食线虫真菌中,产黏性网的捕食线虫真菌占77.78%。

捕食线虫真菌在北京地区果园中的季节性分布(英文)

通过对北京海淀区2个苹果园和2个葡萄园根际捕食线虫真菌2年的季节性变化调查,共分离到199个捕食线虫真菌菌株,隶属3个属16个种,Arthrobotrysdactyloides分离频率最高,其次是A.oligospora,A.conoides和Stylopagesp.。捕食线虫真菌的数量在晚春夏初最丰富,秋季次之,冬夏最少。通过统计分析,捕食线虫真菌数量的季节性变化与温度线性相关,而与线虫总数S形相关,与土壤湿度和植物寄生线虫数量无显著相关。

捕食线虫真菌玻片制作方法的改进

利用插片培养法改进捕食线虫真菌临时玻片及永久玻片的制作,可以较好的观察到捕食线虫真菌的形态特征,拍摄到高质量的照片,更好的保护显微镜;牙签制作小室法减少了污染,节省时间,节约材料,观察效果好。

白马雪山牧场中捕食线虫真菌资源调查

目的:调查白马雪山牧场中捕食线虫真菌资源及其在不同基质中的分布情况。方法:2012年8月份从白马雪山牧场中采集了97份牦牛粪样,95份土壤样品,进行捕食线虫真菌的分离培养及鉴定。结果:共分离出4属16种捕食线虫真菌,其中1种未定名,Arthrobotrys oligospora和Arthrobotrys thaumasium在土壤样品及牦牛粪便中都出现,频率较高。结论:土壤中的捕食线虫真菌比牦牛粪样中的丰富,具有三维菌网的Arthrobotrys属菌株出现频率较高。

捕食线虫真菌的潮霉素抗性基因标记及其在土壤抑菌研究中的应用

用潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)转化了捕食线虫真菌蠕虫节丛孢Arthrobotrysvermicola;转化率为1～3个转化子μg-1DNA;转化子的潮霉素抗性稳定性为87 5%。选取了一个潮霉素抗性稳定、生长和形态与原始菌株相似的转化子Tav36,研究了其在土壤中的生长及其对线虫的捕食,证明了此转化子能够在自然土壤中正常地生长和捕食线虫,但其生长速率和对线虫的致病能力受到了土壤抑菌作用的抑制。

三种捕食线虫真菌的REMI转化

采用REMI(restriction enzyme-mediated integration)技术,成功地用潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)转化了捕食线虫真菌白色单顶孢(Monacrosporium candidum)、球状单顶孢(M. sphaeroides)和蠕虫节丛孢(Arthrobotrys vermicola)。这三种菌的转化率分别为10~18、25~35和0.2~3个转化子/μg DNA;它们的转化子的潮霉素抗性稳定性分别为12.5%、82.5%和87.5%。三种菌的野生型的生长在含有150μg/ml潮霉素的PDA培养基上完全被抑制,而它们的转化子一般都能在含有700μg/ml潮霉素的PDA培养基上正常生长。从每种菌中随机选择了40个转化子,在生长速率、菌丝形态、捕器形态及对线虫的捕食能力方面与野生型进行了比较,没有发现有明显差异。

程海捕食线虫真菌资源的调查

目的:对程海底泥中的捕食线虫真菌资源进行调查。方法:采集云南丽江程海底泥128份,应用传统的分类鉴定方法分离、纯化和鉴定。结果:共分离出捕食线虫真菌7种:少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)、多环单顶孢(Monacresporium polybrochum)、秀丽单顶孢(M.elegans)、奇妙单顶孢(M.thaumasium)、云南单顶孢(M.yunnanense)、中间隔指孢(Dactylella intermedia)和云南隔指孢(D.yunnanensis),检出率分别为9%、5%、1%、6%、14%、4%和3%,其中少孢节丛孢(A.oligospora)和云南单顶孢(M.yunnanense)为优势种。结论:程海中捕食线虫真菌种类较少,检出率较低。

西藏的捕食线虫真菌(英文)

从采自西藏海拔在３６４０～４３００米地区的１２５份土样中共检测到食线虫真菌４个属，共２８种。其中纤细梗虫霉Ｓｔｙｌｏｐａｇｅ ａｒａｅａ ，滑丝梗虫霉Ｓｔｙｌｏｐｏｇｅ ｌｅｉｏｈｙｐｈａ和印度单顶孢Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ为中国新记录。

影响捕食线虫真菌原生质体形成的因素分析

比较了不同的细胞壁降解酶、渗透压稳定剂、培养基、菌龄和酶解条件等因素对8种捕食线虫真菌原生质体形成的影响.在众多的影响因素中,培养基和配制酶液的缓冲溶液是提高原生质体得率的最有潜力的两个因素.采用优化的原生质体制备条件,其中6种捕食线虫真菌均获得了较高的原生质体得率(2.5×106～1.2×107个/mL).

宾川柑橘根际捕食线虫真菌资源的调查

调查2007年至2008年宾川不同地点柑橘园里捕食线虫真菌的季节性分布,采集了400份土样,共分到了23个种,属于3个属,其中新种1个,中国新记录种2个。检出频率较高的是Arthrobotrys oligospora,A.musi-formis和A.dactyloid,其次是Monacrosporiam ellipsosporum,M.thaumasium和M.eudermatum,优势种是A.oligospora,A.musiformis和A.dactyloid,捕食线虫真菌种类最多的是在夏季,其次是春季,最少的是秋季和冬季。

新鲜鹿粪便中捕食线虫真菌的分离和鉴定

从100份新鲜鹿粪样中分离到4种捕食线虫真菌,通过对其孢子着生方式、孢子形状、捕食器官等形态学观察,鉴定为节丛孢属(Arthrobotrys)的少孢节丛孢(A.oligospora)和弯孢节丛孢(A.musiformis),单顶孢属(Monacrosporium)的椭圆单顶孢(M.el-lipososporum)和白色单顶孢(M.candidum)。

中国的捕食线虫真菌 Ⅲ.花溪地区的捕食线虫真菌

从贵阳花溪地区分离到12种捕食线虫真菌,其中包括1个新纪录属,3个新纪录种。本文对3个新纪录种进行简略描述,并对一些节丛孢属捕食线虫真菌在花溪土壤中的垂直分布、季节变化以及作为根结线虫防治剂的前景进行了研究和评价。

水生捕食线虫真菌季节性分布及多样性研究

从云南滇池附近的三块水稻田和三口鱼塘中分离到的捕食线虫真菌种类比较相似,但从鱼塘中分离到的捕食线虫真菌种类要比水稻田中的少,两个生境中的优势种也不同.水稻田中,春季和秋季的优势种为Arbrostrys conoides,夏季和冬季的优势种为A.oligospora,秋季的捕食线虫真菌种类最多,春季次之,夏季和冬季最少;鱼塘中,春季、夏季和冬季的优势种均为Dactylellina ellipsosporum,秋季的优势种为A.ver-micola.夏季的捕食线虫真菌种类最多,其他三个季节的捕食线虫真菌种类相差不大.从湖南湘江衡阳段的300份泥土样品中,共分离、鉴定出17种水生捕食线虫真菌,东洲岛和新大桥水域分离的水生捕食线虫真菌比李坳水域分离的种数少.

几种家畜新鲜粪便中捕食线虫真菌分布情况的研究

为给家畜寄生性线虫病的生物防治积累基础资料,分别采集马、牛、羊、驴、猪的新鲜粪便,进行捕食线虫真菌的分离培养,调查了捕食线虫真菌在不同家畜粪便中的分布情况。结果表明,420份粪样,共分离出12种捕食线虫真菌,两种未定名,其中A.oligospora,M.ellip sosporum和A.musiform is在所调查的家畜新鲜粪便中都出现,而且频率较高,属于优势种。具有三维菌网的菌株出现频率较高。