Box-Behnken响应面法优化葛根异黄酮提取纯化工艺及损伤心肌细胞治疗作用研究

目的:采用Box-Behnken响应面优化葛根异黄酮最佳提取工艺,并研究葛根异黄酮对损伤心肌细胞的治疗作用。方法:在单因素实验的基础上,以料液比、提取时间、溶剂浓度为考察因素,以3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷的含量为评价指标,采用Box-Behnken响应面法设计实验,以葛根异黄酮总提取率为考察指标,通过分析回归方程模型,优选最佳提取工艺并验证工艺;采用MTT法检测葛根异黄酮对损伤心肌细胞的治疗作用。结果:Box-Behnken响应面法优化得到葛根异黄酮最佳提取工艺为:料液比为30 mg·mL^(-1),提取时间为100 min,乙醇体积分数为73%,葛根异黄酮的总提取率平均值为41.6 mg·g^(-1),与预测值42.08 mg·g^(-1),相对误差0.81%;葛根异黄酮对H 2O_(2)损伤的缺氧复氧模型和Na 2S_(2)O 4损伤的缺血再灌注模型OD值分别为0.7436±0.0292和0.7457±0.0094,细胞存活率分别为81.32%和73.41%。结论:优选葛根抗氧化活性异黄酮最佳工艺稳定,预测模型效果良好,且葛根异黄酮对心肌缺血有良好的治疗作用。

四逆汤水提物对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的:观察四逆汤水提物(Sinidecoction,SND)对培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧条件下的直接保护作用。方法:动态采集并分析正常对照组、缺氧复氧组、四逆汤水提物8.0、17.9、40.0、89.4、200μg/ml给药组心肌细胞在缺氧前,缺氧30、60、90、120、150、180min以及复氧30min和60min细胞搏动频率及收缩面积的变化;比色法测定培养液中LDH;使用MTT法测定心肌细胞存活量。结果:心肌细胞搏动频率及收缩幅度随着缺氧时间延长而逐渐降低,四逆汤水提物给药组(除8.0μg/ml组外)较缺氧复氧组搏动维持时间长,且200.0μg/ml组在复氧后能恢复搏动。缺氧3h缺氧复氧组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率较正常对照组升高(P<0.05);除8.0μg/ml组外,四逆汤水提物不同浓度组LDH漏出率较缺氧复氧组降低,存在浓度-效应关系。复氧1h,各给药组LDH漏出率也较缺氧复氧组低。缺氧复氧组与正常对照组比较,存活的心肌细胞减少(P<0.01);给药组心肌细胞存活量较高,呈浓度-效应关系。结论:四逆汤水提物可延长缺氧状态下心肌细胞的搏动时间,减缓收缩力的衰减,减少细胞膜损伤及提高缺氧复氧心肌细胞的存活量,表现出对心肌细胞的直接保护作用。

热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素表达的影响

目的观察热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P选择素(Ps)表达的影响。方法成年雌性Wistar大鼠40,只,随机分为3组。热休克组予全麻后高热处理致肛温达42±0.5℃维持15min制成热休克动物模型,24小时后热休克组及对照组结扎左冠状动脉前降支(LAD)1小时,再灌注2小时制成心肌缺血再灌注损伤动物模型,假手术组只于LAD处穿线。术毕测血清CK MB、心梗范围、热休克蛋白70(HSP70)、Ps。结果热休克组HSP70表达高于对照组及假手术组(P<0.05),后两组比较差异无显著意义(P>0.05);热休克组心梗范围、血清CK MB、Ps表达皆少于对照组(P<0.05);HSP70的表达与Ps的表达成负相关(r=-0.560)。结论热休克预处理对心肌缺血再灌注损伤有保护作用;Ps参与了心肌缺血再灌注损伤;HSP70可能有抑制缺血再灌注损伤心肌Ps表达的作用,这或许是热休克预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的另一保护机制。

莲心碱对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的 :研究莲心碱对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法 :实验大鼠 2 4只 ,随机分为 3组 ,每组 8只。假手术组 :冠状动脉左前降支 (LAD)处穿一丝线 ,但不结扎 ;损伤对照组 :结扎冠状动脉LAD ,造成心肌缺血再灌注损伤 ;药物组 :结扎冠状动脉LAD前静脉注射莲心碱 5mg·kg 1 。测定每组大鼠血清中磷酸肌酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性 ,丙二醛 (MDA)含量 ,心肌梗死范围 (IS)。结果 :与假手术组和损伤对照组比较 ,药物组血清CPK、LDH活性与MDA含量明显降低 (P <0 .0 1) ,心肌梗死面积减少 (P <0 .0 5 )。结论

通心络胶囊对大鼠急性缺血再灌注损伤心肌的保护作用及信号转导

目的:探讨通心络胶囊是否对缺血再灌注损伤的大鼠心肌有保护作用,以及保护的信号机制。方法:大鼠随机分为6组(n=6)(1)对照组;(2)缺血-再灌注组(IR组);(3)通心络组1(小剂量通心络,0.1 g/(kg.d));(4))通心络组2(大剂量通心络,0.5 g/(kg.d));(5)大剂量通心络+LY294002组;(6)大剂量通心络+PD98059组。LY294002,PD98059分别是PI3K/Akt、ERK1/2信号通路阻断剂,摘取大鼠心脏后进行离体Langendorff灌流,多导生理记录仪分别记录心率、心律、左室收缩末压(LVSP)和左室内压力的变化速率(+dp/dtmax);灌流液检测LDH、CPK、MDA水平及SOD活力。氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液染色法测定心肌梗死范围,心室肌检测iNOSmRNA和eNOSmRNA表达。结果:IR组心律失常较对照组增多,LVSP和+dp/dtmax明显下降,心肌酶升高,心肌iNOSmRNA和MDA增加,而心肌eNOSmRNA和SOD减少;通心络能使IR大鼠心功能明显改善,心梗范围缩小,心肌eNOSmRNA和SOD增加,而两信号通路阻断剂均能阻断通心络的部分作用。结论:通心络对缺血再灌注损伤心肌有保护作用;可能与激活PI3K/Akt、ERK1/2信号通路有关。

NO在外源性高浓度Ca^(2+)损伤心肌线粒体中的作用

目的 :探讨一氧化氮在外源性高浓度Ca2 + 损伤心肌线粒体中的作用。方法 :正常心肌线粒体分为单纯L -精氨酸 (L -Arg)组、Ca2 + 损伤组和左旋硝基精氨酸甲酯 (L -NAME)保护组 ,分别于含有 2 0 μmol/LEDTA、10 0 μmol/LCaCl2 以及 1μmol/LL -NAME +10 0 μmol/LCaCl2 的反应介质中孵育 ,然后测定线粒体活力、膜电位以及NO含量。结果 :Ca2 + 损伤组线粒体活力、膜电位明显下降 ,而NO-2 /NO-3 含量升高 ,且线粒体活力、膜电位与NO-2 /NO-3 含量呈显著负相关 (r=- 0 .5 2 97,P <0 0 1;r=- 0 6 0 41,P <0 0 1) ;L -NAME保护组线粒体活力与膜电位均明显高于Ca2 + 损伤组 ,但仍低于L -Arg组 ,而NO-2 /NO-3 含量低于Ca2 + 损伤组 ,且与L -Arg组无明显差异。结论 :外源性Ca2 + 可激活线粒体一氧化氮合酶 ,使NO生成增多 ,后者在线粒体活力与膜电位降低中起重要作用。

天保宁对阿霉素致大鼠心肌损伤心肌肌球蛋白重链变化的影响

目的 :观察天保宁对阿霉素所致大鼠心肌损伤时心肌肌球蛋白重链的变化及心肌结构的改变。方法 :采用雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 3组 :(1)正常对照组 :ip等体积生理盐水 ;(2 )阿霉素组 (Doxorbincin ,Adrinmycin ,ADR) :于实验开始后第 2、4天ipADR 1mg kg ;第 6、8天ipADR2mg/kg ;第 10、12天ipADR 3mg kg ;第 14、16天ipADR 4mg/kg ,16d累计用药剂量达 2 0mg kg。 (3)天保宁组 (ADR +天保宁 ) :ADR的剂量用法同ADR单用组 ,天保宁 (浙江康恩贝制药公司 ) 4 5 0mg/kg隔日灌服共 8d停药 2 4h后 ,称体重、心肌重量、左心室重量及心肌蛋白的提取、肌球蛋白重链(MHC)分析 ,电镜观察心肌细胞超微结构的变化。结果 :天保宁组大鼠的体重、心体比及左室心体比 (LVM BW )均较ADR组有显著改善 (vsP <0 0 1)。电镜下可见 ,ADR组心肌细胞严重损伤 ,提示有心衰发生 ,天保宁组大致正常。同时 ,天保宁组中α MHC向 β MHC转变减轻 ,α / β MHC较ADR组低 (P <0 0 5 )。结论 :天保宁可改善ADR对心肌损伤时的毒性反应 ,特别是减轻ADR对心肌肌球蛋白重链中α MHC向β MHC转变 ,具有抗重塑和抗心衰的作用。

生长激素对过氧化氢损伤心肌的保护作用及其机制

目的 研究生长激素(GH)对过氧化氢(H2O2)所致心肌损伤的保护作用及其机制。方法 根据在离体大鼠心肌细胞加入H2O2和GH量不同分为7组。测定心肌细胞存活力(CMV),培养液中乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)、心肌细胞内MDA、心肌细胞凋亡率(CMAR)、Bcl-2和Bad蛋白表达。结果H2O2可使培养液中LDH及MDA上升,心肌细胞内MDA上升,心肌细胞CMV、Bcl-2、Bad表达下降,CMAR增高。GH可使培养液中LDH、心肌细胞CMAR、Bcl-2、Bad表达恢复,对MDA无显著影响。结论GH减轻心肌细胞受H2O2损害是通过恢复Bcl-2和Bad基因调控,而不是通过减少氧自由基损害而取得的。

nmhaFGF对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、持续时间和发生率,评定心律失常分数;再灌注24h后,测定血清AST、LDH、CK-MB含量,并计算大鼠心肌梗死面积。结果:静脉注射nmhaFGF(20,40,80μg/kg)能明显抑制缺血再灌注引起的心肌损伤。和模型组相比,nmhaFGF各组大鼠的VT和VF发生率减少,出现心律失常的潜伏期延迟,持续时间缩短;另外心肌梗死区占左室面积的百分比及梗死区占危险区百分比均有所降低;此外,血清心肌酶含量AST、LDH、CK-MB显著降低;以80μg/kgnmhaFGF作用较明显,其作用强度与8mg/kg普萘洛尔相当。结论:nmhaFGF对大鼠缺血再灌损伤心肌具有保护作用。

动员大鼠自体骨髓干细胞修复损伤心肌

目的探讨应用rh G-CSF促进骨髓干细胞原位移植对损伤心肌的修复作用。方法采用异丙基肾上腺素腹腔注射建立大鼠急性心肌损伤模型;通过外源性细胞因子rh G-CSF动员骨髓干细胞增殖、释放、迁移归巢至损伤心肌局部;应用HE染色结合图像分析系统,对两组心肌进行对比性分析;应用八导记录仪检测心脏功能。结果原位移植组的心肌损伤面积小于对照组;原位移植组心脏收缩功能较对照组明显改善。结论腹腔注射异丙基肾上腺素可复制急性心肌损伤模型;应用骨髓干细胞动员剂rh G-CSF,可促进坏死心肌修复,提高心脏收缩功能。

西洋参茎叶三醇组皂苷对离体缺血再灌注损伤心肌的影响

目的 探讨西洋参茎叶三醇组皂苷 (PQTS)对大鼠离体缺血再灌注损伤心肌 AST、CPK、L DH及冠脉流量的影响。方法 采用大鼠离体心脏 L angendorff灌流模型 ,观察 PQTS对缺血再灌注损伤心肌冠脉流量及冠脉流出液中 AST、CPK、LDH释放量的影响。结果 与缺血再灌注组比较 ,PQTS(30、1 0 0、30 0μg/ ml)可以不同程度地降低冠脉流出液中的 AST、CPK、LDH的释放 ,并提高再灌注期间的冠脉流量。结论 PQTS对大鼠离体缺血再灌注损伤心肌具有一定的保护作用。

针刺手厥阴心包经穴对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞钙超载的影响

目的:观察针刺手厥阴经“内关”“郄门”穴在缺血再灌注损伤过程中对心肌细胞钙超载的影响。方法:实验分空白组、缺血再灌注模型组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组和针刺“支沟”对照组。电针大鼠心包经穴位20 min后,结扎左冠状动脉前降支40 min,心电图监测,再电针穴位20 min,松扎,恢复灌流60 min,摘取心脏,取心室肌制成心肌细胞悬液,细胞浓度为106个/mL,用DMSO溶解荧光染料,Fluo-3负载,激光扫描共聚焦显微镜下观察Ca2+的变化。结果:模型组细胞内Ca2+含量明显增高,荧光分布多,强度高。针刺心包经穴组与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:针刺手厥阴经穴能有效地抑制心肌细胞的钙超载,减轻损伤的程度,起到保护心肌的作用。

乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠损伤心肌和血液粘度的作用研究

目的:研究乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠损伤心肌的保护作用和血液粘度影响。方法:冰水游泳14d加末日腹腔注射垂体后叶素20U/kg造成大鼠寒凝胸痹模型。注射垂体后叶素30min内描记Ⅱ导联心电图变化;24h后,颈总动脉采血,检测血中CK、LDH水平和血液粘稠度,并取下心脏,观察心室形态学。结果:与模型组相比,预先给予复方丹参滴丸组及乌头赤石脂丸中、高剂量组能减缓Ⅱ导联J点上抬(P<0.05),降低血清CK、LDH含量和血液粘稠度(P<0.05),减轻心室肌组织受损程度。结论:乌头赤石脂丸能减轻寒凝胸痹大鼠的缺血心肌损伤,对缺血心肌有保护作用,并降低血液的粘稠度,这可能是其保护作用的机制。

心安颗粒抗实验性损伤心肌一氧化氮的作用

目的研究心安颗粒有无抗一氧化氮(NO)的作用。方法取SD大鼠用异丙肾上腺素复制心肌损伤模型,检测心肌组织中NO、一氧化氮合酶(NOS),观察其抗NO的作用。结果心安颗粒能降低大鼠损伤心肌中NO、iNOS、总NOS(P<0.05),高、中剂量组与黄芪精口服液作用相当,组间有量效关系。结论心安颗粒具有抗NO的作用。

川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌重要呼吸酶的影响

目的 :观察川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体中琥珀酸脱氢酶 (SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的影响及可能机制。方法 :结扎冠状动脉 3 0min后再灌 2 0min ,复制缺血再灌注模型。测定心肌线粒体中SDH、CCO、SOD和GSH·PX活力及MDA和细胞色素含量。结果 :缺血再灌组 (IR)SDH和CCO活力显著低于假手术对照组 ;缺血再灌加川芎嗪组 (IR +L)的SDH和CCO活力显著高于缺血再灌组 (P <0 0 1) ,MDA含量明显降低 ,SOD及GSH·PX活力也明显升高。结论 :川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌中SDH和CCO活力降低有显著的拮抗作用 ,其机理可能是通过提高对氧自由基的清除及抑制脂质过氧化。

西红花苷通过C/EBP-β/PGC-1α/UCP3途径对缺血缺氧损伤心肌的保护作用

目的探讨西红花苷对异丙肾上腺素所致心肌缺血缺氧模型大鼠的保护作用,并验证其作用机制是否与C/EBP-β/PGC-1α/UCP3信号通路有关。方法皮下注射异丙肾上腺素建立大鼠缺血缺氧模型后,分别灌胃给予西红花苷不同剂量干预(25、50、100mg/kg)。比较各组大鼠血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平以及大鼠CI及心肌梗死面积;比较各组心肌Akt、ERK1/2、C/EBP-β、PGC-1α、UCP3蛋白及基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠存活率极显著降低(P<0.01),血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平、CI及心肌梗死面积均极显著升高(P<0.01);心肌纤维排列紊乱且炎性细胞浸润明显;心肌Akt、ERK1/2蛋白表达均显著升高(P<0.05),C/EBP-β、UCP3蛋白及mRNA表达均极显著升高(P<0.01),PGC-1α蛋白及mRNA表达极显著降低(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组大鼠存活率显著升高(P<0.05),血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平、心肌梗死面积均极显著降低(P<0.01),CI显著降低(P<0.05),心肌纤维排列整齐且炎性细胞浸润明显减轻;Akt、ERK1/2蛋白表达均极显著升高(P<0.01),C/EBP-β蛋白及mRNA表达均极显著降低(P<0.01),PGC-1α蛋白表达极显著升高(P<0.01)而mRNA表达显著升高(P<0.05),UCP3蛋白表达无差异而mRNA表达显著升高(P<0.05)。与模型组、对照组比较,西红花苷中、高剂量均可显著提高大鼠存活率(P<0.05);显著降低大鼠血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α及NO水平(P<0.05);显著降低CI及心肌梗死面积(P<0.05);减轻炎症浸润且提高心肌细胞完整程度;显著升高心肌Akt、ERK1/2蛋白表达水平(P<0.05);显著降低心肌C/EBP-β蛋白及mRNA表达水平(P<0.05),显著升高PGC-1α、UCP3蛋白及mRNA表达水平(P<0.05);其中高剂量组综合效果较好。结论西红花苷对大鼠缺血缺氧损伤心肌具有明显的保护作用,其机制可能与调节C/EBP-β/PGC-1α/UCP3信号通路相关。

针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤心肌细胞蛋白激酶C表达的影响

目的研究针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤过程中心肌细胞蛋白激酶C(PKC)表达的影响,探讨PKC介导的信号转导机制在心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法电针大鼠手厥阴经穴位20分钟后,结扎左冠状动脉前降支40分钟,心电图监测,再电针穴位20分钟,松扎,恢复灌流60分钟,摘取心脏,免疫组化方法分析细胞蛋白激酶C的表达。结果缺血再灌注模型组PKC表达的阳性率明显增高,针刺手厥阴经穴后阳性表达率明显降低(P<0.01)。结论针刺手厥阴经穴对PKC表达有明显的抑制作用,从而发挥对心肌细胞的保护作用。

曲马多对心肌梗死急性期损伤心肌超微结构的影响

目的 通过观察心肌梗死急性期损伤心肌超微结构的变化 ,探讨曲马多对心肌的保护作用。方法 2 5～ 3 0kg家兔 1 6只 ,随机分为两组 :对照组 ,单纯结扎冠状动脉左对角支 ;曲马多组 ,于结扎前 1 0min静脉注射曲马多 4mg/kg ,并于结扎后 3h等量补充该药物。各组均行左股动脉穿刺监测MAP ,并分别于结扎前、结扎后 3h、结扎后 6h抽取颈外静脉血 ,测血中去甲肾上腺素的含量 ;于结扎 6h末取标本做电镜检查。结果 对照组在结扎后MAP明显降低 (P <0 0 1 ) ,曲马多组则无此变化 ;两组去甲肾上腺素差异表现不明显 ;电镜检查结果显示 ,曲马多组梗死区心肌细胞结构的破坏程度明显轻于对照组。结论 心肌梗死急性期曲马多可以减轻由于缺血所导致的心肌损伤程度。

糖调节蛋白78在脓毒症损伤心肌中表达的意义

目的研究脓毒症大鼠心脏组织内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组和脓毒症(0、4、8、12、24h)组,脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法(CLP)。术后测血压、心率及心电图同时测定心肌酶谱,光镜观察心脏的组织形态学,实时荧光定量多聚酶链式反应(实时PCR)检测心脏组织中GRP78 mRNA的表达。结果与脓毒症0h组及假手术组相比,脓毒症大鼠的血压、心率、心电图、心肌酶谱及组织学变化均随时间延长而变化明显(P<0.05);与脓毒症0h组及假手术组相比,脓毒症组大鼠心脏组织中GRP78 mRNA明显升高(P<0.05),4h时达到了峰值,随后开始下降,到12h与24h时下降明显,但仍然高于脓毒症0h组及假手术组(P<0.05)。结论脓毒症可能通过诱导过强的内质网应激反应参与了心肌组织损伤。

川芎嗪与阿魏酸配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的:观察川芎嗪与阿魏酸配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:将健康雄性SD大鼠64只,随机分为4组,每组16只。分别为正常组、假手术组、模型组及川芎嗪与阿魏酸配伍组。后2组制备大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型。造模6h后检测血清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);24h后取心脏,RT-PCR法检测细胞间黏附分子(ICAM-1)、P-选择素、E-选择素mRNA表达。结果:川芎嗪与阿魏酸配伍可明显降低心肌缺血再灌注损伤大鼠血清CK(P<0.01);但对血清LDH以及心肌SOD和MDA作用不明显(P>0.05);还可显著降低E-选择素、P-选择素mRNA表达(P<0.01)。结论:川芎嗪与阿魏酸配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌有明显的保护作用。