生精散对损伤精子DNA修复作用的初步研究

目的:探讨中药生精散对男性不育患者精子DNA损伤的修复作用。方法:选择56例少、弱精子症的不育患者,随机分为中药组和对照组,各28例。中药组服用生精散,对照组服用维生素C及维生素E,治疗1～3个月后复查精液常规及精子DNA碎片指数(DFI),观察两组行IVF-ET周期中获卵数、MⅡ卵子数、受精数、卵裂数、可用胚胎数、种植率、临床妊娠率及流产率。结果:两组治疗前精子密度、活力、活率及DFI值均无显著性差异(P>0.05),治疗后中药组精子活力、活率与治疗前及对照组比较显著提高(P<0.05),DFI值较治疗前及对照组明显下降(P<0.05)。中药组胚胎种植率及临床妊娠率(31.3%vs 15.3%,46.4%vs 21.4%)明显高于对照组(P<0.05),中药组流产率较对照组低(15.4%vs 33.3%)。结论:中药生精散能够明显降低不育患者精子DFI值,提示其能够通过对损伤精子DNA的修复作用,提高精子质量,改善IVF-ET治疗患者的妊娠结局。

中医药治疗精子DNA损伤的德尔菲研究

精子DNA是由父亲传递给子代的重要遗传信息载体,其完整性是保证父系遗传物质传递给后代的前提[1]。研究发现,精子DNA损伤(sperm DNA fragmentation,SDF)可导致精子受精能力下降、妊娠率降低,引起男性不育、配偶胚胎停育及流产,近20%的男性不育与SDF有关,其对生育的影响涉及多个环节,如受精、着床、植入、胚胎存活等[2]。目前检测男性生育能力的主要手段是精液分析,但其具有一定的局限性,约有15%的男性不育患者精液常规分析结果正常,而精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)高[3]。DFI代表精子DNA受损程度,其可以客观有效的评价男性生育能力,弥补精液检测的不足[4]。当DFI≥27%时,自然受孕率开始降低。因此,临床检测DFI具有重要作用[5]。

精子DNA损伤与精液常规参数、辅助生殖技术的相关性研究进展

随着不育症发病率的逐年增高,常规精液检测已难以满足临床精准评估男性生育能力的需求。近年来,精子DNA损伤检测成为生殖领域的研究热点。除精液常规检查和形态学评估外,该法也是常规评估男性生育力的一个重要检测方案。精子DNA损伤机制复杂,包括精子凋亡异常、氧化应激损伤、精子发育异常,可导致精子形态异常、浓度降低、数目减少及运动能力下降等精液参数的异常,与不育的发生、辅助生殖治疗结局、子代生长发育等情况密切相关。然而,精子DNA损伤与精液常规参数、辅助生殖技术的关联性尚未得到广泛证实,现对精子DNA损伤与精液常规参数、辅助生殖技术的相关性进行综述,为不育症的诊疗提供参考。

精子染色质完整性对功能的影响及其检测方法研究进展

精子染色质不仅携带父系DNA等遗传信息,还携带有结构蛋白、表观遗传信息、高级染色质结构(如基质附着区和端粒)等众多信息,这些信息在胚胎发育过程中均发挥着重要作用。本文主要综述了精子染色质携带的这些不同信息对精子功能和胚胎发育的影响及其相关检测方法的研究进展,以期为临床不育、胚胎停育和反复流产的病因筛查提供理论依据和科学的诊疗策略,改善自然受孕和辅助生殖助孕的妊娠结局。

不育患者精子DNA链损伤类型的研究及临床意义

目的:观察精子DNA单、双链损伤(SSB、DSB)在男性不育中的特征,探讨DSB与男性不育的关系,为男性不育的诊疗提供新的观察指标与思路。方法:选择男性不育患者60例以及同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性30例作为对照组,分析两组精子DNA损伤及精液主要参数的差异。精子浓度及活力采用计算机辅助精子分析系统,精子存活率分析采用低渗膨胀试验,精子形态采用Diff-Quik染色法,精子DNA损伤采用双尾彗星实验。结果:双尾彗星实验检测精子DNA完整性共有9种彗星模型。不育患者精子DNA损伤指数(DFI)为(33.8±13.1)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(19.2±11.4)%、SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(56.8±32.4)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(23.9±13.4)%、DSB占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(70.8±19.5)%;与对照组比较[分别为(16.3±7.9)%、(14.9±7.6)%、(91.4±27.8)%、(6.1±2.7)%、(37.4±11.3)%)],SSB-DFI无显著性差异(P>0.05),DSB-DFI、DFI和DSB-DFI/DFI显著高于对照组(P均<0.01),SSB-DFI/DFI显著降低于对照组(P<0.01)。绘制ROC曲线,DSB-DFI/DFI、DSB-DFI及DFI诊断男性不育最佳截断值分别为39.5%、15.85%和18.65%,ROCAUC、敏感度和特异性分别为(0.969,98.3%,90.0%)、(0.912,86.7%,80.0%)、(0.861,90.0%,70.0%)。不育组精子SSB-DFI及SSB-DFI/DFI与精液常规参数均无相关关系(P均>0.05),DFI与前向运动精子百分率、精子存活率及正常形态精子百分率呈负相关(P<0.05或P<0.01),与精子浓度无相关关系(P>0.05),精子DSB-DFI及DSB-DFI/DFI与精子浓度、精子存活率、前向运动精子百分率及正常形态精子百分率均呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论:影响男性不育的DAN损伤因素可能是DSB,而与SSB相关性不大,精子DNA链的损伤类型对男性生殖能力的评估有较大的参考价值。

六味地黄汤对雷公藤多甙损伤小鼠精子的影响

雄性小鼠灌胃雷公藤多甙２０、３０ｍｇ／ｋｇ，１４ｄ或２１ｄ均能引起精子损伤。六味地黄汤（剂量以ｇ生药／ｋｇ表示）以１５ｇ／ｋｇ或２５ｇ／ｋｇ灌胃能对抗雷公藤多甙以２０ｍｇ／ｋｇ灌胃１４ｄ所造成的精子损伤。通过对生育力的研究发现，雷公藤多甙以２０ｍｇ／ｋｇ灌胃雄性小鼠１４ｄ不能明显减少受孕雌性小鼠的只数，但能明显减少孕鼠的胎仔数。六味地黄汤分别以１５、２５ｇ／ｋｇ灌胃均能对抗雷公藤多甙降低胎仔数的作用。拆方研究表明：六味地黄汤全方与三泻（泽泻、丹皮、茯苓）、三补（熟地、山药、山茱萸）均有明显对抗雷公藤多甙损伤精子的作用。三泻与全方作用相当，而三补作用稍弱。

精子DNA损伤与不明原因复发性流产的关系

目的:探讨不明原因复发性流产与男方精子DNA损伤的关系。方法:精子DNA断裂损伤检测采用精子染色质扩散试验(sperm chromatin dispersion,SCD),以DNA断裂指数(DNA fragmentation index,DFI)表示。分别测定不明原因复发性流产(试验组,56例)男方与无流产史(对照组,31例)男方精子的DFI。结果:试验组DFI(11.0%～56.9%)高于30%的有21例(37.5%),对照组DFI(10.0%～36.8%)高于30%的有8例(25.8%)。复发性流产组的男方精子DFI均数比对照组精子DFI高(29.4%vs 25.5%),且差异显著(P<0.05)。结论:不明原因复发性流产可能与精子DNA损伤存在一定关系。

西维因致男性工人精子DNA损伤的机制初探

目的:探讨西维因农药暴露与男性工人精子DNA损伤的关系,并探讨其可能的机制。方法:选择某农药厂西维因生产男工31名为暴露组;该厂行政区男性员工36名为内对照组;同地区男性行政人员22名为外对照组。检测3组人群精子DNA损伤、精浆超氧化物歧化酶(SOD)活性及精子活性氧(ROS)含量。选用培养的小鼠精母细胞(GC2-spd细胞)进行体外功能学验证,在不同浓度西维因染毒条件下,分析细胞存活率、凋亡及SOD活性,ROS含量的变化。结果:与内、外对照组相比,暴露组男性精子DNA断裂损伤显著增加(P<0.05)、精浆SOD活性降低及精子ROS增加(P<0.05)。相关性分析的结果显示,精子DNA损伤与精浆SOD的活性负相关(r=-0.53,P<0.001),与精子ROS水平呈正相关(r=0.32,P=0.002)。小鼠精母细胞随西维因染毒剂量增加细胞存活率显著下降,凋亡增多并且细胞SOD减少及ROS增加(P<0.05)。结论:西维因可影响男性精液质量,其可能的机制是通过氧化应激导致精子DNA的损伤。

亚慢性镉中毒所致小鼠睾丸、精子损伤及锌保护作用研究

目的 了解亚慢性镉中毒对睾丸及精子的损伤及锌保护作用。方法 以ICR小鼠为研究对象 ,以不同剂量的氯化镉 ( 0 4,0 8,3 2mg/kg)每周连续 4次背部皮下注射染毒 ,连续 7周 ;皮下注射 1 6mg/kg氯化镉溶液的同时给予 3 5 0 μg/ml硫酸锌水溶液喂饲 7周为锌保护组。建立亚慢性镉中毒模型 ,并观察锌对镉所致睾丸组织病理改变以及对附睾精子畸变的影响。实验同时设立阴性对照组 (蒸馏水 ,ip)和精子畸变阳性对照组 (处死前 6d给予环磷酰胺 5 0mg/kg ,ip ,连续 2d)。结果 随着染毒剂量的增加 ,低、中、高各剂量组睾丸组织异常病理变化及精子畸形率呈逐渐增高趋势 ,表现出明显的剂量 反应关系。锌保护组与高、中染毒组比 ,精子畸变率明显降低 ,而与低剂量组和阴性对照组比较精子畸形率差异无显著性 ;同时镜下病理表现仅见生精细胞上皮层次略有减少 ,成熟精子数无减少现象 ,损伤程度明显低于相应染毒组。结论 镉对小鼠的睾丸和附睾有明显的毒性作用 。

复方玄驹胶囊联合维生素E对不育患者精子染色质损伤的影响

目的:初步探讨复方玄驹胶囊联合维生素E治疗方案对轻度少精子症和/或弱精子症患者精子染色质损伤的临床疗效。方法:50例精液异常的男性不育患者随机分为实验组(n=24)和对照组(n=26),分别予以复方玄驹胶囊+维生素E和单纯维生素E治疗3个月,运用计算机辅助精液分析系统(CASA)及精子染色质结构分析(SCSA)方法分析两组患者治疗前后精液常规参数和精子DNA损伤指数(DFI),比较治疗前后精液常规参数及精子DFI的变化。结果:实验组治疗后前向运动精子率为(21.55±8.68),对照组为(21.47±11.53),两组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。在实验组中治疗前DFI为34.09±10.32,治疗后DFI为29.57±12.19,与治疗前相比显著下降(P<0.05)。结论:复方玄驹胶囊联合维生素E治疗可有效改善不育患者精液质量,对精子染色质损伤有一定的改善作用。

精子DNA损伤对IVF/ICSI-ET结局影响的回顾性资料分析

目的:探讨精子DNA损伤对体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)结局的影响。方法:回顾性分析了初次行常规IVF和ICSI治疗的192例不孕夫妇的临床资料。分别比较行IVF和ICSI治疗时,精子DNA碎片指数(DFI)≤15%和DFI>15%的受精率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率的差异;并比较DFI>15%时,不同受精方式(IVF或ICSI)对受精率、优质胚胎率和临床妊娠率的影响。结果:在IVF或ICSI治疗周期中,精子DNA损伤对受精率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率均无影响(P>0.05)。在DFI>15%情况下,行IVF治疗的受精率、优质胚胎率、种植率和临床妊娠率与行ICSI治疗比较,无统计学差异(P>0.05)。结论:精子DNA损伤不影响IVF/ICSI-ET的结局。对于DFI>15%的患者ICSI-ET与IVF-ET的治疗结局相似。

肾虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠精子DNA损伤的影响

目的:观察肾虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠精子DNA损伤的影响。方法:将30只雄性昆明小鼠用计算机取随机数法随机分为正常对照组、模型组和补肾组3组。其中模型组和补肾组采用房劳加惊恐的复合伤肾法制造肾精亏虚模型。从造模结束次日起,所有小鼠与正常发情雌鼠配对饲养5天后,处死,取附睾精子,同时进行精子单细胞凝胶电泳(Single cell gel electropherosis,SCGE)、精子染色体结构分析(sperm chromosome structurea-nalysis,SCSA)检测其精子DNA损伤。取出雌鼠待其分娩。仔鼠饲养至6周龄时每组随机取出10只雄性仔鼠,用SCGE和SCSA检测其精子DNA损伤。结果:模型组小鼠与正常组相比精子细胞拖尾率(40.51±11.21vs23.64±9.86,P<0.01)和DFI(37.42±7.19vs17.11±4.98,P<0.01)均明显升高,补肾组(拖尾细胞率25.31±8.59,DFI24.31±7.99,P>0.05)虽然存在DNA损伤,但与正常组相比没有明显差异。模型组仔鼠精子细胞拖尾率(24.59±9.45vs18.53±8.51P<0.05)及DFI(32.18±9.90vs17.29±5.14,P<0.01)亦明显较正常组高,但补肾组仔鼠精子DNA损伤程度较轻(拖尾细胞率20.61±6.34,DFI15.22±7.49,P>0.05),与正常组相比没有明显差异。结论:经"惊恐、房劳"方法造模后,模型组小鼠精子DNA损伤程度明显上升,而补肾疗法则能较好地保护精子DNA完整性。肾虚雄性仔鼠精子DNA完整性有类似于父代的改变,但程度较轻。说明肾虚造成的生殖系统损害,可能通过DNA损伤影响了其仔鼠的生殖健康。

活性氧与精子DNA损伤的保护

适量的活性氧(reactive oxygen species,ROS)有利于精子的获能和顶体反应,高水平的活性氧会导致氧化应激。在氧化应激的作用下发生脂类氧化反应,精子DNA碱基对活性氧非常敏感,在脂类过氧化下会引起碱基修饰、DNA键断裂及染色质交联,使精子DNA受损。精子DNA损伤后会导致男性不育、反复自然流产、后代遗传风险和辅助生殖技术治疗的失败。因此,对精子DNA损伤的预防和干预就显得尤为重要。

精子DNA损伤对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨精子DNA损伤对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法首次行IVF助孕治疗的不孕夫妇51对,运用精子DNA碎片染色质扩散法(SCD)检测精子DNA完整性,夫妇行IVF助孕。于体外受精后第1天观察受精情况,第3天观察卵裂情况。结果精子DNA断裂指数(DFI)与受精率、受精卵卵裂率、2PN卵裂率均呈显著负相关(P均<0.05),与优胚率、2PN受精率无明显相关关系。结论精子DNA损伤影响体外受精的治疗结局。随着精子DFI水平的增加,受精率下降,进而对受精卵卵裂及胚胎的发育产生影响。精子DNA完整性可以作为精液质量的检测指标对体外受精结局进行预测。

精子DNA损伤因素研究进展

人类精子DNA损伤是男性生育力减退的重要原因之一,其可由多种因素诱发精子DNA链断裂或使其双链变性为单链等而形成。具有DNA损伤的精子可在一定程度上逃避体内精子的优化选择机制而将遗传缺陷传递给后代,精子DNA损伤可导致胚胎发育异常、早期流产和先天畸形等相关疾病。文章通过分析评价年龄、禁欲时间、环境、精子冷冻、氧化应激、微量元素以及染色质包装异常等因素对精子DNA损伤,阐述精子DNA损伤的研究现状,为进一步阐明精子DNA损伤的发生机制以及男性不育的预防、治疗和辅助生殖技术选用高质量精子提供基础材料。

麒麟丸联合维参锌胶囊治疗复发性流产史男性精子DNA损伤的临床观察

目的:探讨麒麟丸在男性不育患者精子DNA损伤中的保护作用。方法:选择66例合并有精子DNA完整性异常(DFI>15%)的复发性流产史男性不育症患者,随机分为治疗组33例和对照组33例。治疗组口服麒麟丸联合维参锌胶囊;对照组单独服用维参锌胶囊,共3个月。于治疗前及治疗3个月末采用计算机辅助精子分析(CASA)系统与流式细胞仪分别检测精液常规参数和DFI。使用SPSS19.0统计软件对治疗前后各项精液参数及DFI进行数据分析。结果:治疗前治疗组与对照组的精子密度、精子活动率、前向运动精子百分比和DFI差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后,治疗组精子活动率与对照组及治疗前相比有显著提高(P<0.01);前向运动精子百分比与对照组及治疗前相比有显著提高(P<0.01);精子密度比对照组及治疗前有显著提高(P<0.05);DFI较对照组及治疗前显著下降(P<0.05)。结论:应用麒麟丸联合维参锌胶囊治疗复发性流产史男性不育症患者,可以显著改善其精子活力与精子DNA完整性。

精子DNA损伤与精液参数、胚胎发育及早期自然流产相关性分析

目的:探讨精子DNA完整性与精液参数、体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)胚胎发育及早期自然流产的关系。方法:采用改良精子染色质扩散实验(SCD)检测1160个辅助生殖技术(ART)周期(899对夫妻)中精子DNA的完整性,以精子DNA碎片指数(DFI)为参数,将患者分为高DFI组(DFI≥25%)和低DFI组(DFI <25%),根据采用不同的体外受精方式将两组又分为IVF亚组和ICSI亚组,比较组间精液参数、受精率、卵裂率、可移植胚胎率、优胚率、临床妊娠率、早期流产率、分娩率。结果:精液参数(精液密度、精子活力、正常精子形态率)与DFI显著相关,差异具有统计学意义(P <0. 05),低DFI组中的IVF亚组的受精率、分娩率显著高于高DFI组,早期流产率显著低于高DFI组,差异具有统计学意义(P <0. 05),其余各亚组间的卵裂率、可移植胚胎率、优胚率、临床妊娠率均差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:精子DNA完整性与精液密度、精子活力、正常形态精子百分率呈负相关,对IVF的受精率、早期流产率和分娩率有显著影响,故建议在DFI≥25%时,优先考虑ICSI授精。同时建议将精子DNA完整性作为辅助生殖的常规精液指标。

氯乙酸甲酯染毒对大鼠精子DNA损伤的研究

目的应用精子单细胞凝胶电泳方法探讨氯乙酸甲酯对雄性大鼠精子DNA的损伤。方法将55只雄性大鼠按体重随机分成5组,4个剂量组分别给予4.3、8.6、17.2和34.4mg/kg的氯乙酸甲酯,对照组给予生理氯化钠连续经口灌胃13周处死,取附睾精子进行单细胞凝胶电泳试验。结果高剂量染毒组精子细胞拖尾率和尾长[17.4%,(5.80±6.56)μm]与对照组[5.5%,(2.70±1.76)μm]之间差异有显著性(P<0.05)。结论高剂量氯乙酸甲酯对雄性大鼠精子DNA有损伤作用。