双峰驼诱导排卵机理的研究.Ⅱ.双峰驼诱导排卵因子的靶器官及代谢动力学

应用同位素示踪技术 ,将公驼精清内的诱导排卵活性蛋白 (OIP)经12 5I标记后输入母驼阴道。示踪结果证明 ,OIP经阴道前端主动吸收 ,很快进入血液循环 ,其代谢动力学属于一级吸收二室开放模型 ,吸收速度常数 (ka)为 0 .0 6 7·min-1,吸收半衰期 10 .2 4min ,于 2 3min达峰浓度 (Cmax) 5 .15 μg·ml-1,清除半衰期 (t1/2 k)较长为 72 .6h ;从DEAE DE52 柱上洗脱的活性蛋白吸收后 ,不经过脊髓和卵巢反馈通路 ,而是经血液循环直达脑髅内的靶器官垂体 ,从而引起母驼释放促黄体素 (LH) ,至峰值出现 。

双峰驼诱导排卵因子的生物学活性测定

公驼精清经ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析，共收集到７个蛋白组份，回归本动物，确定了可以诱导母驼排卵的组份，并经等电聚焦电泳加以证实，此外，分析了公驼精清的氨基酸组成，并对活性组份试行进一步纯化。

双峰驼诱导排卵因子活性位序列测定与肽链结构研究

应用高效液相色谱仪、蛋白顺序仪和傅里叶变换离子回旋共振质谱仪等仪器 ,纯化并测试了公驼诱导排卵因子(OIF)的部分活性序列和降解过程。结果表明 ,公驼OIF是单链多肽 ,分为活性序列和相对稳定固定序列两部分 ,N 端的活性位序仅为 6个残基 :赖氨酸 缬氨酸 丙氨酸 苯丙氨酸 丝氨酸 苏氨酸。该因子的氧化降解过程在冰冻条件下是由氨基酸侧链基团的氧化和肽链的断裂共同引发的。

双峰驼诱导排卵因子结构的研究

应用岛津紫外分光光度计系统地扫描并记录了公驼精清 ,各活性组分以及诱导排卵因子的紫外吸收光谱。扫描结果证明 :公驼诱导排卵因子 (OIF)在精清内相对稳定的原因 ,是OIF在精清内由多层分子量不同、性质各异的蛋白质所包裹 。

双峰驼诱导排卵机理的研究Ⅲ——双峰驼诱导排卵因子分布与代谢途径的研究

从公驼精清内经 DEAE-DE52 柱上分离的诱导排卵活性蛋白 (Ovulation-inducingbioactive protein,OIP)应用 12 5I标记后输入母驼阴道 ,通过血液循环到达垂体。经测定 ,OIP遍布母驼体内各脏器 ,其中以垂体、肝脏、心脏、舌肌等浓度较高 ,而在眼角膜、耳尖部以及被毛中含量很少。消除半衰期长达 72 .6 h,其代谢主要经肝胆系统排泄 ,也有部分活性蛋白通过泌尿。

应用飞行时间质谱仪测定双峰驼诱导排卵因子(纯品)的分子量

应用基体辅助激光解析／电离飞行时间质谱仪（ＭＡＬＤＩ－ＦＯＴ－ＭＳ）快速、准确地测定了公驼精清内诱导排卵因子全序列的分子量为８２５１５１道尔顿；它的固定位序的分子量为６３６０３６道尔顿。

应用高效液相色谱法分离纯化双峰驼诱导排卵因子的研究

应用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）技术分离纯化了公驼精清内的各活性蛋白组分和用酸乙醇法抽提物的活性馏分；用分子排阻高效液相色谱测定了各馏分的分子量，继而将各主要馏分回归本动物，测试了它们的生物学活性。研究结果证明，公驼精清内的诱导排卵因子已被纯化，综合判断，它可能是一种新的排卵激素。

双峰驼诱导排卵因子氨基酸组成的分析

分别测定了纯化的公驼精清诱导排卵因子７的活性和固定部分肽类的小肽氨基酸组成，证明活性位序易降解，这一特性与其所含的丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸等有关。

碘标双峰驼诱导排卵因子的生物分布及代谢动力学

目的 :研究碘 12 5标记的双峰驼诱导排卵因子在母驼体内的生物分布特性及药代动力学模型 .方法 :采用高效碘标法 (NBS法 )进行12 5I OIF的标记 ,并于标记后不同时间测定其标记率以观察标记物的稳定性 .将12 5I OIF经母驼阴道输入给药 ,给药后不同时间采血 ,测定其放射性计数 ,用3P97药代动力学软件求取药代动力学参数 ;给药后处死骆驼 ,分别取主要脏器 ,经物理衰变校正后计算每克组织的放射性百分注射量 (%ID·g-1) .结果 :12 5I OIF的标记率 80 % ,放化纯度 95 % .将标记物室温下放置 96h ,测得其标记率为70 % ;12 5I OIF在母驼体内的生物学分布在肝中的浓集较高(肝脏代谢 ) ,在脑组织中以垂体的放射性浓聚最高 ;12 5I OIF的药代动力学参数分别为T1/ 2 (ka) 11.8h ,T1/ 2 (ke) 2 6 .4h ,AUC 11.0 6 1× 10 12 Bq·L-1.结论 :采用NBS法碘标的标记率高 ,稳定性好 ,操作简便 .12 5I OIF的药代动力学最佳数学模型符合一级吸收二室开放模型 。

双峰驼诱导排卵因子(OIF)纯品稳定性及其空间构象的初步研究

应用岛津 2 60紫外分光光度计分别扫描了不同条件下保存的诱导排卵因子 (OIF)纯品和经解离液处理后OIF空间结构的变化 ,扫描结果表明 ,在含纯氮的冷环境中 ,该因子基本上仍可保留其结构与特性 :该因子仍呈线状多肽 ,在空间结构上不存在氢键和二硫键。

精液中促排卵因子对母畜繁殖的影响

哺乳动物排卵的过程包括:脑下垂体前叶分泌LH到体循环后,下丘脑脉冲性释放GnRH到垂体门脉系统,而LH峰介导了卵泡成熟、卵泡破裂和排出。哺乳动物根据引起下丘脑分泌GnRH方式的不同分为自发性排卵(人、羊、牛、马和猪等)和诱发性排卵(兔、貂、猫和骆驼等)动物,这其中自发性排卵动物具有一定的发情周期。早期研究发现交配过程能促发羊驼和驼马的排卵,最新研究发现精液中存在一种促排卵因子(OIF),这有助于了解自发性和诱发性排卵动物排卵的机制。OIF能刺激LH分泌、排卵和黄体腺的发育,并且通过体循环而非局部通路发挥作用。OIF是一种能耐热和抗蛋白酶K消化的蛋白质分子(分子团为14kDa),它可能是一种蛋白复合体或者激素原的一部分。OIF发挥作用是和剂量相关的。OIF已被证实存在于骆驼、牛、马、猪和袋熊等动物中。OIF在自发性排卵动物中能介导初情期小鼠促排、能改变母牛卵泡波的动态变化、能提升LH的释放(体外培养大鼠、小鼠、豚鼠、兔、驼马和牛的脑下垂体细胞)。

双峰驼精清诱导排卵因子的研究进展

双峰驼具有独特的繁殖生理机能,是季节发情、诱导排卵的动物。文章对双峰驼繁殖特性和卵泡发育及诱导排卵因子的发现、分离和纯化、部分生物学性质等方面的研究进展进行了简要综述。

双峰驼精清诱导排卵活性因子的HPLC分离纯化及生物活性测定

利用C8 柱经HPLC对QHyperD柱分离的驼精清活性组分F3和F5进行分离纯化 ,大鼠垂体组织培养 ,RIA测定培养液中LH和FSH的浓度。实验结果表明 ,F3和F5经过HPLC纯化后 ,各得到 4个组分 ,分别以F3-1～F3- 4和F5 - 1～F5 - 4表示。其中F3- 3和F5 - 3可引起体外培养的大鼠垂体LH的释放显著增加 ,但均未引起FSH发生明显变化。用C18柱经HPLC或毛细管电泳对F3- 3进一步纯化 ,无论在HPLC或毛细管电泳仪中 ,F3- 3均呈现两个波峰 ,而且间隔非常靠近 ,说明F3-

双峰驼精清诱导排卵活性因子的阴离子交换柱Q Hyper D层析分离及生物活性鉴定

利用阴离子交换柱QHyperD对双峰驼精清进行分离 ,大鼠垂体组织培养及母驼肌注活性组分 ,RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆中LH及FSH的浓度。实验结果表明 ,驼精清经QHyperD柱层析后 ,共得到 6个组分 (F1～F6 ) ,其中F3和F5在大鼠垂体组织培养实验中具有生物活性 ,可引起LH的明显释放 (P <0 .0 5 )。在体实验时给卵巢上有成熟卵泡的母驼分别肌注F3或F5 ,肌注后 5～ 7h ,LH的释放也明显增加 (P <0 .0 5 )。F3可引起母驼发生排卵 ,F5则不能 ,说明F3可能就是驼精清中的诱导排卵活性因子或其成分之一。另外 ,无论是F3或是F5 。

双峰驼诱导排卵活性蛋白馏分氨基酸组成的分析

应用氨基酸自动分析仪测试了公驼精清经离子交换纤维素ＤＥＡＥＤＥ５２和大孔硅胶Ｄｉｏｌ－１０００在Ｈｐｌｃ上先后洗脱出的活性馏分Ｌ２－２。测试结果表明，可以诱发母鼠超数排卵的Ｌ２－２馏分中氨基酸组成中，两种酸性氨基酸（天门冬氨酸、谷氨酸）占该馏分氨基酸总量的２５３％，而３种碱性氨基酸（组氨酸、赖氨酸、精氨酸）仅占总量的６５％，因此活性馏分是一种酸性蛋白质。

双峰驼精清诱导排卵活性成分的DEAE-纤维素柱层析分离及其生物活性

选用 DEAE-纤维素离子交换柱对双峰驼精清进行分离 ,各层析组分用于大鼠垂体组织体外培养 ,并给母驼肌注有活性的组分 ,以 RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆中 LH及 FSH的浓度。结果表明 ,驼精清经 DEAE-纤维素柱分离后可得到 5个蛋白组分 ( L1～ L5) ,其中 L3在大鼠垂体培养时引起 LH的释放明显增加 ( P<0 .0 5) ,FSH则无明显变化。给卵巢上无大卵泡发育的母驼肌注有活性的组分 L3 ,可引起血浆中LH明显升高 ,FSH也无变化。由此表明 ,L3在体内外试验中均具有引起 LH释放的生物活性 ,它可能是诱导排卵的活性因子或其成分之一。

双峰驼精清及其活性组分凝集素寡糖的初步研究

应用植物血凝素与寡糖结构相同或相似的糖复合物专一凝集的原理与方法，结合小鼠排卵试验，间接观察了公驼精清及其经ＤＥ－５２离子交换层析和高效液相层析提取分离的活性组分的蛋白组成。结果表明，公驼精清内糖蛋白含有２种以上的寡糖。

双峰驼精清及其活性组分和馏分色氨酸含量的测定

应用岛津荧光分光光度计，测试了公驼精清、活性组、馏分以及诱导排卵因子的色氨酸含量。结果证明公驼精清和活性组、馏分含微量色氨酸；排卵因子是否含色氨酸详见讨论。

家兔性行为形成机制研究进展

诱发性排卵动物家兔具有旺盛的繁殖能力。传统的生殖激素,如雌二醇,孕激素(受体)与其性行为的发生密切相关。生殖激素促使家兔产生躯体感觉信号作用于中枢神经系统,使下丘脑产生促性腺激素释放激素,继而垂体于排卵前产生黄体生成素峰,诱发家兔排卵。研究发现,新的生物学分子,如卵巢肾素-血管紧张素系统、排卵诱发因子等与家兔诱发性排卵的关系密不可分。家兔的特征性性行为包括引体向上,脊柱前弯症等。这些不同性行为的产生受不同神经中枢调节。甚少有国内研究关注到家兔性行为的神经定位。论文将对家兔性行为与生殖激素、诱发排卵、中枢定位之间的相关关系做一综述,为研究者更好的理解家兔性行为形成机制进行动物医学及人类生殖医学模型载体奠定基础。

骆驼

S824.3 20020624双峰驼诱导排卵因子(OIF)纯品稳定性及其空间构象的初步研究/潘光武(中国农业科学院兰州兽医研究所730046),肖昭彭,刘湘涛…∥中国草食动物.-2001,3(3).