排除法PCR加变性梯度凝胶电泳鉴别未知基因

通过鉴别未知的cry4亚组基因来确定排除法PCR加变性梯度凝胶电泳新方法。方法 :应用排除法PCR的组基因和亚组基因引物扩增杀蚊毒素基因 ,cry4。这些引物是根据已知的cyr4基因的共有或特有DNA片段来设计的。组基因引物扩增产物被用于变性梯度凝胶电泳。平行变性梯度凝胶是由 8%的聚丙烯酰胺加上 2 0 %到 80 %的变性剂组成。结果 :已知的和未知的cry4亚组基因被组基因引物扩增的产物在变性梯度凝胶电泳被分离开。尽管它们之间仅有两个碱基对不同 (T在位置 2 2 4和G在位置 394)。应用组基因和亚组基因引物扩增 ,新发现的基因可被分类到次亚组基因水平。从 5个苏云金芽孢杆菌亚菌中发现三个未发表的cry4亚组基因。结论 :排除法PCR加变性梯度凝胶电泳是一个高度敏感、特异性和可靠性强的新方法 ,可用于鉴别各种未知的亚组基因。

苏云金菌杀蚊新基因和菌株的筛选

目的 测定杀蚊毒素cry 4与cyt基因的分布 ,并检出其未知的基因。方法 从基因库中找出并比较全部cry 4与cyt基因的DNA序列 ,根据其共有和特有的片断 ,设计出相应的引物。用这些引物扩增的PCR产物被变性梯度凝胶电泳分析 ,排除从已知的cry 4与cyt基因扩增出来的PCR片断而检出未知基因的PCR片断。结果 总共测出从未报道过的cry 4与cyt基因在杀蚊苏云金杆菌的分布 44个。并发现 8个可能的新的cry 4和cyt基因。它们是cry 4Ab ,cry 4Ac,cry 4Bb ,cyt 1Ac ,cyt 2C ,cyt 1相关基因 ,苏云金杆菌亚株medellin特异性cyt 1基因 ,亚株jegathesan特异性cyt2基因。结论 根据该实验结果和以前的报告 ,将杀蚊苏云金杆菌分为 3组。其中 ,苏云金杆菌亚株jegathesan可作为亚株israelensis的替换菌株 ,以避免蚊虫的耐药性。