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乳酸杆菌组成型启动子探测载体pgateway-612的构建 被引量:2
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作者 陈家锃 崔红玉 +4 位作者 田志军 葛俊伟 安同庆 彭金美 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期849-853,共5页
为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编... 为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探测载体 Gateway克隆技术 X-gluC
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乳酸菌启动子——信号肽探测载体pZLB的构建及应用 被引量:2
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作者 陈秀珠 刘宗旨 还连栋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期101-104,共4页
A promoter\|signal peptide probe vector of lactic acid bacteria,designated pZLB based on pMG36e has been constructed.The vector contained a reporterd gene encoding for β lactamase,which lacked a promoter and a functi... A promoter\|signal peptide probe vector of lactic acid bacteria,designated pZLB based on pMG36e has been constructed.The vector contained a reporterd gene encoding for β lactamase,which lacked a promoter and a functional signal sequence.Sau3A restriction fragments (80-400bp) from L.lactis ATCC 7962 total DNA were cloned into Bam HI site of pZLB.A lot of different size framents were selected.These fragments promoted transcription and secretion of β lactamase in L.lac tis. Sequence analysis revealed that inserted fragment in pZLBe7 contained typical promoter,SD sequence and atypical signal sequence. 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子 信号肽探测载体 DN序列分析
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谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭型启动子探测载体构建 被引量:3
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作者 李开 赵智 +2 位作者 张英姿 王宇 丁久元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-196,共6页
从质粒pXZ10145和pUC19出发,构建了一个谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp,带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性选择标记,以及多克隆位点。在pAK6基础上,构建了以氯霉素乙酰转移酶为报告基因的启动子探测载体pAKC6,pAKC... 从质粒pXZ10145和pUC19出发,构建了一个谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp,带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性选择标记,以及多克隆位点。在pAK6基础上,构建了以氯霉素乙酰转移酶为报告基因的启动子探测载体pAKC6,pAKC6的大小为6474bp。采用鸟枪法,将经Sau3AI消化的谷氨酸棒杆菌基因组片段连入pAKC6;根据谷氨酸棒杆菌对氯霉素的抗性,从中分离出两个具有启动子功能的插入片段。通过测定报告基因氯霉素乙酰转移酶的活性,对两个启动子片段在谷氨酸棒杆菌中的强度进行了初步的判断;测序后,用启动子预测软件对其结构进行了预测,证实了启动子序列的存在。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 穿梭载体 启动子探测载体
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谷氨酸棒杆菌信号肽探测载体的构建及强信号肽筛选 被引量:2
4
作者 李川敏 张玮祎 +2 位作者 张献 刘红星 徐大庆 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期69-75,共7页
强信号肽的使用是提高蛋白分泌效率的关键,筛选强信号肽具有重要的应用价值。本试验以大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌基础穿梭载体pAU2为骨架,以枯草芽孢杆菌的碱性丝氨酸蛋白酶AprE为报告蛋白,分别使用强启动子tac-M和谷氨酸棒杆菌核糖体结合... 强信号肽的使用是提高蛋白分泌效率的关键,筛选强信号肽具有重要的应用价值。本试验以大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌基础穿梭载体pAU2为骨架,以枯草芽孢杆菌的碱性丝氨酸蛋白酶AprE为报告蛋白,分别使用强启动子tac-M和谷氨酸棒杆菌核糖体结合位点一致序列来控制报告基因的转录和翻译,成功构建谷氨酸棒杆菌信号肽探测载体pAU20。分别对来自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、以及谷氨酸棒杆菌中共16种Sec型信号肽编码序列进行PCR扩增,与pAU20连接,转化谷氨酸棒状杆菌,获得重组信号肽探测载体工程菌株。工程菌株摇瓶发酵培养物上清液AprE酶活测定结果表明,C. glutamicum/pAU20-Vpr、C. glutamicum/pAU20-BprA上清液比酶活分别为180.02和167.6U/mg蛋白质,均显著高于C.glutamicum/pAU20-cgr2070上清液比酶活(105.09 U/mg蛋白质);C. glutamicum/pAU20-oppA、C. glutamicum/pAU20-Epr、C. glutamicum/pAU20-cgr2063和C.glutamicum/pAU20-ywaD上清液比酶活分别为96.68、86.18、82.52和80.56U/mg蛋白质,均稍低于C. glutamicum/pAU20-cgr2070上清液比酶活。这些结果表明,信号肽Vpr、BprA、cgr2070、oppA、Epr、cgr2063和ywaD都属于谷氨酸棒杆菌强信号肽。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 信号肽探测载体 信号肽筛选
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几条随机克隆的香菇顺式因子特性分析
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作者 胡乐琴 陈明杰 +2 位作者 姚泉洪 熊爱生 潘迎捷 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第11期2340-2341,2347,共3页
分析了6个利用启动子探测载体和酵母表达体系克隆得到的香菇顺式调控因子的调控稳定性和序列结构特征。在酵母中进行2次转化,根据在X-gal培养基上的显色初步研究其调控稳定性;根据显色深浅不同,判断其调控能力的强弱,并结合序列特征结... 分析了6个利用启动子探测载体和酵母表达体系克隆得到的香菇顺式调控因子的调控稳定性和序列结构特征。在酵母中进行2次转化,根据在X-gal培养基上的显色初步研究其调控稳定性;根据显色深浅不同,判断其调控能力的强弱,并结合序列特征结构进行分析。结果显示,克隆片段在酵母中具有稳定的调控功能,所克隆序列具有丝状真菌生物启动子典型结构,如CT丰富区T、ATA框、GC框、CAAT框。详细分析了其中1条克隆片段序列特征,并与已知的香菇GPD启动子序列进行对比分析。初步探讨了香菇顺式调控元件的结构特点。 展开更多
关键词 香菇 启动子探测载体 顺式调控元件 酵母
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谷氨酸棒杆菌10147基因组中启动子活性片段的克隆与分析 被引量:8
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作者 刘桂明 赵智 +2 位作者 张英姿 王宇 丁久元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期972-977,共6页
【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告... 【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告基因编码的氯霉素乙酰转移酶(CAT)的比活力,以筛选有启动子功能的片段。【结果】共克隆到30个具有启动子功能的片段。其中有3个插入片段启动的氯霉素乙酰转移酶比活力大于24 U/mg,插入片段F57启动的CAT比活力为32.50 U/mg;而插入有启动子Ptrc的阳性对照的CAT比活力为26.33 U/mg。【结论】获得3个DNA插入片段具有与已知启动子Ptrc相当的启动活性,这些片段可以用于构建谷氨酸棒杆菌表达载体。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 启动子探测载体 启动子 氯霉素乙酰转移酶
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谷氨酸棒杆菌内源表达元件的筛选 被引量:4
7
作者 刘秀霞 赵子豪 +2 位作者 孙杨 杨艳坤 白仲虎 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1671-1678,共8页
【目的】构建谷氨酸棒杆菌表达元件探测载体,筛选能够启动蛋白表达的序列片段。【方法】基于谷氨酸棒杆菌表达载体p XMJ19,利用Golden Gate新型克隆方法构建表达元件插入位点,使筛选的片段能够与报告基因快速无缝衔接,同时避免残留额外... 【目的】构建谷氨酸棒杆菌表达元件探测载体,筛选能够启动蛋白表达的序列片段。【方法】基于谷氨酸棒杆菌表达载体p XMJ19,利用Golden Gate新型克隆方法构建表达元件插入位点,使筛选的片段能够与报告基因快速无缝衔接,同时避免残留额外的序列对表达元件效果测试产生可能存在的干扰。对本课题组前期的谷氨酸棒杆菌BZH001高、中、低溶氧条件下的发酵样品转录组数据进行分析,筛选出稳定于高转录水平的6个基因,通过软件预测每个基因的启动子区域和5′UTR区域,两者构成能够启动基因表达的功能性元件,并将其从基因组中克隆出来。以增强型绿色荧光蛋白基因egfp作为报告基因,快速测量出表达元件的效果。【结果】获得5个不同效果的内源性表达元件,最好的元件插入探测载体后在谷氨酸棒杆菌中表达的荧光强度大于3 500 RFU/OD600。【结论】通过结合转录组数据,探测载体能够快速有效筛选表达元件,为将来人们对谷氨酸棒杆菌基因工程改造和生物系统的构建提供更多基础材料。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 RNA-SEQ 启动子 探测载体
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Contactless probing of the intrinsic carrier transport single-walled carbon nanotubes 被引量:1
8
作者 Yize Stephanie Li Jun Ge +4 位作者 Jinhua Cai Jie Zhang Wei Lu Jia Liu Liwei Chen 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2014年第11期1623-1630,共8页
Intrinsic carrier transport properties of single-walled carbon nanotubes have been probed by two parallel methods on the same individual tubes: The contactless dielectric force microscopy (DFM) technique and the co... Intrinsic carrier transport properties of single-walled carbon nanotubes have been probed by two parallel methods on the same individual tubes: The contactless dielectric force microscopy (DFM) technique and the conventional field-effect transistor (FET) method. The dielectric responses of SWNTs are strongly correlated with electronic transport of the corresponding FETs. The DC bias voltage in DFM plays a role analogous to the gate voltage in FET. A microscopic model based on the general continuity equation and numerical simulation is built to reveal the link between intrinsic properties such as carrier concentration and mobility and the macroscopic observable, i.e. dielectric responses, in DFM experiments. Local transport barriers in nanotubes, which influence the device transport behaviors, are also detected with nanometer scale resolution. 展开更多
关键词 single-walled carbon nanotubes electronic transport dielectric force microscopy field-effect transistor carrier density carrier mobility
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