正常人群中发现Dystrophin基因外显子缺失的分子遗传学分析

目的对存在Dystrophin基因外显子缺失家系进行分子遗传学诊断,分析该家系Dystrophin基因突变情况及临床表型,探讨该基因缺陷的分子遗传学基础,为临床遗传咨询提供更多的咨询意见。方法采用染色体微阵列分析技术对胎儿染色体进行拷贝数变异分析,应用多重链接依赖探针扩增技术对胎儿Dystrophin基因进行外显子缺失检测,同时对家系其他成员进行Dystrophin基因外显子进行检测。结果染色体微阵列分析技术发现胎儿Xp21.1(31,738,181-31,806,661)缺失,多重链接依赖探针扩增技术检测出Dystrophin基因外显子51~52缺失,家系女性均为Dystrophin基因外显子51~52缺失携带者,两位男性为Dystrophin基因外显子51~52缺失半合子,一位男性未发现Dystrophin基因外显子缺失。结论 Dystrophin基因缺失突变可出现于正常人群,Dystrophin基因缺失突变不一定导致Duchenne/Becker型肌营养不良,为临床基因诊断及遗传咨询提供了重要依据。

杜氏肌营养不良症的临床表现与基因表型的关联

目的：分析杜氏肌营养不良症（DMD）患者的基因突变特点,探讨疾病的临床表现与基因型的关联。方法：回顾性分析52例DMD患者的临床表现和基因特点。结果：患者多表现为肢体无力、走路姿势异常,发育迟缓,部分患者伴智力下降,心脏功能减退等。多重链接探针依赖扩增技术发现基因检测无异常4例（7.69%）,DMD基因缺失40例（76.9%）,重复8例（15.3%）。基因突变发生在外显子45~55 22例（40.74%）,2~19区域10例（19.23%）。48例基因异常患者中,符合阅读框架原则42例（87.5%）。结论：基因缺失的大小与临床症状的关系不大,病情严重程度关键取决于突变是否会破坏阅读框结构。基因突变越接近5＇端对智力的影响越轻,越接近3＇端对智力的影响越重。

1个脆性X综合征家系的FMR1基因CGG重复及甲基化状态分析

目的应用PCR微流控芯片毛细管电泳联合MS-MLPA技术对1个脆性X综合征家系进行CGG重复序列和甲基化状态分析,探讨FMR1基因甲基化程度和临床表型的关系。方法应用PCR微流控芯片毛细管电泳法对该家系22个成员进行FMR1基因CGG重复数检测,采用甲基化特异性多重连接依赖探针扩增(MS-MLPA)技术检测FMR1基因启动子区域CpG岛的甲基化情况,并用Southern印迹杂交技术对全突变患者进行验证。结果22个家系成员中检出前突变携带者8例,全突变女性携带者1例,脆性X综合征男性患者4例。MS-MLPA分析发现女性正常型和前突变携带者的甲基化比值分别为0.25~0.48(中位数0.33)和0.33~0.46(中位数0.38),两组间差异无统计学意义(t=0.095,P>0.05),1例女性全突变携带者甲基化比值为0.52,高于正常型和前突变携带者,4例男性全突变患者甲基化比值均>0.64,中度智力障碍组和重度智力障碍组之间甲基化比值差异无统计学意义(t=0.58,P>0.05)。结论CGG重复数检测和甲基化分析可为脆性X综合征家系成员提供准确全面的分子诊断;男性患者临床表型和甲基化程度相关。

联合应用MLPA和测序技术检测地中海贫血基因缺陷

目的构建并优化可对HBA和HBB基因缺失和突变进行检测的技术,评价该技术应用于深圳市人群地中海贫血的诊断效应。方法联合采用基因测序技术和多重链接依赖探针扩增(MLPA)技术对收集的88例样本分别进行α地贫和β地贫的基因诊断,并用常规方法验证。结果从88例高度疑似地贫患儿中检出α地贫患者43例,β地贫患者40例,α合并β地贫患者5例。同时,MLPA技术检测出1例不常见的α珠蛋白大片段缺失型地贫,基因测序检测出1例HBA1基因突变。结论 MLPA技术和基因测序技术结合应用,能够有效地进行α地贫和β地贫的基因诊断,提高诊断的准确度,具有良好的临床应用价值。

等臂双着丝粒Ph染色体在慢性粒细胞白血病急淋变中的遗传学分析

目的研究等臂双着丝粒Ph染色体在慢性粒细胞白血病急淋变（1ymphoid blast crisis of chronic myeloid leukemia，CML-BLC）中的遗传学及临床特征。方法对2例CML—BLC患者采用24h骨髓培养法制备染色体标本，R显带核型分析，单核苷酸多态性分析（single nucleotide polymorphism，SNP）基因拷贝数变化。用荧光原位杂交（florescence in situ hybridization，FISH）技术验证SNP结果。用多重连接依赖探针扩增（multiplex ligation-dependent probe amplication，MLPA）检测急性淋巴细胞白血病相关基因如CDKN2A／2B和PAX5等的缺失或扩增。结果SNP证实例1的衍生9号有缺失及扩增，与FISH结果相符合。例1和例2的FISH分析可见BCR／ABL融合信号在等臂Ph染色体上，距离远近不同，排列方式为脚对脚（例2）和头对头（例1）。结论CML—BLC中等臂双Ph染色体预示对格列卫治疗抵抗，而用达沙替尼治疗有效。

Duchenne型肌营养不良分子遗传学分析

目的对临床诊断为Duchenne型肌营养不良（DMD）的患儿进行基因检测，分析抗肌萎缩蛋白基因（DMD基因）突变类型及变异大小，探讨DMD分子遗传学诊断策略。方法对临床诊断为DMD的28例患儿采用多重链接探针依赖扩增技术（MLPA）进行DMD基因检测，然后随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用DMD全基因捕获探针进一步行全基因组新一代测序（NGS），最后采用PCR和Sanger测序法对所得结果验证。结果采用MLPA技术对28例患儿进行检测，发现22例阳性结果，包括外显子大片段缺失突变16例，重复突变4例，同时合并缺失和重复突变2例；随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用NGS技术检测，发现3例外显子缺失突变（exon51del，chrX：31779857—31795289；exon53del，chrX：31685440-31747548；exork51-55del，chrX：31632504—31827732），及2例外显子重复突变（exon45dup，chrX：31970766—32023816；exon55dup，chrX：31540860—31649750），与MLPA结果一致，且精确定位了断裂点区域和片段大小，同时发现MLPA检测阴性的1例为点突变（exon54，chrX：31676176，C．7948delG，P．D2650IfsX12），该点突变经PCR扩增和Sanger测序验证，所得结果与NGS检测结果一致。结论DMD基因突变类型多样，包括外显子缺失和（或）重复、点突变等，应用MLPA技术能有效检出DMD基因外显子大片段缺失、重复以及杂合突变，应用NGS技术不仅能检出缺失和重复突变，并精确判断断裂点位置及大小，还能准确检出微小缺失和点突变，为临床DMD的早期诊断、预后判断及产前诊断提供遗传学帮助。