红霉素耐药肠球菌的质粒接合试验

目的研究儿童临床分离的30株肠球菌,红霉素耐药性在同属同种、同属异种和异属细菌之间的传递。方法使用临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的琼脂稀释法筛选30株耐红霉素的肠球菌,通过滤膜接合法进行质粒接合转移试验,采用 PCR 检测供体菌、受体菌和接合子 ermB基因和转座子 Tn1545、Tn917。结果 13株粪肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到13株接合子,红霉素最小抑菌浓度(MIC)≥512μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌阴性外,其余的12株接合子全部携带 ermB 基因,且 ermB 基因均同时存在于转座子 Tn1545和 Tn917;16株屎肠球供体菌和1株海氏肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到17株接合子,红霉素 MIC≥512μg/ml,除原供体菌1株屎肠球菌阴性外,其余16株接合子全部携带 ermB 基因,并且有11株接合子 ermB 基因同时存在于 Tn1545和 Tn917,4株接合子 ermB 基因仅存在于 Tn1545,1株接合子 ermB 基因仅存在于 Tn917;30株肠球菌通过质粒接合转移试验后得到的30株金黄色葡萄球菌接合子,红霉素 MIC≥512μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌和1株屎肠球菌阴性外,其余的28株接合子全部携带 ermB 基因,其中ermB 基因同时存在于 Tn1545和 Tn917的为23株,4株接合子 ermB 基因仅存在于 Tn1545,1株接合子 ermB 基因仅存在于 Tn917。结论肠球菌对红霉素的耐药性可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递;红霉素的耐药性与 ermB 基因存在一致,ermB 基因与 Tn1545和 Tn917密切相关,ermB 基因与 Tn1545和 Tn917可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递。

郑州地区痢疾杆菌耐药性质粒的接合转移试验

郑州地区痢疾杆菌耐药性质粒的接合转移试验郑州铁路局中心卫生防疫站（４５００５２）武建军，刘保勤，周秀梅，牛宏志耐药性质粒的接合转移试验，是调查和证实Ｒ质粒传递的一种遗传学传移试验方法。我们应用此方法，对郑州地区的痢疾杆菌耐药性质粒进行了试验研究，结果...

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要类型和流行病学分析

目的了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌(CRE)中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法收集上海瑞金医院2011年5月至2013年6月对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤22 mm的CRE共114株,采用PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaOXA-48、blaVIM、blaNDM)并对PCR扩增产物进行测序;所有菌株均进行了质粒接合试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对KPC-2检测阳性的肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果 114株CRE以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和肠杆菌属细菌为主,其中98株产碳青霉烯酶,以KPC-2酶为主要类型(78/98)、其次为IMP-4酶(15/98),IMP-8酶(2/98),1株肺炎克雷伯菌同时携带有blaKPC-2和blaIMP-4基因,还发现4株产NDM-1酶的菌株,未见OXA-48酶及VIM酶阳性菌株。21株(21.4%,21/98)CRE菌株转移接合试验成功。PFGE结果显示49株blaKPC-2阳性肺炎克雷伯菌共分为12个型,其中34株属于同一谱型(type A)。CRE菌株主要分离自ICU,共39株,其次为普外科14株,血液科11株,呼吸科9株,其余科室共41株。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型以blaKPC-2为主,其次为blaIMP-4,并发现4株blaNDM-1阳性CRE菌株,产KPC-2酶的肺炎克雷伯菌在外科ICU、呼吸科及胸外科等科室间存在克隆株的流行传播,应采取及时有效的防控措施。

多重耐药鲍曼不动杆菌质粒上Ι类整合子基因的研究

目的检测鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)质粒上Ι类整合子基因情况,以探讨质粒上Ι类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性的关系。方法对71株MDR鲍曼不动杆菌用VITEK分析仪进行药敏分析,通过PCR检测质粒上Ι类整合酶基因及Ι类整合子的可变区并进行测序。同时我们通过质粒的接合试验探索整合子基因是否会通过质粒进行传递。结果 71株鲍曼不动杆菌均表现为多重耐药,其中有67株(94.4%)检测出I类整合子系统,I类整合子阳性菌株中,44(65.7%)株细菌携带基因盒,且主要呈现3种大小,分别为3074、2600和1700bp。整合子可通过质粒的接合试验传递给受体菌并稳定传代。结论Ι类整合子在多重耐药鲍曼不动杆菌质粒上广泛存在,可变区可捕获不同基因呈多种类型,且可通过质粒水平传播,与鲍曼不动杆菌多重耐药性之间有密切的关系。

一株对3种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究临床分离的一株肺炎克雷伯菌(K30)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的机制。方法采用琼脂稀释法测定肺炎克雷伯菌K30对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)检测A类碳青霉烯酶(KPC)、B类碳青霉烯酶(NDM、IMP、VIM、SIM)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs,CTX、TEM、SHV)、头孢菌素酶(AmpC,FOX、EBC、ACC、DHA、CIT、MOX)基因和Ⅰ类整合子;实时荧光定量PCR分析肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的mRNA表达;利用质粒接合试验研究肺炎克雷伯菌K30耐药基因的水平传播能力。结果药物敏感性试验显示,肺炎克雷伯菌K30对包括碳青霉烯类抗菌药物在内的11种抗菌药物均耐药,仅对头孢西丁钠中介,对阿米卡星敏感。肺炎克雷伯菌K30的改良Hodge试验为阳性。PCR扩增A类碳青霉烯酶基因KPC和2种ESBLs基因CTX、SHV为阳性,其PCR产物经测序后同GenBank数据库比对证实分别为KPC-2、CTX-M3和SHV-38。其余耐药基因和Ⅰ类整合子扩增均为阴性。与肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)相比,膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的表达没有降低。质粒接合试验未成功获取结合子。结论临床分离的一株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌主要耐药机制与产A类碳青霉烯酶KPC-2合并产ESBLs有关,且KPC-2可能不由质粒介导。

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制研究

目的研究对氨基糖苷类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌分子流行病学特征和耐药机制。方法采用琼脂稀释法检测抗菌药物对鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),采用肠杆菌科基因间重复一致性序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)研究耐药菌株的分子流行病学特征,采用特异性PCR、序列分析和接合试验研究介导耐药的分子机制。结果临床分离菌株对包括氨基糖苷类抗菌药物在内的多种药物广泛耐药,同源性分析显示属于7个流行克隆型。所有分离菌株均扩增出介导氨基糖苷类抗菌药物耐药的修饰酶和药物"外排泵"基因,部分菌株扩增出甲基化酶基因。结论修饰酶和甲基化酶介导鲍曼不动杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药,药物"外排泵"参与介导耐药机制形成,垂直传播和通过耐药性质粒的水平传递可能是耐药菌株播散的主要方式。

质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的研究

目的研究质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及其对喹诺酮类药物耐药的作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的qnr基因进行筛选,用实验证明qnr基因可以通过质粒介导并在细菌之间传递。结果在145株大肠埃希菌和125株肺炎克雷伯菌中共检出16株细菌携带qnr基因,其中12株为大肠埃希菌,4株肺炎克雷伯菌。16株qnr基因阳性菌株均为产超广谱内酰胺酶(ESBLs)菌株且呈多重耐药性。结论共检出16株细菌携带qnr基因,其阳性率为5.9%,大肠埃希菌阳性率高于肺炎克雷伯菌。qnr基因可以通过质粒介导,从供体菌接合转移至受体菌,且qnr在接合子中较稳定。

4株产TEM型超广谱β内酰胺酶肠杆菌科细菌的研究

目的 :鉴定临床分离的 3株大肠埃希菌和 1株肺炎克雷伯菌所产的TEM型 β内酰胺酶编码基因的序列 ,并进行原核表达 ,了解其相关特性。方法 :聚合酶链反应 (PCR)扩增TEM型β内酰胺酶编码基因片段 ,克隆入 pGEM Teasy载体 ,表达于感受态细胞大肠埃希菌DH5α中 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列 ,确定基因型 ;其基因与原核表达载体 (pET 2 8c)连接 ,并在感受态细胞大肠埃希菌DH5α中进行原核表达 ,提取质粒 ,用PCR进行表达鉴定 ,用超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)表型确认试验鉴定表达菌株的表型 ,另外对这些临床菌株进行接合试验。结果 :PCR扩增结果显示这 4株细菌产生的TEM型β内酰胺酶编码基因片段含 981个核苷酸 ,其表达酶的性质均为ESBLs,临床菌株的质粒接合试验均为阳性。这 4株临床菌株所产生的TEM型 β内酰胺酶的编码基因已被GenBank命名为TEM 10 (GenBank注册号 :U95 36 3)。 结论 :安徽地区这 4株细菌所产TEM型 β内酰胺酶均为TEM 10 ,在国内我们首次从临床分离株中发现TEM 10。

1株阴沟肠杆菌临床分离株对亚胺培南耐药机制的研究

目的探讨阴沟肠杆菌临床分离株对亚胺培南的耐药机制。方法采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)值,用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR扩增检测碳青霉烯酶(blaKPC、blaIMP-1、blaIMP-2、blaVIM-1、blaVIM-2)编码基因和广谱及超广谱β-内酰胺酶(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9)编码基因;耐药基因水平传播采用质粒结合试验。结果阴沟肠杆菌临床分离株除对阿米卡星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星敏感及妥布霉素中介外,对所有β-内酰胺类抗菌药物、庆大霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑等抗菌药物均耐药。改良Hodge试验为阳性。PCR扩增5种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β-内酰胺酶基因,显示blaTEM基因扩增阳性,其余基因扩增阴性。质粒接合试验成功传递了对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性,接合子菌株相较于阴沟肠杆菌临床株,呈现出低水平耐药。结论此分离株产碳青霉稀酶,携带TEM基因,并可以经质粒转导播散。

碳青酶烯类抗生素耐药弗劳地枸橼酸杆菌KPC-2基因的检测

目的研究弗劳地枸橼酸杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法采用琼脂对倍稀释法检测弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南以及其他常见药物的最低抑菌浓度(MIC)。等电聚集电泳分析其β-内酰胺酶类型,聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析检测β-内酰胺酶基因型,接合试验分析其耐药质粒传递情况。结果弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均为64 mg·L-1,对青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁、氨曲南和氨基糖苷类均耐药。转移接合结果显示对亚胺培南和美罗培南的耐药性可以通过质粒转移。等电聚焦电泳结果显示转移接合子具有等电点(PI)约为5.0、7.5的2种β-内酰胺酶。PCR检测及序列分析结果显示该菌产生KPC-2基因。结论 KPC-2型碳青酶烯酶的产生是引起弗劳地枸橼酸杆菌对碳青酶烯酶耐药的主要原因,并且该耐药性能通过质粒进行转移。

猪源沙门氏菌携带I类整合子向人源细菌体外转移的研究

为考察猪源沙门氏菌携带的I类整合子向人源细菌在体外接合试验中的转移频率,在体外接合试验中应用PCR方法检测细菌间I类整合子的转移。结果表明：人源沙门氏菌I类整合子转移效率在1.6×10-3~2.5×10-4 cfu·m L-1（供体菌）之间,人源大肠杆菌I类整合子转移效率在1.5×10-5~8.3×10-6 cfu·m L-1（供体菌）之间,猪源沙门氏菌I类整合子未转移给人源金黄色葡萄球菌。因此,猪源沙门氏菌I类整合子携带耐药基因盒在体外可向人源革兰氏阴性菌发生转移,且转移频率较高。

临床分离阴沟肠杆菌耐药性水平传播研究

目的探讨昆明三级甲等综合医院临床分离阴沟肠杆菌的耐药性及其水平传播机制。方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的K-B法药敏试验检测昆明市第一人民医院2002年7月至2004年6月临床分离阴沟肠杆菌对临床常用23种抗生素的耐药性;用接合试验分析多重耐药性的水平传播状况。结果103株临床分离到的阴沟肠杆菌对23种常用抗生素的药物敏感试验显示:广谱青霉素类,第一、第二代头孢菌素的耐药率在80%以上;三代头孢菌素除头孢他啶外,耐药率均大于70%;头孢吡肟的耐药率为31.5%;头酶素类的耐药率65%以上;亚胺培南100%敏感;广谱青霉素与β-内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率为50%～90%;氨基糖甙类中庆大霉素耐药率高达66.7%,而阿米卡星耐药率不高,只有14.1%;喹诺酮类的环丙沙星耐药率为48.4%;磺胺类的复方新诺明耐药率为64.8%。对52株耐第三代头孢菌素菌株的接合试验显示,23.1%菌株的的耐药性可通过接合传递。结论该院临床分离阴沟肠杆菌的多重耐药严重,部分菌株的耐药性可在不同种菌株间水平传递。

CTX—M型和CMY型耐药基因的检测与传播机制的探讨

目的筛查广州医学院第一附属医院临床分离的80株革兰氏阴性杆菌的CTX-M型或CMy型耐药基因，检测含CTX-M型或CMY型菌株的耐药情况以及初步探讨耐药传播机制中质粒介导耐药这一途径。方法对该细菌进行总DNA的提取，PCR扩增该80株细菌的DNA。结合K-B法药物敏感试验，分析菌株的耐药特征，提取基因筛选为阳性的细菌，判定其质粒是否存在耐药基因，质粒接合试验判断是否为可接合质粒。结果检出ESBLS产酶菌CTX—M型4株，占5％，AmpC产酶菌CMY型3株，占3．75％。对耐药基因的筛选为阳性的7株菌株质粒提取，有6株菌为阳性，质粒接合试验结果显示有2株菌的质粒为可接合质粒，野生菌和接合菌的质粒中均存在耐药基因。结论CTX—M和CMY菌株呈现多重性耐药性，CTX-M和CMY菌株的耐药基因大部分位于质粒上，其中2株为可接合质粒，这一初步探讨为耐药传播机制的研究打下基础。

肺炎克雷伯菌产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的基因环境研究

目的为研究肺炎克雷伯菌产CTX-M-14型ESBL基因的基因环境及其传播机制。方法本试验对产CTX-M-14型ESBL基因进行质粒接合传递试验;对阳性接合子进行质粒抽提并酶切,PBR322载体连接并转化,将转化子进行测序,进行Blast比对研究基因环境。结果质粒接合试验表明,产CTX-M-14型ESBL基因的阳性菌株能通过质粒接合试验传递耐药性,CTX-M-14基因可经质粒传递,接合子的耐药表型与供体菌基本一致,具有与供体菌相似的耐药表型,仅个别药物的MIC值较供体菌有所降低。在含头孢噻肟平板上筛选的含CTX-M-14基因的阳性转化子对头孢噻肟耐药,而对其它大多数药物表现敏感。产CTX-M-14型ESBL基因的基因环境表明,阳性转化子含有2 637 bp的目的基因序列,经Blast比对,该转化子序列的基因环境结构元件包括上游插入序列ISEcp1、-35区和-10区、重复序列IRR、876 bp的CTX-M-14基因开放阅读框及下游插入序列IS903和IRL,上传NCBI获基因序列号为HQ650134。结论产CTX-M-14型ESBL菌株的耐药情况较严重,临床菌可通过接合方式编码ESBLs的传播,临床应加强细菌耐药性监测,进行深入研究。

携带mcr-1鸡源大肠杆菌耐药性及传播特性的初步分析

为研究携带mcr-1鸡源大肠杆菌的耐药性、耐药基因的携带情况及mcr-1基因的传播特性,本研究以从河南、湖北、江西等7个省份分离的182株鸡源大肠杆菌作为研究对象,采用PCR方法扩增其mcr-1基因,并对mcr-1阳性菌株携带的其他耐药基因进行检测。结果显示,在182株大肠杆菌中,mcr-1基因阳性率达到18.13%(33/182)。33株mcr-1阳性菌株中,bla TEM、tet A、bla CTX-M-1G基因检出率最高,分别为100%(33/33)、69.7%(23/33)、48.48%(16/33)。tet M及bla OXA-10基因检出率最低,均为3.03%(1/33)。通过接合试验对mcr-1基因的传播进行了研究,并采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对接合子进行验证,结果显示,共获得19株接合子。采用微量肉汤稀释法,测定mcr-1阳性菌株及其接合子的最小抑菌浓度(MIC),结果显示,mcr-1阳性菌株对黏菌素全部耐药。MIC在4μg/m L~64μg/m L;多数mcr-1阳性菌株对阿莫西林、头孢噻呋、庆大霉素、恩诺沙星、多西环素、阿米卡星等6种药物呈多重耐药;与受体菌相比,接合子除对黏菌素耐药值升高外,57.89%(11/19)的接合子对庆大霉素耐药,对其他药物无明显变化。以上结果表明,mcr-1阳性鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药情况严重,且存在多重耐药现象。mcr-1基因可在细菌间水平传播,造成大范围的大肠杆菌对黏菌素耐药,氨基糖类耐药基因可能和mcr-1位于相同的可转移元件上。本研究创新性地利用PFGE对mcr-1菌株的疑似接合子进行确证,对mcr-1接合转移机制进行研究,为减缓黏菌素及多重耐药菌株的传播提供实验依据。

不同感染途径CREC分子分型特点及耐药分析

目的探讨我院不同感染途径耐碳青霉烯大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli,CREC)分子分型特点以及耐药情况,为临床预防和治疗提供依据。方法收集我院2017年9月-2018年12月间不同感染途径获得的CREC共14株;菌株鉴定及药敏采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定/药敏系统,联合纸片扩散法(KB法)、E-Test方法进行药敏试验;用PCR技术分别对碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(blaSHV、blaTEM、blaCTX和blaOXA-1、AmpC酶耐药基因(blaFOX、blaMOX和blaDHA)、膜孔蛋白基因(ompk35和ompk36)进行检测,同时进行质粒接合试验,掌握我院CREC耐药基因分布及流行情况;采用PFGE对14株不同感染途径CREC进行同源性分析,分析我院CREC分子流行特点。结果临床资料:14株CREC主要来自重症医学科,占57.14%(8/14);痰标本检出5株,尿标本检出4株,血液标本检出2株,灌洗液、脑脊液、导管尖端各检出1株。耐药基因检出情况:14株CREC有12株携带blaNDM-5、1株携带blaKPC-2和1株携带blaNDM-1;我院CREC通常携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有ompk36基因的缺失。接合试验结果:仅1株CREC接合试验成功。PFGE分型结果:14株CREC分为4个PFGE分型,其中PT03为优势型别,包含11株菌。菌株耐药情况:CREC耐药情况十分严重,对单环β-内酰胺类、头孢类、左氧氟沙星、碳青霉烯类药物均表现耐药;而对氨基糖苷类以及磺胺类药物也达到92.86%的耐药率;对替加环素和多黏菌素均表现为敏感。结论我院CREC主要来自呼吸道标本,且存在克隆的流行,其优势型别的菌株多携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有Ompk36基因的缺失,且表现对多种抗生素呈高度耐药,提示我们应加大对CREC的管控,需密切监测并采取控制措施,阻断CREC在院内的传播和暴发。

质粒介导的产NDM-1肠杆菌科细菌分子水平研究

目的对分离的29株产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肠杆菌科细菌进行同源性分析,了解浙江省NDM-1的流行情况;通过blaNDM-1基因周围序列分析,阐明该基因所处的周围环境。方法PCR扩增浙江医院分离的29株产NDM-1肠杆菌科细菌耐药基因;接合试验分析质粒传播转移能力;以PCR为基础的质粒复制子分型方法(PBRT)分析质粒型别;PCR扩增blaNDM-1基因周围序列,分析其周围序列异同点。结果29株携带blaNDM-1基因菌株中,86.9%(26/29)合并超广谱β-内酰胺酶或其他碳青霉烯酶耐药基因。PFGE结果显示6株产气肠杆菌,5株阴沟肠杆菌,2株大肠埃希菌以及2株产酸克雷伯菌分别具有同源性。多位点序列分型发现3株大肠埃希菌为ST167,5株阴沟肠杆菌为ST114。接合实验发现,27株菌株接合成功。PBRT质粒分型发现16株为IncX3型质粒;对菌株进行blaNDM-1周围环境分析发现,16株存在blaNDM-1-bleMBL-trpF序列。结论NDM-1已成为浙江省碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因。不同菌种细菌间存在IncX3型质粒广泛传播,blaNDM-1-bleMBL-trpF基因片段广泛存在于产NDM-1菌株中。

浙东沿海地区伤寒、副伤寒沙门氏菌耐药性监测及噬菌体分型

近年来,各地相继发生了耐药性伤寒沙门氏菌引起的伤寒流行。本市从1989年以来,伤寒发病率突然上升,局部地区造成流行。为了解宁波市伤寒菌株的药敏状况和噬菌体型别分布,我们收集了1989、1990年分离的伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌275株,开展了耐药性监测、噬菌体分型、质粒检测等工作,现将结果报告如下。

质粒介导喹诺酮类qnr基因在肠杆菌科细菌中的流行及耐药特性研究

目的 了解质粒介导喹诺酮耐药qnr基因在临床分离的三种常见肠杆菌科细菌中的分布,研究qnr阳性株的质粒特性和流行播散情况.方法 VITEK-60全自动微生物分析仪检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性,琼脂稀释法检测环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度（MIC）;PCR扩增质粒介导的喹诺酮类耐药基因 （qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS）,阳性产物进行DNA测序比对以确定基因型;.对qnr基因阳性菌株进行接合转移试验,探讨qnr基因的可转移性;脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）分析同源性及流行播散情况.结果 301株大肠埃希菌中共检出qnr阳性菌株14株,其中2株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出5、2、9株;145株肺炎克雷伯菌中共检出qnr阳性菌株17株,其中1株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出1、11、6株;173株阴沟肠杆菌中共检出qnr阳性菌株57株,其中3株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出14、36、10株;所有菌株中均未检出qnrC和qnrD基因;接合转移试验结果显示,14株qnr基因阳性的大肠埃希菌、17株qnr阳性肺炎克雷伯菌和57株qnr阳性阴沟肠杆菌中分别有4、3和26株体外接合成功,qnrB阳性阴沟肠杆菌中少数菌株存在同源性,大多呈散发流行趋势.结论 临床肠杆科细菌中存在qnr阳性菌株的流行,总体以qnrB为主;qnr基因在喹诺酮类耐药和敏感菌株中均存在,喹诺酮类药物敏感菌株中qnr基因的检出值得关注;qnr基因可通过其所在质粒进行水平转移;携带qnrB基因的阴沟肠杆菌大多无同源性,呈散发流行趋势.

犬源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及对头孢菌素类药物的耐药性分析

为了探究犬源肺炎克雷伯菌对头孢菌素类药物的耐药情况,试验对从海南省12个市县公园中采集的357份新鲜犬粪便拭子,采用分离培养初筛、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、耐药基因检测及接合转移试验等方法对细菌特性进行研究。结果表明:共鉴定得到9株耐药性肺炎克雷伯菌,其中8株呈现多重耐药性,对氨苄西林、复方新诺明和头孢曲松的耐药率为88.9%,对庆大霉素、环丙沙星、头孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星也呈不同程度的耐药(22.2%~55.6%);耐药基因blaCTX-M、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-14、blaCTX-M-15的检出率分别为100%、66.7%、55.6%、33.3%、44.4%,未检出blaCTX-M-2、blaCTX-M-64和blaCTX-M-123基因;分离菌株能通过接合途径发生耐药基因的水平传递。说明排泄于公园环境的犬粪便含有耐头孢菌素类药物的肺炎克雷伯菌,绝大多数菌株为多重耐药菌株,且其耐药基因可能会在动物、环境和人之间相互传播,存在潜在的公共健康风险。