纯蜂蜜与掺假蜂蜜的红外光谱鉴别研究

[目的]寻找快速鉴别高质量蜂蜜的方法.[方法]对不同品种的纯蜂蜜及常见掺假蜂蜜进行红外光谱分析。[结果]结果表明，纯蜂蜜的红外光谱基本相同；掺有葡萄糖、黄糖、蔗糖等的假劣蜂蜜红外光谱在波数1200～900cm^-1和600～400cm^-1与纯蜂蜜有突出的区别特征.[结论]该方法可用于鉴定纯蜂蜜与掺假蜂蜜.

UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用鉴别掺假蜂蜜

为对掺假蜂蜜识别提供新思路和新方法,本研究应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用的方法鉴定4种未掺假蜂蜜及2种掺假蜂蜜中肽类物质的组成和结构,并探讨未掺假蜂蜜和掺假蜂蜜多肽的差异。以20%的三氯乙酸溶液沉淀蜂蜜蛋白,所得蜂蜜蛋白以胰蛋白酶酶解,然后通过C18固相萃取柱净化酶解肽段。采用0.1%甲酸和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,以高分辨质谱(Q-Exactive)的Full MS/ddMS2模式对胰蛋白酶酶解后的蜂蜜多肽进行鉴定,MaxQuant软件分析质谱结果,分析所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比。结果显示,4种未掺假蜂蜜中均存在来自蜂王浆主要蛋白(MRJPs)的多肽,2种掺假蜂蜜中未检测出MRJPs,且4种未掺假蜂蜜中所鉴定出的多肽80%以上来自于蜜蜂(Apis cerana cerana、Apis cerana、Apis mellifera)。通过比对6种蜂蜜酶解肽段序列发现,肽段EYILVLSNK在4种未掺假蜂蜜中均有检测到,在2种掺假蜂蜜中未检出。因此,来自于Apis mellifera的MRJP1酶解产生的肽段EYILVLSNK或可作为辨别真伪蜂蜜的潜在肽段。

柱前衍生-高效液相色谱-质谱联用法鉴定糖浆掺假蜂蜜

目的建立蜂蜜中掺假的快速鉴定方法。方法将蜂蜜样品溶解后进行真空干燥,然后对样品中的低聚糖进行荧光标记,以氨基柱为分析柱,采用乙腈和甲酸铵为流动相,对标记低聚糖进行高效液相色谱分离,采用ESI-MS的SIR模式对标记低聚糖进行定性测定。结果基于荧光标记试剂2-氨基苯甲酰胺(2-AB)和毒性较低的还原剂2-甲基吡啶-N-甲硼烷(2-PB)的还原氨化反应能有效地对蜂蜜中的带还原端的低聚糖进行荧光标记。天然蜂蜜含有单糖(DP1)、双糖(DP2)和少量三糖(DP3),掺假蜂蜜除此以外还含有少量四糖(DP4)、五糖(DP5)和六糖(DP6)。结论采用此法对蜂蜜样品进行蜂蜜掺假判定与国标方法测试结果基本吻合,而且不需对样品进行净化处理即可上机分析,为建立蜂蜜掺假的快速筛查方法提供参考。

基于二维红外相关谱判别掺假蜂蜜

将二维中红外相关谱与多维偏最小二乘判别法相结合,建立了掺假蜂蜜与纯蜂蜜的判别模型。分别配置纯蜂蜜和掺蔗糖蜂蜜样品各30个,室温下,在650~4 000 cm^(-1)范围内采集了所有样品的衰减全反射光谱。在研究纯蜂蜜和掺假蜂蜜光谱特征的基础上,基于二维中红外相关谱矩阵建立了掺假蜂蜜的多维偏最小二乘判别模型,并与常规一维中红外谱的偏最小二乘判别模型的预测结果进行了比较。两个模型对未知样品的判别正确率分别为95%和90%。研究结果表明:基于二维中红外相关谱的多维偏最小二判别模型能更有效地提取掺假蜂蜜的特征信息,能提供高的判别正确率。

基于电子鼻无损鉴别掺假蜂蜜

对不同采样时间、传感器清洗时间和样品温度等电子鼻测定条件进行优化,确定电子鼻检测掺假蜂蜜的最佳参数。利用电子鼻检测分别掺入10%、20%、30%、40%、50%果葡糖浆的掺假蜂蜜样品,通过进行主成分分析(PCA)和线性判别分析(LDA)研究不同数据处理方法的电子鼻对掺假蜂蜜的定性鉴别能力。结果表明:电子鼻结合PCA和LDA均能区分掺假蜂蜜; LDA具有实现对蜂蜜掺假浓度半定量鉴别的潜力。得出结论,基于电子鼻对掺假蜂蜜的无损鉴别是可行且具有实际意义的。

如何鉴别掺假蜂蜜

随着人们对健康和美容的逐渐重视，蜂蜜作为天然健康食品从而被不少人重视，因此不少掺假蜂蜜开始充斥市场。那么，怎样才能够准确、简便地鉴别蜂蜜真假呢?对此，笔者根据目前现有的实际条件作了一些摸索。

蜂蜜淀粉酶在鉴别蜂蜜掺假中的应用研究

针对蜂蜜掺假和造假的问题,本文通过测定蜂蜜粗蛋白、蛋白质含量和淀粉酶值,研究储存温度和时间对蜂蜜淀粉酶值和蛋白质含量的影响,寻找一种简单有效、客观公正的鉴别真假蜂蜜的方法。比较研究结果表明在高温(37℃、45℃)下贮存,天然蜂蜜的淀粉酶值和蛋白质的含量逐渐下降,而假蜂蜜中的淀粉酶值和蛋白质的含量基本不变。通过跟踪测定蜂蜜淀粉酶值和蛋白质含量的变化可以检测蜂蜜产品的质量,也可以鉴别真假蜂蜜。

核磁共振技术结合化学计量学方法用于蜂蜜的掺假鉴别

采用核磁共振技术(NMR)结合化学计量学分析手段研究了真蜂蜜和掺假蜂蜜的指纹图谱变化情况。采用无监督的主成分分析(PCA)和有监督的偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法从核磁信号中提取各组的分类信息。结果表明:建立的OPLS-DA模型能够区分真假蜂蜜,所建模型对蜂蜜真假判别的解释能力为90.5%,对未知样本的预测能力为75.5%、识别率为89.7%。置换测试验证表明,化学计量学模型具有很好的稳定性和预测性,可信赖性强,且模型稳健。通过OPLS-DA模型的载荷图和相关系数分析找到了对区分掺假蜂蜜有显著作用的标志物。结合相关系数分析,建立了辨别真假蜂蜜的多元线性回归方程。该方法可简单、快速地用于未知蜂蜜的掺假鉴别,为规范蜂蜜市场提供有利的依据。

蜂蜜用葡萄糖溶液掺假的近红外光谱检测

为实现蜂蜜用葡萄糖溶液掺假的快速检测,利用近红外光谱技术(NIRS)对真假蜂蜜样本进行了研究。121个真蜂蜜样本中取8个分别按5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、45%、55%和65%的质量比掺假,共得80个掺假样本。不同光谱预处理方法的模型结果表明最佳预处理方法为自归一化加一阶微分(真假判别)和中心化加一阶微分(掺假量分析)。利用CARS(Competitive adaptive reweighted sampling)法筛选变量,PLS-LDA模型对真假蜂蜜的判别准确率为100%,PLS模型对掺假量定量分析的交互验证均方差为3.137 7,预测均方差为2.980 0。结果表明NIRS能实现蜂蜜用葡萄糖掺假的检测。

现行国家标准在鉴别蜂蜜掺假方面存在的缺陷

就蜂蜜掺假的特点、新蜂蜜国家标准在鉴别蜂蜜产品掺假方面的缺陷、今后蜂蜜产品掺假鉴别技术的发展方向进行了讨论。

基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱的寡糖轮廓分析用于蜂蜜中淀粉糖浆的掺假鉴别研究

采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱（HPLC-Q/Orbitrap MS）建立了寡糖轮廓分析的方法。通过对纯天然蜂蜜和淀粉类糖浆中的麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖进行定性定量分析,发现淀粉类糖浆中含有未被酶解完全的微量麦芽类寡糖,且麦芽七糖在所有检测样本中干扰小,对结果的定量无影响,而其他寡糖类物质的定性和定量结果会存在干扰。最终选择麦芽七糖作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的典型标志物。在实际样品分析中,根据麦芽七糖的保留时间和离子对的相对丰度比可以定性判断蜂蜜中是否掺有淀粉糖浆;通过标准曲线法可以定量测定样液中麦芽七糖的含量。在20,50,100 mg/kg 3个加标水平下,麦芽七糖的平均回收率为75%-82%,相对标准偏差（RSD,n=5）为3.1%-6.7%,方法检出限为0.1μg/m L。应用该方法可在10 min内完成整个分析过程,且样品前处理简单,结果可靠,灵敏度高,可用于纯天然蜂蜜中掺入淀粉糖浆的快速确证和检测。

柱前衍生化-HPLC-MS/MS法测定启脾丸中掺假蜂蜜

建立了启脾丸中掺假蜂蜜的测定方法。供试品经活性炭固相萃取柱处理,采用1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮衍生化试剂对其衍生化,以麦芽六糖和麦芽七糖的衍生产物为特征标志物,采用Waters CORTECS色谱柱和乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,应用高效液相色谱-质谱进行分析。结果表明,天然蜂蜜不含麦芽六糖和麦芽七糖,麦芽糖浆、果葡糖浆、大米糖浆、木薯糖浆、甜菜糖浆以及掺假炼蜜含有大量麦芽六糖和麦芽七糖,结果发现5批启脾丸发现糖浆掺假蜂蜜投料。该试验所建方法结果可靠,灵敏度高,可为蜂蜜及含蜂蜜中药制剂的专项治理提供有力的技术支持。

液相色谱/元素分析仪-同位素质谱法鉴定蜂蜜掺假的方法改进

目的改进液相色谱/元素分析仪-同位素质谱法鉴别蜂蜜掺假的方法。方法对现有欧盟标准方法优化液相色谱条件,结合元素分析仪-同位素质谱法,将二糖分离为麦芽糖、蔗糖,提出一个新的参数—麦芽糖、蔗糖δ^(13)C值之差δ^(13)C_(M-S)。结果根据本研究检测113个国内外不同来源纯正蜂蜜样本的数据,提出纯正蜂蜜δ^(13)C值新要求:蜂蜜蛋白质与蜂蜜同位素差值δ^(13)C_(P-H)大于-0.97‰;果糖、葡萄糖δ^(13)C值之差δ^(13)C_(F-G)在-0.60‰至0.56‰范围内;麦芽糖、蔗糖δ^(13)C值之差δ^(13)C_(M-S)在-0.73‰至0.98‰范围内;各个组分δ^(13)C最大差值δ^(13)C_(max)小于2.05‰;根据上述4个参数来确认蜂蜜是否掺假。在日常检测和市场销售的160个样品中,原方法阳性检出率为16.2%,而新方法阳性检出率达21.9%。结论本研究提升了蜂蜜掺假检测能力,此方法的建立更好、更精确打击掺假的同时,也维护消费者权益。

碳同位素比率法检测分析市售蜂蜜碳-4糖浆的掺假情况

目的优化稳定碳同位素比率法,分析蜂蜜市场质量状况。方法蜂蜜用水混匀后,利用钨酸钠溶液和硫酸溶液沉淀蛋白,多次洗涤后冷冻干燥获得蜜蛋白,利用同位素质谱仪同时检测蜜蛋白和蜂蜜δ13C值,用两点标准漂移校准进行数据处理分析,测得碳-4植物糖浆含量。结果对来自19个省的137批样品进行检测,有15批蜂蜜不符合我国蜂蜜产品行业标准的真实性要求,检出碳-4植物糖浆掺假情况,不合格率10.95%。结论检测方法优化后,检测时间缩短,蛋白提取成功率提高。通过对实际样品的分析,发现目前市售蜂蜜质量不容乐观。

探讨蜂蜜掺假现状及有效识别方法

本文针对目前蜂蜜营养价值高、市场缺口较大带来的蜂蜜掺假现象进行论述。包括常见的蜂蜜掺假手段,蜂蜜掺假鉴别的传统方法和现行方法。指出运用化学计量学联合仪器分析方法进行多仪器联合测定、多方法辅助的研究思路的优势,提出完善蜂蜜数据库、建立蜂蜜鉴别标志物数据库辅助蜂蜜掺假鉴别的方法。

高效液相色谱法检测蜂蜜中大米糖浆掺假

建立了反相色谱快速测定蜂蜜中大米糖浆含量的分析方法。蜂蜜样品用水溶解后,直接上样至C18固相萃取柱净化,甲醇洗脱。洗脱液经浓缩、溶解、过滤后进行HPLC分析。采用Sinochrom ODS-BP柱,以水+乙腈=93+7为流动相,紫外检测波长300nm,外标法定量。结果表明,蜂蜜中大米糖浆掺假检出限(LO D)为20mg/ml,在50~200mg/g范围内线性关系良好,r≥0.9986;在线性范围内的添加水平平均回收率为82.7~96.3%,相对标准偏差(RSD)≤5.5%。该方法具有良好的精密度和重现性,适用于蜂蜜中大米糖浆掺假的检测。

高分辨质谱及核磁共振技术在蜂蜜掺假鉴别中的应用

高分辨质谱可以同时测定分子及其质谱碎片的精确质量数,减少了样品基质的干扰,提高了对化合物的结构鉴定能力。针对蜂蜜中C3植物糖浆掺假的问题,本文建立了一种结合高分辨质谱与核磁共振技术的新方法,发现了3种大米糖浆与甜菜糖浆的特征物质,并鉴定了它们的结构,证明了该方法的有效性。该方法准确、快速、灵敏度高,适用于蜂蜜中大米糖浆和甜菜糖浆的掺假鉴别。

用近红外光谱法检测洋槐蜂蜜中掺假麦芽糖浆

用近红外光谱法结合化学计量学的方法对洋槐蜂蜜中掺假麦芽糖浆进行检测。以5%为增量,共配制了21个样品。使用漫透射法采集光谱数据。用Unscrambler和Matlab软件做数据处理。使用多元散射校正和自标度化的方法预处理光谱数据,用协同间隔偏最小二乘法筛选波长,用偏最小二乘法建模并验证。校正相关系数达到0.995,校正标准偏差达到3.083,预测相关系数达到0.980,预测标准偏差达到5.639。

基于近红外光谱对蜂蜜掺假的检测

通过运用近红外光谱技术对蜂蜜中掺入糖浆进行快速检测,建立偏最小二乘回归模型。实验一共分成21组,掺假比例0%~100%,间隔5%。对于21组实验结果选取14组作为校正集,7组作为验证集。在MATLAB软件上用IPLS与SIPLS方法筛选波长,之后使用The Unscrambler软件进行主成分分析以及模型建立,并完成验证。研究结果表明:使用IPLS分析得出在8000~8196 cm^(-1)区间建模效果最好,校正集Correlation为0.999655,验证集Correlation为0.996520。使用SIPLS分析得出在9244~9544 cm^(-1)区间建模效果最好,校正集Correlation为0.998131,验证集Correlation为0.983960。