微波加热法用于竹叶水提取总黄酮的应用研究

为了筛选出竹叶中总黄酮提取的最佳、最快、最经济工艺,在不同的提取方法(微波、超声、回流)和不同的溶剂(乙醇、甲醇、去离子水)下对总黄酮的提取量进行比较研究,并对最优、最经济环保的提取方法进行了单因素实验对比。用微波提取法分析了料液比、提取时间、提取功率等3个因素对竹叶中总黄酮提取工艺的影响。结果显示,最佳工艺为以水作溶剂的微波提取法(固液比1∶30,微波功率400 w,时间3 min)。

黄桷树叶总黄酮提取物对脓毒症小鼠肝、肺的保护作用研究

目的:了解不同浓度黄桷树叶总黄酮提取物(FLA)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肝、肺损伤的保护作用。方法:将SPF级C57/6J雄性小鼠随机分成对照组(CON组)、LPS模型组(LPS组)、LPS + 40 mg/kg FLA组(LPS + FLA-L组)和LPS + 80 mg/kg FLA组(LPS + FLA-H组),每组6只。适应性喂养一周,再分别灌胃生理盐水和不同浓度FLA一周后,CON组腹腔注射PBS缓冲液,其余组均腹腔注射10 mg/kg LPS诱导建立脓毒症小鼠模型,腹腔注射12小时后进行血清和肝、肺组织的收集。ELISA检测血清中炎症因子IL-6和TNF-α的含量;HE染色观察肝、肺组织的病理情况;试剂盒检测血清ALT和AST水平;RT-qPCR检测肝、肺组织中炎症因子水平。结果:LPS + FLA-L组和LPS + FLA-H组均能逆转LPS导致的血清促炎因子IL-6 (从507.00 ± 121.43降至348.46 ± 87.65和310.13 ± 68.62 pg/ml)和TNF-α (从364.60 ± 68.60降至245.22 ± 58.94和192.14 ± 35.85 pg/ml)的升高(n = 4, P 0.05)。结论:黄桷树叶总黄酮提取物能有效改善LPS诱导的脓毒症小鼠炎症失衡和肝、肺损伤。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P<0.01),细胞数量减少、间隙增大,凋亡小体增多,凋亡率升高(P<0.01),Bax/Bcl-2(P<0.01)、cleaved caspase-3(P<0.01)、Cyt-c(P<0.05)、FADD、cleaved caspase-12的表达量均升高,核内凋亡蛋白Cyt-c表达增加;TFE+RA组荧光减弱,逆转了TFE诱导的线粒体途径凋亡。结论TFE能明显抑制人乳腺癌细胞的增殖,抑制自噬时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

气相色谱法测定葛根和淫羊藿总黄酮提取物中大孔树脂有机残留物

目的:建立葛根和淫羊藿总黄酮提取物中大孔吸附树脂7种有机残留物的含量测定方法。方法:采用气相色谱法,DB-1毛细管柱(柱长为60 m,内径为0.25 mm,膜厚度为1.0μm),柱温为程序升温,起始温度为40℃,再以4℃/min升温至175℃,保持12 min,用氢火焰离子化检测器检测,检测器温度250℃,进样口温度200℃;载气为氮气,流速为0.8 mL/min,分流比为20∶1,顶空进样,顶空瓶平衡温度为90℃,平衡时间为50 min。结果:7种有机溶剂残留物的峰面积与浓度呈良好线性关系,正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、1,2-二乙基苯的平均回收率分别为101%、90%、87%、85%、84%、76%、79%。结论:该方法测定准确度高、精密度重复性好。

顶空-气相色谱法测定枳实总黄酮提取物中的树脂残留和溶剂残留

枳实总黄酮提取物是临床上用于治疗功能性消化不良的中药在研1类新药奥兰替胃康片的原料[1-4],其制备过程中用乙醇提取,并使用了D101大孔吸附树脂纯化黄酮提取物。提取物及相关制剂的质量标准研究主要包括含量测定、特征图谱、溶出度等[5-8],尚无残留溶剂研究的相关报道。

狗肝菜总黄酮微波辐射预处理提取工艺及其生物活性研究

为了更深入研究狗肝菜总黄酮的提取工艺,为后续的研究奠定基础,本文采用微波辐射预处理结合传统水浴法对狗肝菜总黄酮进行提取,并以芦丁标准品作为对照品,采用紫外可见分光光度计测定吸光度并分析狗肝菜中总黄酮的含量。以单因素试验为基础,采用响应面优化工艺参数得到狗肝菜总黄酮的最佳提取率。结果显示:微波辐射预处理提取狗肝菜总黄酮的最佳工艺条件为微波功率350 W、微波时间77 s、汽化剂用量4.3 mL,在此条件下狗肝菜总黄酮提取率为8.382‰。在抗肺癌活性细胞试验中,狗肝菜总黄酮提取物的半抑制浓度为9.516 mg/mL,在药物浓度27 mg/mL时,抑制率达到了88.419%。研究结果表明:微波辐射预处理提取狗肝菜总黄酮是可行的,其总黄酮提取物(乙醇提取物)具有一定的抗肿瘤细胞活性,可以为今后的研究提供参考。

响应面法优化紫苏叶总黄酮提取工艺

文章以紫苏叶为研究对象,采用响应面分析法优化紫苏叶总黄酮的提取工艺。通过醇提法对紫苏叶总黄酮进行提取,首先对提取时间、提取温度、乙醇浓度和料液比4个单因素条件进行研究,然后进行响应面试验设计,优化分析紫苏叶总黄酮的提取工艺。结果表明,此方法提取紫苏叶中总黄酮的最佳工艺为:提取时间4.5 h,乙醇浓度68%,提取温度65℃,料液比1:55(g/mL),其理论提取率为7.48%,实际提取率为7.43%,提取温度、乙醇浓度、料液比、提取时间4个单因素对提取率的影响程度由大到小。验证试验结果表明,其结果与响应面分析预测的结果一致,该模型可靠,该研究为提高紫苏叶总黄酮提取率提供了参考。

黄芪总黄酮提取物对维甲酸所致大鼠骨质疏松的影响

目的:研究黄芪总黄酮提取物对维甲酸造成的大鼠骨质疏松状态的改善作用。方法:大鼠口服维甲酸80 mg·kg-1· d-1,连续2周后造成骨质疏松模型,观察黄芪总黄酮提取物的药理作用。结果:与维甲酸模型组比较,黄芪总黄酮提取物的中、高剂量组能显著提高骨质疏松模型大鼠的骨密度,并且对大鼠的骨长度指数、体重及生殖器官脏器指数也有一定的影响。结论:一定剂量的黄芪总黄酮提取物有明显的改善骨质,增加骨密度、防治生殖器官损伤的作用。

金银花水提取总黄酮对高血脂小鼠的降血脂机制研究

目的探讨金银花水提取总黄酮(water extraction from honeysuckle total flavonoids,WEHF)对高血脂模型小鼠的降血脂作用及机制。方法应用高脂饲料建立高血脂模型小鼠的基础上,将50只小鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(40只)。造模组每天饲喂高脂饲料,正常组每天饲喂正常饲料,连续灌喂WEHF 28d。检测各组小鼠的体质量、饮食量、饮水量、血脂常数、肝脏指数、肾脏指数;检测肝脏内过氧化氢酶(catalase,CAT)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;检测胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate,IRS1)、低密度脂蛋白受体(low density lipid receptor,LDLR)、载脂蛋白1(apolipoprotein 1,Apo-1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-2)和6-磷酸果糖激酶-2(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 2,PFK-2)等mRNA表达;检测LDLR和SREBP-2的蛋白表达。结果模型组小鼠的体质量显著低于正常组(P<0.05);饮食量和饮水量显著高于正常组(P<0.05),且总胆固醇(Total cholesterol,TC)值为4.09mmoL/L,模型组与正常组小鼠的TC值有显著差异(P<0.05),说明造模成功。与正常组比较,模型组肝脏指数显著上升而肾脏指数显著下降(P<0.05)。与模型组相比,中、高剂量WEHF能显著降低高血糖小鼠血浆甘油三酯(Trilaurin,TG)水平(P<0.05);高剂量WEHF的能显著降低高血脂小鼠血浆TC水平(P<0.05);各WEHF组均能显著降低MDA含量(P<0.05)和显著提高SOD活性(P<0.05);WEHF中剂量、高剂量组能显著升高CAT水平(P<0.05);高剂量的WEHF能显著上调IRS1、LDLR、Apo-1、FAS、SREBP-2和PFK-2等mRNA表达水平(P<0.05);中、高剂量的WEHF能显著上调LDLR和SREBP-2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论WEHF能改善高脂诱导小鼠肝脏的氧化应激水平,从而维持血液中正常脂质水平。其机制可能与WEHF上调模型小鼠肝脏IRS1、LDLR、Apo-1、FAS和SREBP-2等mRNA表达水平,上调LDLR以及SREBP-2转录因子的蛋白表达水平有关。

罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠的抗抑郁作用的研究

目的对传统中药罗布麻进行抗抑郁活性评价,并对其作用机制进行研究。方法采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价,在此基础上,应用皮质酮损伤PC12细胞模型,采用MTT法、LDH检测法观察罗布麻提取物对皮质酮损伤的PC12细胞是否具有神经保护作用。结果在小鼠强迫游泳实验中,罗布麻提取物100,50,26 mg/kg(i.g.)连续给药10 d后,能显著缩短小鼠的强迫游泳不动时间(分别为P<0.001,P<0.05,P<0.01);同时罗布麻叶总黄酮提取物对皮质酮损伤的PC12细胞具有神经保护作用。结论罗布麻叶总黄酮具有抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。

瑞香狼毒总黄酮3种提取方法的比较

通过对不同提取法中瑞香狼毒总黄酮含量的比较,确定瑞香狼毒总黄酮的最佳提取方法。试验采用索氏提取法、超声提取法、聚酰胺树脂柱层析法来提取瑞香狼毒总黄酮,并用分光光度计测定各总黄酮提取物中黄酮含量。结果表明,索氏提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为19.20%;超声提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为23.39%;聚酰胺树脂柱层析法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为24.18%。超声波提取法为瑞香狼毒总黄酮最佳提取法,聚酰胺树脂柱层析法中瑞香狼毒总黄酮含量最高。

蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的HPLC测定

建立了HPLC法测定蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷(1)及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷(2)的含量。采用Eclipse XDBC18柱,乙腈-0.5%乙酸-甲醇梯度洗脱,检测波长248nm。1和2分别在10～400mg/ml和12.6～504mg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率分别为98.9%和102.3%,RSD分别为1.66%和2.05%。

罗布麻叶总黄酮提取物促进小鼠抗抑郁基因CREB、BDNF的表达

罗布麻是中国药典收录的传统中药,本研究提取它的主要有效成分罗布麻总黄酮,采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价。试验中给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg后,观察罗布麻叶总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响,结果显示罗布麻总黄酮提取物能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(P<0.05),药效与氟西汀相似,表明罗布麻具有明显的抗抑郁活性。在此基础上,应用皮质酮损伤的PC12细胞模型,采用荧光相对定量RT-PCR法检测罗布麻对皮质酮损伤的PC12细胞中脑内脑源性神经营养因子(BDNF)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达水平的影响。结果表明,皮质酮处理后PC12细胞中BDNF、CREB基因的表达量最低,罗布麻处理后,表达量显著增加,较处理前增加了近十倍,且呈剂量依赖性。本研究结果提示罗布麻抗抑郁机制可能是通过(AC-cAMP-CREB)信号通路促进BDNF、CREB的基因表达而发挥的。

优化提取裸花紫珠总黄酮含量及对表皮伤口易感染菌抑菌性的研究

为了选出裸花紫珠总黄酮提取的最优方法,比较了ASE、超声、微波萃取和多功能浓缩4种提取方法在裸花紫珠总黄酮提取率上的差异,并利用微孔刃天青法测定总黄酮对表皮易感染菌的MIC值。结果发现ASE法总黄酮提取率最高,约为1.26%,其次为超声和微波萃取法,总黄酮提取率分别约为1.03%和0.98%,多功能浓缩法提取率最低,约为0.36%,且耗时最长。而且研究发现,ASE的MIC值最低。最终得出ASE提取效率最高,且提取物有较好的抑菌性,是裸花紫珠总黄酮提取的最优方法。

离子液体/微波辅助提取海红果渣中总黄酮的响应曲面法研究

以离子液体溴化-1-丁基-3-甲基咪唑([bmim]Br)水溶液为萃取剂,采用微波辅助萃取技术萃取海红果渣中的总黄酮,系统考察了[bmim]Br浓度、萃取温度、料液比等因素的影响,并通过响应面法对萃取工艺进行了优化,得出最佳工艺条件为离子液体浓度0.6mol·L-1,萃取温度73℃,液料比36(mL/g),萃取时间15min,重复萃取两次,在该条件下,海红果渣中总黄酮得率为0.2621%。与拟合的二次回归模型预测值基本相符。

壮药战骨总黄酮提取物经皮给药对大鼠/小鼠的抗炎、镇痛作用研究

目的:研究壮药战骨总黄酮提取物经皮给药的抗炎、镇痛作用,为战骨经皮给药新制剂的研发提供参考。方法:分别将小鼠和大鼠分为空白组(40%乙醇溶液)、阳性对照组(双氯酚酸二乙胺,小鼠的给药剂量为0.390 g/kg、大鼠为0.280 g/kg)和战骨总黄酮提取物低、中、高剂量组(以生药计小鼠的给药剂量为0.400、0.791、6.330 g/kg,大鼠为0.136、0.275、2.200 g/kg)。腹部经皮给药,每天给药1次。分别采用二甲苯致炎法测定小鼠耳肿胀率(给药5 d)和弗氏完全佐剂致炎法测定致炎2、4、9、15 d后大鼠的足趾肿胀度(给药18 d),以考察战骨总黄酮提取物的抗炎作用。采用乙酸扭体法测定小鼠注射1%乙酸后20 min内的扭体次数(给药5 d),末次给药后30、60、90 min采用热板致痛法测定小鼠的疼痛抑制率(给药5 d),光热甩尾法测定大鼠的可能最大镇痛百分率(给药18 d)以及鼠尾压痛法测定小鼠的痛阈提高值(给药5 d),以综合评价战骨总黄酮提取物的镇痛作用。结果:与空白组比较,战骨总黄酮提取物高剂量组小鼠耳肿胀率和致炎不同时间后大鼠的足趾肿胀度显著降低(P<0.05或P<0.01),小鼠扭体次数显著减少(P<0.01),给药不同时间后小鼠的疼痛抑制率以及可能最大镇痛百分率和痛阈提高值均显著升高(P<0.05或P<0.01);战骨总黄酮提取物中剂量组大鼠在致炎2、4、9 d的足趾肿胀度显著降低(P<0.05或P<0.01),小鼠扭体次数显著减少(P<0.01),末次给药后60、90 min的小鼠疼痛抑制率和痛阈提高值显著升高(P<0.05或P<0.01);战骨总黄酮提取物低剂量组大鼠在致炎2、4、9 d的足趾肿胀度显著降低(P<0.05或P<0.01),给药后90 min的疼痛抑制率显著升高(P<0.01)。结论:战骨总黄酮提取物经皮给药具有明显的抗炎、镇痛作用,且呈现一定的量效关系。

罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠的抗抑郁作用及机制的研究

目的探讨罗布麻叶总黄酮提取物的抗抑郁活性及其作用机制。方法采用小鼠悬尾实验及皮质酮损伤的PC细胞实验考察罗布麻叶总黄酮的抗抑郁活性及作用机制。结果给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25,50,100mg/kg后,小鼠悬尾累计不动时间显著缩短。罗布麻叶总黄酮提取物25,50,100μg/ml与皮质酮0.01mmol·L-1共孵PC12细胞48 h,可防止皮质酮所致的PC12神经细胞损伤,降低胞内Ca2+超载。结论罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠悬尾模型有抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用及降低胞内Ca2+超载有关。

响应面法优化红景天总黄酮提取工艺的研究

研究了红景天中总黄酮提取率的影响因素,先经单因素实验初步确定影响因素,再用Box-Behnken响应面法建立影响因素的二次回归模型,通过对二次回归模型求解编码转换得知,液料比40:1(ml/g),酶添加量1.2%,酶解时间4.5 h,酶解温度45℃,pH5,超声时间为12 min,超声功率为250w中的高档,超声次数为3次,在这最优条件下总黄酮提取率为3.99%。

石仙桃总黄酮提取物对小鼠抗缺氧作用的研究

将小鼠分成试验组和对照组,试验组小鼠通过腹腔注射分别给予不同剂量(20、40 mg/kg)的石仙桃总黄酮提取物,对照组腹腔注射生理盐水(0.1 m L/10g),各组小鼠分别进行常压密闭缺氧试验、亚硝酸钠引起的缺氧试验和负重游泳试验。结果表明,与对照组相比,不同剂量的石仙桃总黄酮提取物均显著延长了试验小鼠的常压密闭缺氧存活时间、亚硝酸钠引起的缺氧存活时间和负重游泳存活时间(P<0.05)。说明石仙桃总黄酮提取物对小鼠有明显的抗疲劳、抗缺氧作用。