丹参饮提取物A通过PI3K-Akt信号通路抗细胞凋亡机制的研究

目的探讨丹参饮提取物A(Danshen Yin's extracts A,DSYEA)抗心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型。取70只大鼠随机分为正常组、模型组、复方丹参滴丸组(含生药量78.7 g·kg^(-1))、尼可地尔组(含生药量2.91 g·kg^(-1))及丹参饮提取物A(DSYEA)低、中、高剂量组(含生药量3.88,7.76,15.52 g·kg^(-1)),正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。给药30 d后,TUNEL法测定细胞凋亡指数;免疫组化法检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;Westen Blot法检测Caspase-3、P-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组比较,DSYEA中、高剂量组可下调心肌细胞凋亡指数及Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),促进Bcl-2蛋白、P-GSK-3β、P-Akt蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论DSYEA可降低心肌缺血大鼠心肌细胞的凋亡,其机制可能与通过PI3K-AKt信号通路调控凋亡蛋白有关。

玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤治疗作用的研究

本试验旨在研究玉竹提取物A(extraction A of polygonatum odoratum,EA-PAOA)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的治疗作用,探讨其发挥此作用的可能机制。将昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、试验1组(EA-PAOA 0.5 g/kg)、试验2组(EA-PAOA 1 g/kg)、试验3组(EA-PAOA 2 g/kg)。除正常对照组外,其余各组均尾静脉注射20mg/kg的ConA 0.5 mL,每天06∶00注射1次,连续5 d。每天注射ConA 2 h后,EA-PAOA 3个试验组分别腹腔注射不同浓度的EA-PAOA 0.5 mL,每天3次,共4 d,第5天只在注射ConA后2 h注射1次EA-PAOA。末次注射EA-PAOA后6 h,摘眼球取血低温保存,待测谷丙转氨酶活性(ALT)、3个细胞因子;取肝待行肝脏组织病理学检查注射;取脾待行淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术以检测T淋巴细胞亚群。结果显示,EA-PAOA 3个试验组血清中,ALT、IFN-γ、TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高,能显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,与模型对照组相比差异极显著(P<0.01);但流式细胞术检测T淋巴细胞亚群发现,5组CD4+T和CD8+T淋巴细胞的数量和比例并无明显差别,都与正常对照组无显著差异;EA-PAOA 3个试验组肝脏组织病理改变较模型对照组明显改善。表明EA-PAOA可能是通过抑制T淋巴细胞的转化增殖,抑制其活性,调节Th1和Th2的数量及比例,降低血清中IFN-γ、TNF-α水平,提高IL-10水平,以此发挥其治疗免疫性肝损伤的功能。

真菌提取物AMH的肿瘤化学预防活性组分追踪

目的:对真菌提取物AMH进行活性组分追踪,为分离其活性化学成分、开发抗癌药物提供基础。方法:采用苯并(a)芘诱发小鼠肿瘤实验,评价AMH的5个组分对苯并(a)芘诱发肿瘤的预防作用。结果:苯并(a)芘能诱导昆明种小鼠多个脏器发生肿瘤。AMH 5个组分对苯并(a)芘诱发小鼠肿瘤的作用存在明显差异,与阴性对照组相比,组分A、B、C、E具有促进肺腺瘤发生的作用(P<0.05);组分B和E能抑制苯并(a)芘诱导的脏器肿瘤(P<0.05);组分D具有抑制苯并(a)芘诱发小鼠脏器肿瘤和肺腺瘤的作用(P<0.01),是AMH中具有肿瘤化学预防作用的活性组分。结论:AMH组分D具有肿瘤化学预防作用,是下一步活性追踪的功效组分。

玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:探讨玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤的保护作用,探讨其发挥此作用的可能的机制。方法:①实验于2004-06/10在锦州医学院免疫实验室完成。选用健康雄性昆明小鼠50只,普通级。将50只健康雄性昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、玉竹提取物A0.5g/kg组、玉竹提取物A1g/kg组、玉竹提取物A2g/kg组,每组10只。②玉竹提取物A是玉竹的干燥根茎经水醇法提取而得。③正常对照组和模型对照组小鼠腹腔注射生理盐水,玉竹提取物A0.5,1,2g/kg组小鼠分别腹腔注射相应浓度的玉竹提取物A,每次每只0.5mL,3次/d,连续注射4d。最后一次注射后8h,除正常对照组注射生理盐水外,其余各组均尾静脉注射20mg/kg的刀豆蛋白A0.5mL,制备免疫性肝损伤模型。④注射刀豆蛋白A8h后摘眼球取血低温保存,取肝待行光镜检查,以观察肝脏组织病理学改变(常规苏木精-伊红染色),取脾待行淋巴细胞增殖实验(采用四甲基偶氮唑盐法)和流式细胞术以检测T淋巴细胞亚群。各组小鼠血清谷丙转氨酶活性检测按购自南京建成生物研究所的谷丙转氨酶试剂盒说明进行。⑤组间计量资料差异比较采用方差分析。结果:昆明小鼠50只均进入结果分析。①肝脏组织病理学改变:模型对照组可见明显免疫性肝损伤病理改变。玉竹提取物A3个实验组小鼠肝损伤病理改变均不同程度的好于模型对照组。②玉竹提取物A对血清谷丙转氨酶活性的影响:模型对照组血清谷丙转氨酶活性明显高于正常对照组(t=13.8,P<0.01),玉竹提取物A3个实验组血清谷丙转氨酶活性低于模型对照组,尤以玉竹提取物A2g/kg组与模型对照组差异最明显(t=5.62,P<0.01),且存在剂量依赖关系。③玉竹提取物A对T淋巴细胞转化增值的影响:刀豆蛋白A刺激体外培养的各组脾淋巴细胞,模型对照组的刺激指数明显高于正常对照组(t=9.02,P<0.01),玉竹提取物A3个实验组的刺激指数明显低于模型对照组(t=6.99～11.06,P<0.01),且存在剂量依赖关系。④玉竹提取物A对脾组织T淋巴细胞亚群的影响:各组,CD4+T,CD8+T淋巴细胞的数量和比例差异不明显(P>0.05)。结论:①玉竹提取物A具有抑制肝细胞破坏及改善肝脏微循环的作用。②玉竹提取物A可以显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,并呈剂量依赖关系,玉竹提取物A发挥肝保护作用的一个机制可能就是显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,减少肝损伤细胞因子的释放,抑制活化增殖的T淋巴细胞对肝细胞的直接细胞毒作用。③在肝损伤的早期可能只是大量免疫细胞聚集于肝脏并且各种分泌及破坏功能增强,而非其数量明显增加。

白背叶提取物A的体外抗肿瘤活性研究

目的观察白背叶提取物A对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用四唑盐比色试验(MTT法),以半数抑制浓度(IC50)为评价抗肿瘤活性强度的指标,分别对HL60人白血病细胞、Hela人宫颈癌细胞、A375人黑色素瘤细胞、MCF7人乳腺癌细胞4种常见的人恶性肿瘤细胞进行抗肿瘤活性的筛选。结果白背叶提取物A在浓度为10μg/ml时对HL60(P<0.05)、Hela(P<0.05)、A375(P<0.05)、MCF7(P<0.01)即有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),其IC50分别为29.64,30.36,36.65,42.81μg/ml。结论白背叶提取物A对以上4种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。

白背叶提取物A对人肿瘤细胞增殖的抑制作用研究

目的观察白背叶提取物A对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用四唑盐比色实验(MTT法),以半数抑制浓度(IC50)为评价抗肿瘤活性强度的指标,分别对4种常见的人恶性肿瘤细胞进行抗肿瘤活性的筛选。结果白背叶提取物A在浓度为5μg/ml时对人胃癌细胞SGC-7901,人肺癌细胞A549有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),其IC50分别为27.14μg/ml,33.08μg/ml;在浓度为20μg/ml时对人结肠癌细胞LoVo有抑制作用(P<0.05),其IC50为36.82μg/ml;在浓度为40μg/ml时对人肝癌细胞Bel-7404有抑制作用(P<0.05),其IC50为37.70μg/ml。结论白背叶提取物A对以上4种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。

玉竹提取物A对小鼠巨噬细胞白细胞介素-1和肿瘤坏死因子产生的影响

目的研究玉竹提取物A(extraction A of polygonatum odoratum,EA-PAOA)对小鼠巨噬细胞和细胞因子产生的影响,以探讨对免疫功能的作用。方法检测小鼠体外巨噬细胞产生的白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果 10μg/mL以上浓度的EA-PAOA对小鼠巨噬细胞产生的IL-1有抑制作用,1000μg/mL浓度的EA-PAOA的抑制百分率(IP)达39.1%,对TNF-α抑制作用比对IL-1的抑制作用明显,10μg/mL浓度的EA-PAOA达28.6%,1000μg/mL浓度的EA-PAOA的CIP达78.6%。两者均呈量效依赖关系。结论 EA-PAOA对小鼠巨噬细胞产生的IL-1和TNF-α,均有抑制作用,可抑制小鼠的免疫功能。

玉竹提取物A对内毒素血症小鼠血清中肿瘤坏死因子α及一氧化氮水平影响的量效依赖性

目的:观察百合科黄精属中草药玉竹的醇提取物玉竹提取物A对内毒素血症小鼠72h存活率、血清中肿瘤坏死因子及一氧化氮水平的影响。方法:①实验于2005-01/03在锦州医学院免疫学实验室完成。选用6～8周龄雄性昆明种小鼠150只。150只小鼠被随机分为2组:Ⅰ组100只,Ⅱ组50只。②将Ⅰ组小鼠随机分为4组:模型组和玉竹提取物A(由锦州医学院潘兴瑜教授提供)低、中、高剂量组,每组25只。玉竹提取物A低、中、高剂量组腹腔注射玉竹提取物A0.5,1,2g/kg,1次/d,连续7d,模型组腹腔注射等量生理盐水。末次给药后1h模型组和玉竹提取物A组应用内毒素腹腔注射(10mg/kg)建立小鼠内毒素血症模型,记录小鼠72h存活率。③Ⅱ组小鼠随机分为5组:正常对照组,模型组和玉竹提取物A低、中、高剂量组,每组10只。模型组和玉竹提取物A低、中、高剂量组干预措施同Ⅰ组,正常对照组给予等量生理盐水。内毒素给药后6h采血并应用双抗体夹心酶联免疫吸附实验检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子α水平,化学比色硝酸还原酶法检测血清一氧化氮水平。④组间显著性检验应用单向方差分析,组间比较方差齐时选用LSD法,方差不齐时用DunnetT3法。结果:昆明种小鼠150只均进入结果分析。①玉竹提取物A各剂量组72h生存率均明显高于模型组(P<0.05),玉竹提取物A各剂量组间72h生存率比较,差异不明显(P>0.05)。②模型组血清肿瘤坏死因子α和一氧化氮水平明显高于正常对照组(P<0.01)。玉竹提取物A低、中、高剂量组血清肿瘤坏死因子α和一氧化氮水平明显低于模型组,且呈量效依赖性(P<0.01),玉竹提取物A中、高剂量组血清一氧化氮水平明显低于模型组(P<0.01),但玉竹提取物A低剂量组血清一氧化氮水平与模型组比较,差异不明显(P>0.05)。结论:玉竹提取物A能够显著提高内毒素血症小鼠72h存活率;玉竹提取物A可明显降低血清中肿瘤坏死因子α和一氧化氮水平,且呈量效依赖性。

玉竹提取物A对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖及死亡率的影响

目的 研究玉竹提取物A (extractionAofpolygonatumodoratum ,EA -PAOA)对链脲佐菌素 (STZ)诱导的I型糖尿病小鼠降血糖作用及死亡率影响。方法 采用链脲佐菌素小剂量多次注射诱导Ⅰ型糖尿病小鼠模型 ,实验组分三个浓度腹腔注射等体积EA -PAOA ,对照组注射等体积生理盐水 ,监测血糖及死亡率变化。另选昆明小鼠 6 0只 ,对EA -PAOA进行急性毒性实验。结果 实验组血糖及死亡率与对照组比较有不同程度的降低 ;急性毒性实验显示EA -PAOA毒性作用很低 ,LD5 0 =14 5 12 4g/Kg。 结论 经腹腔注射EA -PAOA能明显降低STZ诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖及死亡率 ,安全范围大。

肺腺癌多药耐药细胞株SPCA_1/ADM的建立及中药方剂提取物A_2的逆转作用研究

目的 :研究中药方剂提取物A2 与肿瘤多药耐药之间的关系。方法 :建立多药耐药细胞系SPCA1/ADM ,通过MTT法测定细胞耐药性及耐药性的逆转作用 ,用流式细胞技术检测P -糖蛋白 (P -glycoprotein ,P -gp)的表达 ,用荧光法测定细胞内ADM的积累。结果 :A2 本身具有抑癌作用 ,且其无或低细胞毒浓度 ( 5 0 μg/ml、10 0 μg/ml)可增加SPCA1/ADM对阿霉素的敏感性 2 9.5倍及 40 .5倍。 10 0 μg/mlA2 +异搏定 (Verapamil ,VLP) 10 μg/ml ,使SPCA1/ADM的敏感性由 2 9.5倍增至 45 .5倍。提示两者有协同作用。A2可抑制P -gp的表达 ,并明显增加SPCA1/ADM细胞内阿霉素含量。结论 :SPCA1/ADM具有多药耐药表型。中药A2 可能通过抑制P -gp功能 。

玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用

目的:研究1型糖尿病(DM)的发生与细胞因子作用的关系及玉竹提取物A(EA-PAOA)对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠(下称STZ小鼠)血糖和细胞因子的影响。方法:昆明小鼠60只,对EA-PAOA进行急性毒性实验。采用STZ小剂量多次注射诱导1型糖尿病小鼠模型,正常对照组与DM对照组各1组,实验组分三个剂量腹腔注射等体积EA-PAOA,用药4周监测血糖变化,4周后应用EL ISA法检测外周血血清IL-4、IL-10、IFN-γ含量。结果:急性毒性实验显示EA-PAOA毒性作用很低,LD 50=14.5124g/K g;DM对照组与正常对照组比较IL-4、IL-10降低,IFN-γ升高;实验组与DM对照组比较血糖明显降低,IL-4、IL-10升高,IFN-γ降低。结论:1型DM的发生与细胞因子IL-4、IL-10降低,IFN-γ升高有关,EA-PAOA安全范围大,可调节STZ小鼠发病过程中细胞因子水平,干预1型DM发生发展。

玉竹提取物A对免疫性肝损伤小鼠细胞因子的影响

目的研究玉竹提取物A(EA-PAOA)对免疫性肝损伤小鼠细胞因子的影响,探讨其发挥抗肝损伤作用的可能机制。方法将昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、实验1组(EA-PAOA 0.5 g/kg)、实验2组(EA-PAOA 1 g/kg)、实验3组(EA-PAOA 2 g/kg)。除正常对照组外,其余各组均尾静脉注射20 mg/kg的刀豆蛋白A(ConA)0.5 mL,1次/d,连续5 d。每天注射ConA 2 h后,实验组分别腹腔注射不同浓度的EA-PAOA0.5 mL,3次/d,共4 d,第5天注射ConA后2 h注射1次EA-PAOA。末次注射EA-PAOA 6 h后摘眼球取血,测细胞因子。取肝脏组织进行病理学检查。结果3个实验组血清中IFN-γ和TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高,并呈剂量依赖关系,与模型对照组相比差异显著。肝脏组织病理改变较模型对照组明显改善。结论EA-PAOA可能是通过降低血清中IFN-γ和TNF-α水平、升高IL-10水平以拮抗免疫性肝损伤作用。

MTT法测定矿物质提取物MICOM及中药提取物AN4的体外抗肿瘤活性

目的 用体外培养法研究矿物质提取物MICOM及中药提取物AN4对肝脏肿瘤细胞生长的抑制作用。方法 采用MTT法进行研究。结果 细胞在MICOM、AN4处理 72h后 ,测得MICOM的IC50 为 9.32 μg/ml。结论 矿物质提取物MICOM在体外可有效抑制HLE细胞的生长 。

菊苣提取物amyrin对家兔主动脉平滑肌细胞膜微粘度的影响

目的观察菊苣提取物αａｍｙｒｉｎ对高糖高脂环境中家兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）膜微粘度及过氧化脂质（ＬＰＯ）含量的影响。方法采用两种离体方法对比观察，即以家兔灌服该提取物后获取的含药物血清加至细胞培养基中的血清药理学方法和将提取物直接加至培养基中的直接体外给药法。结果两种方法给药均可降低高脂高糖模型细胞膜微粘度、改善细胞膜流动性，降低培养液中ＬＰＯ含量；两者之间作用强度无明显差异。结论该提取物具有一定的对抗ＳＭＣ高糖高脂损伤的药理活性；且在体内外对ＳＭＣ膜流动性作用相似；可能是菊苣防治糖尿病大血管并发症的重要组分之一。

辣椒素敏感神经元介导地黄提取物A的胃粘膜保护作用

目的 探讨神经调节在干地黄胃粘膜快速保护中的作用。方法 采用无水乙醇性胃粘膜损伤模型，观察干地黄８００ ｇ／Ｌ提取物Ａ对辣椒素化学去神经前后大鼠的影响。结果 ①胃饲提取物Ａ６ ｇ／ｋｇ 有效防止随后立即给予２ ｍｌ 无水乙醇所致的胃粘膜损伤，损伤抑制率为７４－７％ ；②用１００ ｇ／Ｌ辣椒煎剂预处理大鼠，提取物Ａ的胃粘膜保护作用没有明显变化，损伤抑制率为８８－２４％ ；③用４００ ｇ／Ｌ辣椒煎剂预处理，提取物Ａ的胃粘膜保护作用明显减弱，损伤抑制率降为３８－２％ ；④用８００ ｇ／Ｌ辣椒煎剂预处理，提取物Ａ 的保护作用已基本消失，损伤抑制率仅为７－２％ 。结论 干地黄胃粘膜快速保护作用可能与胃粘膜内辣椒素敏感神经元有关。

海绵polymistia spongia提取物aldisin的抗脂质过氧化及清除自由基作用研究

目的研究海绵ｐｏｌｙｍｉｓｔｉａｓｐｏｎｇｉａ提取物ａｌｄｉｓｉｎ的抗脂质过氧化及清除自由基作用。方法采用ＭＤＡ－ＴＢＡ比色法测定组织匀浆中过氧化脂质（ＬＰＯ）含量；采用邻苯三酚自氧化法测定ａｌｄｉｓｉｎ对Ｏ·２自由基的清除作用；采用分光光度法测定ａｌｄｉｓｉｎ对Ｃｕ２＋－ＶｉｔＣ体系产生的·ＯＨ自由基的清除作用；采用ＥＳＲ法测定ａｌｄｉｓｉｎ对ＤＰＰＨ自由基的清除作用。结果ａｌｄｉｓｉｎ具有显著的抗脂质过氧化作用，并能有效地清除Ｏ·２、·ＯＨ和ＤＰＰＨ自由基，在０．４２６μｍｏｌ·Ｌ－１～１８．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１浓度范围内有明显的量效关系。结论ａｌｄｉｓｉｎ是自由基清除剂。

干地黄提取物A、B抗大鼠实验性胃溃疡作用

目的 研究干地黄提取物A、B对大鼠急、慢性实验性胃溃疡的影响及可能机制。方法 用 80 %的乙醇将干地黄煎剂分成A(醇溶性部分 )、B(醇不溶性部分 )两大部分 ,采用无水乙醇型和慢性乙酸型胃溃疡模型进行观察。结果 ①预先胃饲 12g/kg提取物A或B ,均能显著抑制无水乙醇所致的胃粘膜损伤 ,抑制率分别为 98 7%和 61 0 % ;②每天胃饲 6或 12g/kgA提取物还能加快无水乙醇型和慢性乙酸型胃溃疡的愈合 ;③肌注 12g/kgA提取物对无水乙醇性胃粘膜损伤无明显影响 ,胃饲 6g/kgA提取物对胃壁结合粘液量也没有影响。结论 干地黄既能预防溃疡的形成 ,又能促进溃疡的愈合 ;其活性成份主要位于醇溶性部分 。

白背叶提取物A的体外抗肿瘤机制的研究

目的研究白背叶提取物A对SGC-7901人胃癌细胞增殖抑制作用的发生机制。方法采用RT-PCR检测白背叶提取物A对SGC-7901人胃癌细胞抑癌基因p53,癌基因Bcl-2表达的影响。结果不同浓度的白背叶提取物A作用于SGC-7901细胞后:p53的mRNA表达均有增强,10,20,40μg/ml浓度的p53 mRNA表达均显著高于空白组(P<0.01);各实验浓度的白背叶提取物A作用下SGC-7901细胞的Bcl-2 mRNA表达均有降低,与空白组相比具有显著性差异(P<0.01),且该作用有一定的剂量依赖性。结论对抑癌基因p53、癌基因Bcl-2表达的影响是白背叶提取物A抗肿瘤的作用机制之一。

麻黄汤提取物A的药效学研究

从麻黄汤中分得之单体A 5mg/kg对氨雾所致小鼠有显著的止咳作用 ,单体A尚具有明显的发汗作用。

朱砂莲提取物A_(1015)及其单体成分马兜铃酸A的镇痛作用研究

朱砂莲提取物 (A10 15)对小鼠醋酸扭体试验的镇痛作用实验表明 :A10 15的ED50 为朱砂莲胶囊ED50 的 1/2 2 5 ,马兜铃酸A的ED50 为A10 15ED50 的 1/16 ,为朱砂莲胶囊ED50 的 1/72 0。说明朱砂莲资源的利用以开发朱砂莲提取物A10 15为最佳。