简便快速的血中DNA提取纯化法

目的 为了探讨血中DNA提取纯化的简便快速的方法。方法 用TritonX 10 0同时反复破碎红细胞和白细胞 ,然后用NaClO4、SDS解聚核蛋白 ,用PCI抽提 ,SephaderG 2 5柱层析。结果 A2 60 /A2 80 可达 1.78～ 1.80 ,平均产量 2 0 .3μg/ml,全过程 2～ 3h。 结论 这种方法用于临床经济、快速、得率高 ,诊断结论可靠。

两种提取小鼠血清来源外泌体方法的比较

目的比较超速离心法与纯化试剂盒提取法提取血清外泌体的有效性与实用性,为后续外泌体相关研究提供借鉴。方法将12只6~8周C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为两组,每组6只,即超速离心法提取组及纯化试剂盒提取组。分别用两种方法分离小鼠血清中的外泌体。使用纳米粒度及zeta电位仪(Nano ZS90)检测两组外泌体的粒径大小及分布;使用透射电子显微镜观察两种方法提取外泌体的形态结构;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测外泌体标志蛋白的表达水平;对两种方法所提取外泌体中的核糖核酸(RNA)分离鉴定,比较两种方法提取外泌体中RNA的异同。结果两组所得的外泌体直径为30~150 nm,形态均为脂质双分子层囊泡样,Western blot法检测结果显示两组外泌体均表达标志蛋白cluster of differentiation 63和tumor susceptibility gene,差异无统计学意义(P>0.05);与纯化试剂盒提取组比较,超速离心法提取组的外泌体浓度更高,差异有统计学意义(P<0.05),且超速离心法提取组中外泌体所含RNA以microRNA为主,而纯化试剂盒提取组的外泌体中所含RNA主要为piRNA。结论超速离心法与纯化试剂盒提取法均能有效提取外泌体,但所得到的外泌体包含不同RNA成分,为外泌体的研究提供更有效的选择方法。