夏大豆提取蛋白质的组分及其亚基组构成变异分析

选取在山东省济宁地区大豆产区曾经或正在生产上推广使用的35个品种为供试品种,采用SDS-PAGE电泳技术测定提取蛋白质11S组分、7S组分、亚基组和亚基的相对含量以及亚基数量,研究其变异特点.在济宁地区同一条件下的结果表明:(1)11S和7S组分的亚基总数变异范围为15～23个,平均为18.03个.7S组分亚基数量变异范围为3～7个,平均4.49个,有5个亚基组存在不同程度的缺失.11S组分亚基数量变异范围为11～19个,平均13.54个,没有亚基组缺失现象.(2)7S组分相对含量的变异范围为14.78～27.54%,平均为22.07%;11S组分的变异范围为49.04～63.52%,平均为59.77%.11S/7S比值变异范围为2.12～4.11,平均为2.77.(3)7S组分6个亚基组的相对含量平均为4.38～6.62%,11S组分4个亚基组平均相对含量为7.02～21.72%.(4)7S组分相对含量与11S组分之间有微弱的正相关(r=0.08),7S组分相对含量与11S/7S比值之间存在极显著的负相关(r=-0.94).而11S组分相对含量与11S/7S比值之间存在微弱的正相关(r=0.19).7S的6个亚基组中相邻的2个亚基组之间都存在显著或极显著的负相关(r=-0.38～-0.85).11S组分的相邻亚基组之间存在负相关关系(r=-0.78～-0.95),不相邻的亚基组之间相关关系微弱.

三种油料作物籽粒提取蛋白质组分的比较研究

以普通市售油料作物黄豆、黑芝麻和花生为供试材,通过"碱溶酸沉"法提取其籽粒中蛋白质,用SDS-PAGE方法分析蛋白质11S和7S组分的相对含量.结果表明,三种油料作物籽粒提取蛋白质组分相对含量存在极显著差异,其中,以大豆的11S组分含量最高为56.87%,芝麻的最低为32.32%,7S组分含量以大豆的最高为28.87%,芝麻的最低为21.53%,11S/7S的比值以大豆最高为1.93,芝麻的最低为1.50.

酶法处理玉米胚芽粕提取蛋白质的条件初探

选用提油后的玉米胚芽粕为原料,利用纤维素酶对预处理后的胚芽粕进行水解,通过测定离心液中的糖量,残渣中纤维素水解率及浓缩后蛋白质含量等指标,考察胚芽粕预处理过程及酶解过程中几个主要因素对蛋白提取效果的影响。结果表明,预处理过程中4个因素对蛋白质提取效果影响的次序依次为:浸泡温度>浸泡时间>料液比>样品粒度。酶解过程中3个因素对蛋白质提取效果影响的次序依次为:加酶量>酶解时间>pH。结合正交试验的结果,同时考虑经济节约的原则,得到最佳组合为:浸泡温度35℃,浸泡时间48 h,料液比1:12,粒度100目,加酶量2%,酶解时间48 h,pH值4.5。最佳条件下测定产品中蛋白质含量可达42.5%。

微型制备型电泳比较从细胞中提取蛋白质的3种方法

为探索建立适用于从人卵巢癌细胞株SKOV3中提取蛋白质的最优化方法,通过培养人卵巢癌细胞株SKOV3,分别采用Pull-Down Lysis、RIPA裂解法和加有硫脲的细胞裂解液提取细胞总蛋白,使用Bradford法测定蛋白质浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,然后使用微型制备型电泳分离蛋白,根据色谱图上的吸收峰比较从人卵巢癌细胞株SKOV3细胞中提取蛋白质的3种方法。结果表明:不同方法提取人卵巢癌细胞株SKOV3总蛋白的丰度及色谱图存在差异,PullDown Lysis试剂法在分离相对分子质量为15~80 k Da的蛋白质方面具有明显的优势。3种方法中以Pull-Down Lysis试剂法为人卵巢癌细胞株SKOV3蛋白质提取的最优方法,与微型制备型电泳的兼容性更好。

适于苹果韧皮部提取蛋白质的方法

利用TCA/丙酮沉淀法、直接提取法和两种改良的Tris-HCl提取法对苹果实生树的韧皮部提取蛋白质,并用SDS-PAGE和银染显色的方法对提取的蛋白质结果进行比较,发现:用经过浓缩的的Tris-HCl改良法提取的蛋白质条带清晰,数量多,方法简单且杂质干扰少。因此浓缩的Tris-HCl改良法是适用于苹果韧皮部蛋白质提取的最佳方法。

富硒荷叶离褶伞菌丝体中蛋白质提取工艺优化及氨基酸组成分析

以20 L生物发酵罐培养的富硒荷叶离褶伞菌丝体为原料,对菌丝体中蛋白提取工艺进行优化,并分析硒的富集对荷叶离褶伞菌丝体中氨基酸种类和含量的影响。利用单因素实验和Box-Benhnken中心组合响应面试验法,优化了荷叶离褶伞菌丝体中硒蛋白提取工艺,采用3,3'-二氨基联苯胺分光光度法测定蛋白质中硒的含量,并通过氨基酸测定仪分析测定富硒前后的菌丝体蛋白中氨基酸量的变化。结果表明,荷叶离褶伞菌丝体中硒蛋白的最适提取条件为:提取温度64℃、提取时间60 min、液料比200:1 mL/g、提取次数2次,经过验证性试验,测得蛋白提取率为75.13%,菌丝体中富硒量达到63.87μg/g。采用氨基酸测定仪分析氨基酸的组成,并通过氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)指标对富硒荷叶离褶伞菌丝体蛋白质进行初步营养价值评价。富硒荷叶离褶伞菌丝体中蛋白质中氨基酸种类齐全,人体必需氨基酸含量为17.20 g/100 g,较未富硒的高出19.75%,必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)为0.51,接近WHO提出的推荐值,AAS和CS的值接近于模式蛋白。说明经过工艺优化可以提高蛋白质提取率,在富硒菌丝体蛋白质中含有硒,硒促进了氨基酸含量的增加,富硒菌丝体中蛋白质的营养价值较未富硒菌丝更高,富硒菌丝体具有潜在的食用和应用价值。

碱联合热活化过硫酸盐提取污泥中蛋白质的效能

为了资源化利用污泥,采用CaO耦合80℃热活化过硫酸盐提取污泥中蛋白质,以市政污水厂剩余活性污泥为原材料,考察了较短时间内不同投量下CaO对过硫酸盐提取蛋白质效能的影响。结果表明:每克干污泥投加200~250 mg的CaO,同时处理时间控制在15~30 min,能够显著提高上清液中总蛋白质质量浓度,从原泥的743 mg·L^(-1)提高到6000 mg·L^(-1)左右。同时污泥中氨氮、总磷及多糖均从污泥中释放到了液相中,紧密附着型胞外聚合物在热碱和氧化作用下提供了大量蛋白质。

蛋白桑叶中蛋白质提取工艺优化及6种蛋白酶酶解物体外降血糖活性分析

为开发利用蛋白桑叶中蛋白质资源,对其蛋白质提取工艺及酶解物体外降血糖活性进行研究。本研究以蛋白桑叶为原料,采用超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白质。通过单因素实验和响应面法优化提取工艺,以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,分析不同蛋白桑叶蛋白酶解产物体外降血糖活性。结果表明,蛋白桑叶中蛋白质的最佳提取工艺为:氢氧化钠浓度0.125 mol/L、提取温度40℃、提取时间40 min和液料比37:1 mL/g。在此优化条件下,得到蛋白质提取率实际值为49.59%±0.45%,所得蛋白质等电点为pH3.5,吸水性为6.49±0.49 g/g,吸油性为2.59±0.06 g/g,乳化活性为7.40±0.17 m^(2)/g,乳化稳定性为72.48%±3.03%。研究考察了蛋白桑叶蛋白质的复合蛋白酶酶解物、风味蛋白酶酶解物、碱性蛋白酶酶解物、胰蛋白酶酶解物、中性蛋白酶酶解物、木瓜蛋白酶酶解物体外降血糖活性,其中中性蛋白酶酶解物对α-葡萄糖苷酶抑制效果最佳,其IC_(50)=3.52 mg/mL。本研究认为,此蛋白桑叶蛋白质提取工艺稳定,中性蛋白酶解肽具有较高的体外降血糖活性,为进一步开发蛋白桑叶蛋白质及其多肽资源提供参考。

紫菜作为替代蛋白质可持续来源研究进展

对蛋白质需求的增加、气候变化、淡水资源和耕地的减少,使得人们对大型海藻作为替代蛋白质资源开发的兴趣日益浓厚。紫菜作为红藻中具有代表性的海藻之一,其全球养殖总产量仅排在海带属、卡帕藻属和麒麟菜属海藻之后。相比较于其他海藻,紫菜富含蛋白质、多糖、膳食纤维、不饱和脂肪酸、牛磺酸、类菌孢素氨基酸、多种维生素和矿物质,但相关研究主要关注紫菜多糖的提取与利用,对于紫菜作为替代蛋白质开发的研究比较匮乏。综述了从紫菜中提取蛋白质的相关技术研究进展及各种技术的规模化开发潜力,为未来利用紫菜开发替代蛋白质提供参考。

响应面优化羊肚菌子实体蛋白质提取工艺及其抗氧化性研究

以新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州的六妹羊肚菌为试验材料,采用超声波辅助碱提酸沉法提取羊肚菌蛋白质,测其抗氧化活性,以蛋白质提取率为指标,选择料液比、超声时间、超声温度和pH为影响因素进行单因素试验,采用响应面法优化提取条件,并用优化后工艺提取来自不同地区的羊肚菌蛋白质。结果显示,通过响应面法优化的羊肚菌蛋白质最佳提取条件为:料液比1︰20(g/mL)、超声时间20 min、超声温度40℃、pH 11,该条件下蛋白质提取率为(32.94±0.39)%。对蛋白质粗提物进行DPPH和ABTS自由基清除试验,结果清除率同蛋白质浓度呈正相关且具有一定的抗氧化活性;优化提取工艺对5个不同地区的六妹羊肚菌蛋白质提取结果均较好。

适于SDS-PAGE分析的苹果叶片蛋白质提取方法

为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白质差异带,分子量分别为71.9,60.5,52.6,41.1,35.3,18.5 kDa,条带清楚,背景清晰。因此,改良的Tris-HCl法适用于苹果叶片的SDS-PAGE分析。

双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法

组织(或细胞)的蛋白质提取效率直接影响蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)的分辨率.为探索建立适用于人乳腺癌细胞株MCF-7蛋白质提取的最佳条件,比较目前在双向凝胶电泳中常用的3种蛋白质提取方法对MCF-7细胞总蛋白的提取效率.MCF-7细胞经培养后,分别采用M-PER试剂、标准裂解液或含硫脲裂解液提取其总蛋白质,然后进行双向凝胶电泳,并根据凝胶上蛋白质斑点的丰度和分布特点判断所得双向电泳图谱的质量,以确定MCF-7细胞蛋白质提取的相对最佳方法.结果显示,M-PER试剂法得到的图谱分辨率较低,蛋白质主要集中分布在分子量15～70 kD,pH 4.7～6.3的范围内;标准裂解液法得到的图谱分辨率有所提高,蛋白质分布比M-PER试剂法得到的图谱广;硫脲裂解液法得到的图谱是三者中分辨率最高的,尤其是高丰度蛋白和高分子量蛋白分离效果比前两者好.结果表明,在3种常用的蛋白质提取方法中,硫脲裂解液对细胞蛋白质的溶解性最佳,相对更适合于提取MCF-7细胞的蛋白质,并与双向凝胶电泳条件更兼容.

松仁深加工中提高蛋白质提取率工艺研究

研究了松仁深加工中提高蛋白质提取率的打浆工艺和ProtamexTM酶解工艺。松仁经打浆和酶解处理,可使总蛋白质提取率达到87.7%。打浆工艺参数:固液比1∶17,水温50℃,过两次胶体磨;ProtamexTM酶解工艺参数:6%酶浓度,自然pH(松仁浆的pH)下,30℃酶解1h。

适用于毛白杨芽双向电泳分析的蛋白质提取方法

本实验以毛白杨芽为实验材料,采用Tris-酚法、三氯乙酸-丙酮法和三氯乙酸-丙酮+Tris-酚法对其蛋白质提取方法进行比较,采用双向电泳分离蛋白质,通过PDQuest软件和质谱对这3种提取方法得到的双向电泳胶进行分析。结果显示,三氯乙酸-丙酮法得到的蛋白点数量为231±4,得到的鲜样中的总蛋白质含量为(3.57±0.618)mg/g,均高于其他两种提取方法,并且所得到的双向电泳胶更清晰,为毛白杨芽蛋白质提取的最适方法。

传统发酵永川毛霉型豆豉蛋白质提取方法比较与降解规律研究

比较TCA/丙酮沉淀法、酚提取法、Tris-HCl法、匀浆法4种方法对样本进行蛋白质提取的效果,研究毛霉豆豉在不同发酵阶段蛋白质的降解过程。结果表明:TCA/丙酮沉淀法适用于基于SDS-PAGE电泳的豆豉蛋白质提取。毛霉型豆豉大分子蛋白在前发酵过程中经蒸煮和毛霉分泌的蛋白酶作用后快速降解成小分子蛋白,其中蒸煮对大分子的蛋白影响最大。

蒸汽爆破辅助提取高温豆粕中的蛋白质

研究了蒸汽爆破对高温豆粕中蛋白质溶解性的影响和后续蛋白质提取工艺。结果表明:当蒸汽压力较低时,高温豆粕的氮溶解指数随着蒸汽压力的升高而提高,但当超过2.1 MPa时,压力对爆破处理的效果的影响不明显;豆粕的粒度对蒸汽爆破效果有一定的影响,当豆粕颗粒的平均小于100目时效果不佳,在20～80目时效果较好。当高温豆粕颗粒大小为20～80目,爆破条件为1.8 MPa,180 s时,蒸汽爆破处理使高温豆粕的氮溶解指数提高了1.1倍。对经蒸汽爆破处理的高温豆粕中蛋白质的提取条件研究表明,pH值和温度对蛋白质的提取率有较大影响。在优化条件下,经蒸汽爆破处理的高温粕的蛋白质提取率达到76.04%。

适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法

为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（12.5%的分离胶）作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3-10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000-66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。

一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法

高质量的蛋白样品制备是进行双向电泳的前提条件。杨树叶片中因含有丰富的多酚、色素、多糖等物质,给蛋白质的提取带来了困难。为了找到一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法,以南林895杨为实验材料,采用三氯乙酸-丙酮沉淀法对杨树叶片蛋白质进行提取。对所提取的蛋白分别用考马斯亮蓝染色法和银染法进行检测,得到了良好的双向电泳图谱。

不同方法提取蚱蝉若虫蛋白质效果比较

以蚱蝉(Cryptotympana pustulata)若虫为材料,采用正交试验法,对蚱蝉若虫蛋白质的提取条件进行了研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为盐提蛋白法,Tris-HCl提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数0.5%、温度60℃、时间60min、固液体积比为1∶5时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法的主要工艺指标为:盐液质量分数1.5%、温度40℃、时间120min、固液体积比为1∶10时蛋白质得率有最大值;Tris-HCl提蛋白法的主要工艺指标为:Tris-HCl液pH值8.1、抽提温度20℃、抽提时间30min、固液体积比1∶10时蛋白质得率有最大值。

甘草种子蛋白质提取及SDS-PAGE电泳技术研究

目的:建立一套适用于甘草种子蛋白质提取及SDS-PAGE电泳的技术体系,为甘草种子纯度检测提供技术支撑。方法:对甘草种子蛋白质的8种提取方法进行了筛选,在此基础上进一步比较不同的分离胶浓度、不同料液比对甘草种子蛋白质SDS-PAGE电泳的影响,并采用该技术方法对乌拉尔甘草和胀果甘草种子进行鉴定。结果:巯基乙醇法和丙酮沉淀法是适宜的蛋白质提取方法,巯基乙醇法得到12条带,丙酮沉淀法得到9条蛋白质条带,且背景颜色较浅,适宜于进行种子纯度检测。10%分离胶和1∶10的料液比电泳效果较好。乌拉尔甘草和胀果甘草种子有蛋白质条带的差异。结论:建立了一种高质量的甘草种子蛋白质样品的制备方法及SDS-PAGE电泳技术,可用于甘草种子纯度检测。