插入序列ISAba1对多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因表达的影响

目的了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中插入序列ISAba1的存在对碳青霉烯酶基因表达的影响。方法筛选32株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌,运用PCR技术检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58型酶基因及插入序列ISAba1;RT-PCR方法检测ISAba1下游基因的mRNA的相对表达水平。结果 OXA-51型基因的检出率为100%,OXA-23型基因为96.9%。其中23株OXA-23型基因、18株OXA-51型基因上游均存在插入序列。RT-PCR结果显示上游存在ISAba1时,OXA-23和OXA-51型基因相对表达水平分别为1.6471±0.6560和1.3209±0.3678,与不存在插入序列的相应基因表达水平相比,二者差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 OXA-23和OXA-51型基因是本组试验菌的主要碳青霉烯酶基因型,ISAba1序列的插入可引起下游碳青霉烯酶基因高表达。

90株鲍曼不动杆菌OXA基因及ISAba1对OXA-23基因表达的影响

目的研究该院鲍曼不动杆菌(Ab)OXA基因流行趋势及ISAba1对OXA-23基因表达的影响。方法采用VITEK 2Compact全自动微生物鉴定仪检测90株非重复Ab,多重聚合酶链式反应(PCR)检测Ab的OXA基因和插入序列(ISAba1)。TA克隆耐药基因全序列blaOXA-23、插入序列ISAba1和ISAba1-blaOXA-23,并分别用大肠杆菌进行转化,肉汤稀释法测定阳性菌株和转化子对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。结果多重PCR检测90株Ab,blaOXA-23阳性73株,blaOXA-51阳性90株,ISAba-1阳性86株,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58阳性菌株。17株未检测到blaOXA-23阳性的菌株中有11株对亚胺培南敏感,其中11株中有4株未检测到ISAba1。转化阳性菌株pET28b(+)-blaOXA-23、pET28b(+)-ISAba1、pET28b(+)-ISAba1-blaOXA-23和转化子[pET28b(+)]对亚胺培南MIC值分别为4.00、1.00、64.00和0.12μg/mL;对美罗培南MIC值分别为4.00、0.50、16.00和0.03μg/mL。结果显示ISAba1对blaOXA-23基因的表达有影响。结论该院Ab流行以blaOXA-23和blaOXA-51为主。ISAba1对blaOXA-23的高表达可能是Ab对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的主要原因。

耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌碳青霉烯酶基因型及插入序列ISAba1研究

目的了解耐碳青霉烯类药物鲍氏不动杆菌的临床分布及耐药特征,探讨插入序列ISAba1和碳青霉烯酶与其耐药的关系。方法收集270株耐碳青霉烯类药物的鲍氏不动杆菌,K-B法检测菌株的药物敏感性;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;双纸片协同试验检测金属酶;多重PCR检测OXA-51、OXA-23、OXA-58、OXA-24、IMP、VIM、SIM,PCR检测ISAbal-OXA-23、ISAbal-OXA-51基因并进行测序分析;采用WHONET 5.6软件对菌株药敏结果进行统计分析。结果在检测的18种药物中,14种药物耐药率超过90.0%,哌拉西林耐药率最高为100.0%,头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低为48.9%;改良Hodge试验阳性156株,阳性率57.8%;金属酶表型检测均为阴性;270株菌均检测到了OXA-51基因,267株菌检测到OXA-23基因,1株检测到OXA-58基因,未检测到OXA-24、IMP、VIM、SIM基因;267株菌的OXA-23基因上游均检测到插入序列ISAbal,所有OXA-51基因上游均未检测到ISAbal。结论耐碳青霉烯类药物鲍氏不动杆菌耐药十分严重;OXA-51和OXA-23型碳青霉烯酶是本地区鲍氏不动杆菌的主要碳青霉烯酶;ISAba1常在OXA-23基因上游出现,ISAbalOXA-23是鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制。

多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因及插入序列ISAba1的检测

检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性,了解多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因的流行特征,探究插入序列ISAba1与其耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法检测83株多重耐药鲍曼不动杆菌的药物敏感性;采用PCR检测β-内酰胺酶基因及ISAba1-OXA-23-like、ISAba1-OXA-51-like、ISAba1-ADC的基因连锁。83株多重耐药鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的耐药率非常高。β-内酰胺酶基因TEM、SHV、NDM-1、ADC、DHA、OXA-23-like、OXA-51-like、OXA-58-like,检出率分别为83.1%(69株),91.6%(76株),2.4%(2株),100%(83株),1.2%(1株),95.2%(79株),100%(83株),4.8%(4株);ISAba1-OXA-23-like,ISAba1-OXA-51-like,ISAba1-ADC的连锁检出率分别为92.8%(77株),22.9%(19株),80.7%(67株)。多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药十分严重,携带多种β-内酰胺酶及插入序列ISAba1是本组测试菌耐药的主要原因。

鲍曼不动杆菌的耐药率变迁及CRAB耐药机制研究

目的分析南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌的耐药率变迁,并研究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant acinetobacter baumannii,CRAB)的耐药机制,为临床抗生素的使用提供依据。方法采用VITEK-2-COMPACT全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏测定,分析2010年及2014年南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药分布;同时,选取临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究,应用多重聚合酶链反应(PCR)扩增IMP、VIM、OXA-23、0XA-24、0XA-51、OXA-58、IsAba1-blaoxa-23基因,明确该院鲍曼不动杆菌中主要碳青霉烯酶基因表达及其与插入序列IsAba1的关系。结果与2010年相比,2014年检出的鲍曼不动杆菌对大部分临床常用抗生素的耐药率均有上升趋势(除外左氧氟沙星及复方新诺明);随机选取临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌70株和1株对碳青霉烯类敏感的敏感株参照株(carbapenemase sensitive acinetobacter baumannii,CSAB)共71株,用7对特异性引物对70株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌和1株敏感对照株进行PCR扩增检测显示,70株CRAB及1株敏感菌株中均携带有OXA-51,而仅在CRAB中检出OXA-23、IsAba1-blaOXA-23基因,敏感对照株中未检出该两个基因表达;OXA-58基因在6株CRAB中有表达,均未检出VIM,IMP,OXA-24基因。结论南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药性有上升趋势,需进一步加强合理使用抗生素,同时耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要耐药基因为bla OXA-23和bla OXA-51,前者可能与bla OXA-23上游存在插入序列IsAba1有关,后者则可能与其上游存在强启动子导致高表达有关,而CRAB耐药与金属酶、OXA-24、OXA-58基因无明显相关性。

嗜麦芽窄食单胞菌整合子I和ISCR1研究及ERIC-PCR基因分型

目的了解临床分离嗜麦芽窄食单胞菌的整合子I和ISCR1的分布情况及其基因型。方法分离临床85株嗜麦芽窄食单胞菌,用WHONET5.4分析菌株药敏情况,采用ERIC-PCR方法进行基因分型。采用PCR检测整合酶I、整合子I、ISCR1以及ISCR1携带的耐药基因。结果嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南、氨曲南、庆大霉素、阿米卡星高度耐药,整合子I阳性菌株和整合子I阴性菌株对复方新诺明耐药性差异有统计学意义。85株嗜麦芽窄食单胞菌12株整合酶阳性,11株整合子I阳性,2株ISCR1和ISCRI携带的耐药基因阳性,ERIC-PCR分为75个基因型。结论整合子I在嗜麦芽窄食假单胞菌中介导复方新诺明耐药性方面有重要作用,ERIC-PCR是研究临床分离嗜麦芽窄食假单胞基因分型的有效方法之一。

ICU患者感染泛耐药鲍氏不动杆菌携带OXA酶与AmpC酶的研究

目的了解ICU患者感染泛耐药鲍氏不动杆菌携带碳青霉烯酶基因、头孢菌素酶(AmpC酶)基因,从而分析其耐药机制。方法常规细菌培养方法分离细菌,用VITEK-2全自动微生物鉴定/药敏测试系统进行菌种鉴定及体外敏感测定;采用多重PCR检测25株鲍氏不动杆菌携带的碳青霉烯酶、AmpC酶相关耐药基因(16S rRNA、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、ADC、DHA、ISAba1),并对耐药基因扩增的阳性产物进行DNA序列分析。结果 ICU患者感染泛耐药鲍氏不动杆菌均携带OXA-23、OXA-51、ADC基因,21株携带插入序列ISAba1;DNA序列分析结果显示,OXA-23、OXA-51、ADC分别与NCBI的序列同源性均为99.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶可能是ICU患者感染鲍氏不动杆菌对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的主要原因,且为同一克隆株传播。