基于环境DNA的进口凡纳滨对虾携带水传播虾肝肠胞虫风险评估

【目的】基于环境DNA(eDNA)分析进口凡纳滨对虾携带水传播和运输虾肝肠胞虫(EHP)的风险性,为环境水中疫病监测和风险评估提供参考依据。【方法】取60批进口亲虾携带水用0.45μm硝酸纤维素膜过滤并提取eDNA,挑取10个携带水样滤膜eDNA用于凡纳滨对虾物种特异性鉴定,采用实时荧光定量PCR对所有携带水样滤膜进行EHP检测;同时以EHP阳性进口亲虾携带水开展人工感染试验,感染10 d后分别取养殖水样及虾体进行EHP检测;对进口亲虾携带水EHP阳性滤膜进行宏基因组测序分析,采用Krona对物种注释结果进行可视化展示,并将宏基因组测序分析结果与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对分析。【结果】进口亲虾携带水检测结果显示,成功从10个携带水滤膜eDNA扩增出凡纳滨对虾347 bp的特异目的片段,与原始序列片段的相似性达100%;在60批进口亲虾携带水样品中有2批携带水呈EHP阳性。EHP阳性进口亲虾携带水能成功感染虾苗组,且在虾苗肝胰腺组织分离获得成熟的EHP孢子,但亲虾组的虾体EHP检测呈阴性。宏基因组测序得到EHP的物种相对丰度值占真核动物物种的0.7%;与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对,结果获得213个同源EHP氨基酸序列;从进口亲虾携带水样品中分离鉴定获得的EHP与已报道物种黄道蟹肠孢虫(Enterospora canceri)和毕氏肠胞虫(Enterocytozoon bieneusi)的亲缘关系较近,对应的氨基酸序列相似性为别为83%和81%。【结论】进口凡纳滨对虾亲虾携带水具有传播EHP的可能性,即仅针对亲虾虾体进行EHP检测具有不完全性。eDNA检测可用来补充传统的虾体疫病监测方法,作为水环境疫病检测和风险评估的重要手段。

环境DNA方法对进口亲虾携带水中宿主物种的鉴定

为深入了解进口亲虾携带水中物种情况,本试验设计凡纳滨对虾物种特异性引物,采用环境DNA(eDNA)方法对境外进口亲虾携带水进行凡纳滨对虾物种鉴定,分析不同过滤膜、不同样本体积对于获取eDNA浓度的影响;对比不同来源水样、不同过滤膜和样品取样时间等因素对水样中凡纳滨对虾物种鉴定的影响;用宏基因组测序方法对水过滤膜eDNA进行测序分析。结果显示,本试验所设计的凡纳滨对虾物种特异性引物特异性好、灵敏度高,可以有效地从虾体和水中进行凡纳滨对虾物种鉴定;硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜均有不同的过滤优势,水样品体积增加,得到的eDNA浓度也随之增加;虾体生存时间、样品取样时间对于宿主物种鉴定均会产生重要影响;宏基因组测序所得的对虾属序列中,凡纳滨对虾的物种序列占40%,物种丰度占比最高。结果表明,eDNA检测方法具有较好的灵敏性和特异性,可以作为监测水生动物携带水外来物种入侵的一个有效手段。

醋酸异丙酯与常用水携带剂的比较

维纶生产过程中会产生大量稀醋酸;乙醛氧化法生产醋酐过程中会生成水,如与醋酐发生二次反应得到的是醋酸。维纶生产中稀醋酸的提浓再使用和醋酐生产中水的移去,都存在必不可少的脱水环节,可见水携带剂的选择十分重要。