细菌分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应用于健康人群脑膜炎奈瑟菌携带率研究

目的了解河北省部分地区健康人群脑膜炎奈瑟菌(Nm)带菌状况,评价实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)作为菌株分离培养法的补充在健康人群带菌调查中的应用价值。方法按年龄分层整群随机抽取577人采集咽拭子,采用Nm分离培养和FQ-PCR法同时检测,并使用血清学和分子生物学方法分群。结果分离到18株Nm菌株,总阳性率3.12%,其中不可分群最多(9株),其次为B群(3株)、W135群(3株)、X群(2株)、C群(1株)。FQ-PCR检测阳性样本46份,总阳性率7.97%,其中B群最多(13份),其次为W135群(12份)、不可分群(11份)、X群(7份)、C群(3份)。结论细菌培养和FQ-PCR均提示这些地区健康人群携带Nm血清群多样化。FQ-PCR检测方法在发现病原体及分群方面比传统菌株分离培养方法都有显著提升,可作为传统方法的有力补充。

金氏金杆菌特异性靶基因的选择及健康人群带菌率调查

目的对现有金氏金杆菌特异性PCR检测的相关靶基因进行特异性分析,选择适宜检测方法进行国内健康人群带菌率调查。方法利用生物信息学技术比较美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中已公布的金氏金杆菌16S rDNA、groEL、rtxA基因以及其他近缘基因序列,探讨3种靶基因在金氏金杆菌中的保守性。对所选择的金氏金杆菌采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法进行特异性、敏感性、稳定性等验证。应用已建立的方法对513份咽拭子样品进行检测。结果金氏金杆菌rtxA仅与牛莫拉菌近缘基因有72%相似度,金氏金杆菌不同菌株间相似度均达99%以上,rtxA基因保守性和特异性均优于16S rDNA与groEL基因,理论上更适合金氏金杆菌检测。基于rtxA基因的金氏金杆菌real-time PCR检测方法敏感性好,最低检测下限1 copies/μl,可用于金氏金杆菌检测。513份咽拭子,共检出阳性标本107份,阳性率为20.86%。结论 rtxA基因在金氏金杆菌中高度保守,可作为核酸检测的靶基因。基于rtxA的real-time PCR检测显示金氏金杆菌在我国健康人群中存在较高携带率且具有一定的年龄分布趋势。

新生儿耳聋易感基因携带状况调查与结果分析

通过对大理地区新生儿耳聋易感基因进行筛查分析,了解本地区新生儿人群耳聋基因携带率,为实现儿童遗传性耳聋的早发现、早诊断、早干预及早预防提供参考依据。方法 对2018年7月-2021年10月在我院分娩出生的新生儿,通过采集足跟血干血斑或静脉全血进行DNA提取,采用PCR扩增及导流杂交技术,检测中国人常见的非综合征型遗传性耳聋相关4个目的基因GJB2、SLC26A4(PDS)、线粒体DNA、GJB3中13个突变点,对检测结果进行分析统计。结果 本地区新生儿耳聋易感基因携带率为4.31%(58/1344),其中:先天性遗传性耳聋基因235杂合突变和迟发型耳聋的IVS7-2杂合突变发生率较高。先天性遗传性耳聋基因235杂合突变在正常人群耳聋易感基因中携带率为:1.26%(17/1344),占突变基因发生率的:29.3%.(17/58);迟发型耳聋的IVS7-2杂合突变在正常人群耳聋易感基因中携带率为:0.82%(11/1344),占突变基因发生率的:18.97%(11/58)。结论 本地区耳聋易感基因突变发生率在新生儿中占有较高比例,其中主要以GJB2、SLC26A4(PDS)、线粒体DNA三大类基因位点突变为主,耳聋基因筛查是发现先天性耳聋减少耳聋性残疾、实现疾病群体预防、早诊断、早干预、早治疗的重要手段。