血红蛋白交联条件优化及其携氧性能

纯化牛血获得的高纯度血红蛋白,在不同条件下进行戊二醛交联反应得到聚合牛血红蛋白,应用SDS-PAGE对其分子量分布进行分析比较。利用葡萄糖-葡萄糖氧化酶系统和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统,研究氧化应激状态下过氧化氢和超氧化物对血红蛋白携氧性能的影响。结果表明,戊二醛交联血红蛋白反应的最佳条件为:溶液总体系5 m L、血红蛋白质量浓度82 g/L、磷酸钾缓冲液(p H=7.4)的浓度为0.1 mol/L、0.47 mol/L的赖氨酸0.2 m L、0.25 mol/L的冷戊二醛1.2 m L及在4℃下150 r/min摇荡24 h;葡萄糖-葡萄糖氧化酶和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶的存在会使血红蛋白被氧化,体系中存在抗氧化剂超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT),会有效减弱血红蛋白氧化程度,提高其携氧性能。

反应条件对DBBF修饰猪血红蛋白性能的影响

猪血红蛋白在脱氧条件下经双(3,5-二溴水杨酸)延胡索酸酯(DBBF)修饰,其携氧能力得到改善,氧合曲线较未经修饰血红蛋白右移,半饱和氧分压(P50值)为3.1kPa,希尔系数值为2.2,两者都接近人全血值;修饰过程中别构效应调节剂对修饰产物携氧性能影响很大,在反应混合物中加入5.0mmol/L六磷酸肌醇,产物的P50明显增加.DBBF与血红蛋白的量比为2:1,反应时间2h时,产物的P50和希尔系数均接近人体生理指标.电泳图谱分析表明,无基质猪血红蛋白可完全解聚为单体,只在相对分子质量为15×103处出现条带,而DBBF修饰产物分别在相对分子质量为15×103和31×103处同现条带,提示DBBF对猪血红蛋白的两个亚基进行了分子内共价交联.