禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究

采用PCR法检测强毒力岛主要结构基因irp1、irp2、fyuA在禽致病性大肠杆菌中的分布;铬苯胺醇法检测铁载体的合成;SDS-PAGE法检测耶尔森菌摄铁蛋白HMWP1和HMWP2的表达,以半数致死量试验测定禽致病性大肠杆菌致病性与强毒力岛摄铁功能的关系。结果表明,7株禽致病性大肠杆菌强毒力岛irp1、irp2和fyuA基因的检出率为100%;铬苯胺醇平板上都能产生橙色透明晕圈;缺铁条件下,能够表达与耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2且半数致死量试验验证禽致病性大肠杆菌的毒力与强毒力岛摄铁功能呈正相关。证实禽致病性大肠杆菌中强毒力岛的摄铁功能与其致病性有密切的联系。

云南撒坝猪EPEC HPI irp2缺失株的摄铁能力研究

【目的】本研究探讨了云南撒坝猪EPEC HPI毒力岛的摄铁功能与致病性之间的关系。【方法】本试验通过摄铁实验对5株肠致病性E.coli(A-E)和CVCC1565铁载体的合成和在不同2,2’-联吡啶含量下的最低生长抑制浓度及对数期生长速率进行了测定,同时利用已构建的E.coli irp2基因缺失株和亲本株进行对比,检测HMWP2蛋白的表达,并通过半数致死量实验比较两者之间的毒力。【结果】除E.coli(D)外,其余菌株的2,2’-联吡啶最低生长抑制浓度为0.6 m M;亲本株能够表达HMWP2蛋白,irp2缺失株不表达该蛋白;CAS固体培养基中菌株能产生橘黄色的透明晕圈;当2,2’-联吡啶浓度高于0.2 m M时,亲本株的生长率高于irp2缺失株;亲本株的LD50(8.73×10~7cfu/m L)低于缺失株(9.95×10~7cfu/m L)。【结论】云南撒坝猪EPEC HPI铁摄取功能和致病性之间存在着一定关系。

肠聚集性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的结构和功能

目的:通过了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌中的结构和摄铁功能,从而进一步研究肠聚集性大肠杆菌的毒力进化及其致病机制。方法:实验于2005-08/2006-09在南方医科大学公共卫生与热带医学学院完成。6株肠聚集性大肠杆菌采自某部队腹泻患者粪便,并经血清学鉴定。采用聚合酶链反应方法观察肠聚集性大肠杆菌中强毒力岛irp2和fyua阳性检出率和强毒力岛在阳性菌株中的定位鉴定。原位杂交方法进行肠聚集性大肠杆菌中强毒力岛irp2和fyua基因序列分析。SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳方法观察小肠结肠炎耶尔森菌WA和毒力岛阳性的肠聚集性大肠杆菌HMWP1和HMWP2的表达。结果:6株肠聚集性大肠杆菌有5株检出了强毒力岛,检出率达到83.33%,而且这些阳性菌株中的毒力岛都位于天冬氨酸tRNA位点;在缺铁条件下,肠聚集性大肠杆菌能够表达和小肠结肠炎耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2。结论:小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌中具有阳性率较高的分布,并具有相同的摄铁功能,很可能肠聚集性大肠杆菌和小肠结肠炎耶尔森菌中的强毒力岛有相同的转移机制。

EAggEC中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛结构和功能研究

目的了解小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,Yen)强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌(EAggEC)中的结构和摄铁功能,为进一步研究细菌毒力的进化奠定理论基础。方法PCR扩增、原位杂交及SDS-PAGE。结果在检测的6株EAggEC有5株检出了毒力岛,而且这些阳性菌株中的毒力岛都位于asntRNA(天门冬氨酸tRNA)位点;在缺铁条件下,EAggEC能够表达和耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2。结论小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌中有阳性率较高的分布,并具有相同的摄铁功能,很可能EAggEC和耶尔森菌中的强毒力岛有相同的转移机制。