一株猪源摩氏摩根菌的分离鉴定与药物敏感性分析

摩氏摩根菌是一种可导致多种疾病的条件性病原菌,已成为全球范围内的一种重要新发病原菌。为了解猪源摩氏摩根菌的药物敏感性和致病性,从河南省某猪场病死猪肠道中分离得到一株疑似致病菌,对其进行革兰氏染色、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定和16S rRNA基因同源性分析,然后测定14种药物对该菌株的最小抑菌浓度,并进行小鼠感染试验。结果显示,该菌为革兰氏阴性短杆菌,鉴定为摩氏摩根菌,命名为A185。药敏试验结果表明,该菌对阿莫西林、美罗培南、替加环素、多黏菌素、多西环素、头孢西丁耐药;对环丙沙星、庆大霉素中度敏感;对磷霉素、头孢他啶敏感。小鼠感染试验结果显示,感染摩氏摩根菌的昆明鼠表现为肝脏、肠道和肺脏不同程度出血。以上结果表明,猪源摩氏摩根菌A185具有多重耐药性和较强的致病性。

社区获得性摩氏摩根菌肺脓肿伴肺炎1例并文献复习

摩根菌属只有摩氏摩根菌一个种,是一种条件致病菌^([1])。该菌在自然界广泛分布,常存在于人和动物的肠道内,在致病条件下可导致机体免疫力低下,发生泌尿系统、切口感染,还可导致腹泻或食物中毒。近年来已有摩根菌引起肝脓肿^([2])、腹膜炎^([3])、妊娠期前庭大脓肿^([4])等感染的临床报道。现将慈溪市龙山医院确诊的1例摩氏摩根菌肺部社区获得性感染病例报道如下,并复习相关文献,提高临床医生对该致病菌的认识。

华南虎子宫内膜炎摩氏摩根菌分离鉴定及生物学特性研究

【目的】对杭州野生动物世界1例成年雌性华南虎(Panthera tigris amoyensis)子宫内膜炎病例的病原进行分离鉴定及生物学特性研究。【方法】无菌采集患虎子宫分泌物进行细菌分离培养、形态观察、梅里埃Vitek 2 COMPACT系统的生化鉴定以及16S rDNA序列分析,采用小鼠腹腔接种模型检测临床分离株致病性,并通过药敏纸片扩散法K-B鉴定该菌对50种药物的敏感性,采用筛选的敏感药物联合对症治疗,持续观察疾病是否复发及其产仔情况。【结果】从患虎子宫分泌物中获得1株革兰阴性短棒状杆菌;梅里埃Vitek 2 COMPACT系统革兰阴性卡鉴定结果显示,该临床分离株为摩氏摩根菌,菌株可发酵葡萄糖,分解甘露糖、D-葡萄糖,且尿素酶、磷酸酶、鸟氨酸脱羧酶、γ-谷氨酰转移酶反应呈阳性;序列比对分析发现,16S rDNA序列与摩氏摩根菌的相似性最高,达99%以上,进一步表明该菌为摩氏摩根菌,并命名为HNH2019;药敏结果显示,该菌多重耐药,对多黏菌素B、丁胺卡那、复方新诺明、麦迪霉素、四环素、头孢哌酮等33种药物呈不同程度的耐药,对头孢噻肟、头孢曲松和头孢西丁等6种药物中度敏感,对妥布霉素、洛美沙星、依诺沙星和氟苯尼考等11种药物敏感;小鼠致病性分析结果显示,该分离株腹腔接种ICR小鼠的半数致死量为1×107.5 CFU;采用敏感药物治疗后,该虎痊愈且连续3年未复发,截至2022年9月,该母虎已经多次怀孕并合计生产了5仔。【结论】本研究分离鉴定到1株华南虎源多重耐药致病性摩氏摩根菌,经筛选的敏感药物治疗,该虎子宫内膜炎痊愈未复发,研究结果为同类疫病防治提供了病例参考和数据支持,提示应重视摩氏摩根菌对动物的潜在危害。

鳄蜥源葡萄牙柠檬酸杆菌和摩氏摩根菌的分离鉴定及药敏分析

为确定2021年7月广西大桂山鳄蜥国家级自然保护区北娄管理站患病鳄蜥(Shinisaurus crocodilurus)的病原体及病原特征,从鳄蜥尸体肺和肝中分别分离得到1株细菌,通过形态学观察、生理生化试验、分子生物学鉴定、药敏试验和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)方法分析,确定肺中的分离菌株BL1682F为葡萄牙柠檬酸杆菌(Citrobacter portucalensis),肝中的分离菌株BL1682G为摩氏摩根菌(Morganella morganii)。药敏试验结果表明:分离菌株BL1682F对庆大霉素、阿米卡星、头孢呋辛、头孢吡肟、环丙沙星、磺胺甲唑、氨曲南和四环素敏感,对氨苄西林耐药;分离菌株BL1682G对庆大霉素、哌拉西林、头孢曲松、头孢吡肟、磺胺甲唑和氨曲南敏感,对头孢呋辛和四环素耐药。多位点序列分型结果鉴定分离菌株BL1682F为新的序列型(sequence type,ST),与标准菌株ST-4和ST-267亲缘关系最近。研究结果可为鳄蜥疾病的预防和分子流行病学的研究提供参考。

摩氏摩根菌研究进展

摩氏摩根菌是人畜共患的条件致病菌,近年来,由摩氏摩根菌引起的人和多种动物的疾病多有报道,严重者甚至引起包括人在内的动物死亡。本文围绕摩氏摩根菌的病原学、流行情况、临床症状、病理变化、病原检测、耐药情况方面进行综述,旨在为摩氏摩根菌的防控提供科学支持。

鸭源奇异变形杆菌和摩氏摩根菌的分离鉴定、NDM耐药基因检测及中药体外抑菌试验

[目的]确定引起广东省某鸭场鸭群发病的细菌性病原,调查分离菌株对抗菌药物的敏感性及NDM耐药基因携带情况,并筛选出针对分离菌株具有较好体外抑制作用的单味中药。[方法]采集发病鸭只的肝脏、脾脏等病料样本进行细菌分离培养,采用16S rDNA序列PCR扩增及测序比对方法确定分离菌株的种属,利用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌株对13种抗菌药物的敏感性,应用PCR法检测10种NDM耐药基因在分离菌株中的分布情况,采用肉汤二倍稀释法测定14种单味中药对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]经革兰染色镜检、生化鉴定及16S rDNA序列分析,从发病鸭病料中分离、鉴定出1株奇异变形杆菌(SK1株)和1株摩氏摩根菌(SK2株)。SK1株和SK2株均对新霉素、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮敏感,对多西环素、复方新诺明、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B耐药。SK1株10种NDM耐药基因均未检出,SK2株携带blaNDM-1基因,其他9种NDM耐药基因未检出。博落回对SK1株的抑菌效果最好,MIC为3.906 mg/mL;连翘对SK2株的抑菌效果最好,MIC为3.906 mg/mL。[结论]引起该鸭场鸭群发病的主要病原菌为奇异变形杆菌和摩氏摩根菌,可使用新霉素、头孢菌素类抗菌药物及中药博落回、连翘对患病鸭只进行治疗。

黄喉拟水龟摩氏摩根菌的分离鉴定及药敏试验

黄喉拟水龟(Mauremys mutica),俗称石龟、石金钱龟、黄板龟等,为龟科拟水龟属,主要分布于中国江苏、安徽、福建以及越南、日本等。黄喉拟水龟具有食用、药用和观赏价值,近年来野生资源日趋减少,人工养殖发展迅速。细菌性病原感染是黄喉拟水龟养殖过程中常见疾病,目前已报道黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)[1]、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)[2]、摩氏摩根菌(Morganella morganii)[3]。

黄喉拟水龟摩氏摩根菌的分离鉴定及系统发育分析

从广西某黄喉拟水龟（Mauremys muticaCantor）养殖场发病的黄喉拟水龟的肝、肺分离到一致病性的菌株（HX081027）,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌的形态、生理生化进行分析,试验结果与报道的摩氏摩根菌一致,表现为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌,无荚膜及芽孢,葡萄糖产酸产气,接触酶、脲酶、苯丙氨酸脱氨酶和鸟氨酸脱羧酶阳性,氧化酶、脂酶、DNA酶和赖氨酸脱羧酶阴性,甲基红阳性,VP反应阴性,MR阳性等特征。采用扩增细菌16S rDNA的通用引物对该菌的16S rDNA基因进行PCR扩增、克隆测序,得到1条长度为1506bp的核苷酸序列（GenBank登录号为FJ858185）。以该菌16S rDNA序列和GenBank数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列进行同源性比对分析和构建系统发育树,结果显示分离菌HX081027与摩氏摩根菌属内相关菌株的同源性在98.8%~99.6%,且在系统发育树上与来源于鱼类的M.morganiiJCM1672聚为一支,结合形态及生理生化特点将其确定为摩氏摩根菌（Morganella morganii）。

鳖源摩氏摩根菌分离鉴定及药敏特性分析

【目的】从患中华鳖出血性肠道坏死症病鳖体内分离病原菌并进行鉴定与药敏特性分析,为有效防控中华鳖出血性肠道坏死症提供参考依据。【方法】在无菌条件下分别从病鳖腮腺、肠道、肝脏、精巢及卵巢等病变器官中分离病原菌,然后进行人工回归感染试验、生理生化与分子鉴定及系统发育树分析,并采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。【结果】从患中华鳖出血性肠道坏死症的病鳖体内分离出5株菌株JZ-01、JZ-02、JZ-03、JZ-04、JZ-05,人工回归感染试验结果表明这5株菌株对中华鳖的致死率均达100.00%。5株菌株均为革兰氏阴性菌,无芽孢,在普通营养琼脂培养基上生长呈灰白色、边缘整齐、半透明、湿润的菌落;通过梅里埃VITEK-2全自动微生物鉴定仪对5株菌株进行生理生化鉴定,证实均为摩氏摩根菌(Morganella morganii),且5株菌株(GenBank登录号分别为KP054384、KP054385、KP054386、KP054387和KP054388)与摩氏摩根菌菌株(GenBank登录号JF508858.1)的亲缘关系最近。5株菌株对复方新诺明、多粘霉素B、诺氟沙星、强力霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考等6种抗生素高度敏感。【结论】摩氏摩根菌能引起中华鳖出血性肠道坏死症,对中华鳖具有很强的致病性,生产中可选用复方新诺明、多粘霉素B、诺氟沙星、强力霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考等药物进行防治。

乌鳢(Channa argus)源摩氏摩根菌(Morganella morganii)的分离、鉴定及药敏特性

对患病乌鳢(Channa argus)进行病原分离、鉴定及药敏试验,为乌鳢病害防控提供参考。从江西南昌某养殖场发病的乌鳢肝、肾、脾和溃烂肌肉中分离到一株病原菌JX15,对JX15株进行形态学观察、理化特性测定及分子生物学方法鉴定,并对JX15株进行人工感染试验和药敏试验。理化特性测定和16S rRNA与gyr B[DNA促旋酶(gyrase)B亚基]基因序列分析表明,JX15株被鉴定为摩氏摩根菌。病理学和致病性试验显示,病鱼肝、肾、脾及溃烂皮肤肌肉等组织器官具有典型病理变化,人工感染的乌鳢出现与自然发病类似症状,且从发病乌鳢体内分离到与菌株JX15一致的菌株,可以断定菌株JX15是本次乌鳢发病的病原菌,其LD_(50)为3.4×10~5cfu·g^(-1)。JX15株对氟苯尼考、诺氟沙星及头孢噻肟等7种药物高度敏感,对呋喃唑酮、氯霉素、卡那霉素及链霉素4种药物中度敏感;对环丙沙星、苯唑西林及青霉素等11种药物耐药。本研究证明了江西南昌某养殖场的乌鳢溃烂病是由摩氏摩根菌感染所引起的,可选用氟苯尼考、头孢噻肟、新霉素、妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星等6种药物进行治疗。

临床分离耐药摩氏摩根菌的β-内酰胺酶表型和基因型分析

目的探讨临床分离耐药摩氏摩根菌3-87耐药的分子机制。方法采用常规琼脂二倍稀释法对摩氏摩根菌3-87进行15种抗菌药的M IC测定;超声破碎法提取β-内酰胺酶;并用n itrocefin做定性检测,用紫外分光光度计检测酶活性;超薄层等电聚焦测定β-内酰胺酶等电点和酶抑制实验;ESBL s表型鉴定;Am pC酶的检测;纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株;以摩氏摩根菌3-87质粒DNA为模板扩增blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因,以基因组DNA为模板扩增ampC结构基因;ampC结构基因扩增产物的DNA序列测定及同源性分析。结果摩氏摩根菌3-87对10种β-内酰胺类抗生素、2种氟喹诺酮类抗菌药耐药,对哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦、氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感。产酶活性为3727.5U的β-内酰胺酶。产生的pI7.3、8.2及9.6的三种β-内酰胺酶分别能被氯唑西林、克拉维酸、EDTA部分抑制。β-内酰胺酶表型鉴定试验结果显示菌株产ESBL s、Am pC酶及金属β-内酰胺酶三种β-内酰胺酶。blaCTX-M基因引物扩增出阳性扩增条带。ampC结构基因引物扩增阳性扩增带,对扩增产物进行序列分析与已报道的摩氏摩根菌ampC结构基因的核苷酸序列高度同源,推导的氨基酸序列发生了1个氨基酸残基的变异。结论临床分离耐药摩氏摩根菌3-87呈多重耐药,其对β-内酰胺类抗生素耐药的机制是产生了ESBL s、Am pC酶及金属β-内酰胺酶。

临床分离91株摩氏摩根菌的药敏分析

目的探讨摩根菌对抗菌药物的体外敏感性,为临床合理用药提供参考。方法对我院2002年1月到2005年6月临床分离的91株摩氏摩根菌的来源和药敏情况进行统计分析。结果多种临床标本中均可分离到摩根菌,其中较多来自痰液(37.4%)及分泌物标本(27.5%)。住院及门诊患者均可发生摩根菌感染,以老年科(15株,16.5%)、骨科(11株,12.1%)居多。所有摩氏摩根菌株对氨苄西林、头孢唑林、头孢噻吩均耐药,对氨苄西林/舒巴坦(77.8%)、头孢呋肟(87.2%)及复方磺胺甲唑(72.2%)耐药率也较高,而对哌拉西林/三唑巴坦、头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星的敏感性较好,敏感率分别为92.2%、85.7%、83.5%和94.5%。此外随年份增长摩根菌对各种抗生素的敏感性并无下降的趋势。结论在临床工作中应重视不常见致病菌引起的感染;哌拉西林/三唑巴坦、头孢吡肟、亚胺培南和阿米卡星等可作为临床治疗摩根菌感染的一线药物。

蛋源摩氏摩根菌分离、鉴定及遗传进化分析

本研究利用传统细菌鉴定方法、革兰氏阴性细菌生化鉴定系统及16SrDNA序列分析对分离自市售新鲜鸡蛋中的菌株进行形态学、培养特性及生化特性等生物学特性鉴定及遗传进化分析,结果表明分离株为摩氏摩根菌。药物敏感性试验结果表明,该菌株对痢特灵、利福平、四环素、磷霉素、多黏菌素B和阿奇霉素有耐药性,属于多重耐药菌株。序列分析结果显示,该分离菌株与目前已分离的其他食源性摩氏摩根菌菌株高度同源。

鲈鱼摩氏摩根菌的鉴定及药敏试验

从患病鲈鱼体内分离到1株优势菌LY2014,对其进行形态观察、生理生化试验、16SrDNA基因序列分析,同时采用Kriby-Bauer纸片扩散法进行耐药性分析。结果该菌为发酵型、具有动力的革兰阴性杆菌,根据生化试验结果初步确定该菌为摩氏摩根菌。以该菌的基因组为模板PCR扩增获得的16SrDNA序列长度为1 407bp(GenBank登入号为KJ830813)。该序列与GenBank数据库中摩氏摩根菌的16SrDNA基因序列相似性高达99%,系统进化树显示其与摩氏摩根菌亲缘关系最近,从而确定菌株LY2014为摩氏摩根菌。该菌株对磷霉素、菌必治和多黏霉素B高度敏感,对痢特灵、红霉素和诺氟沙星等5种药物中度敏感,对氨苄西林和氟苯尼考等11种药物耐药。

1株克氏原螯虾摩氏摩根菌的分离鉴定及联合药敏试验

从患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株病原菌,通过对其生理生化特征鉴定、16S rRNA序列分析和进化树构建对分离株进行了鉴定;测定了分离株对20种抗菌药物的敏感性及抗菌药物与天然化合物联用后的协同抑菌作用。结果发现,该菌株的生理生化特征与摩氏摩根菌基本一致,进一步通过测序和进化树分析发现该菌株与摩氏摩根菌的基因相似度达到99%以上,因此该菌株鉴定为摩氏摩根菌。药敏试验发现该菌株对恩诺沙星、氟苯尼考和新霉素等7种药物高度敏感,对卡那霉素中等敏感,对多西环素、链霉素和四环素等12种药物耐药。此外,联合抑菌试验发现多西环素与二氢辣椒碱联用后具有协同抑菌作用。以上研究表明,本次从克氏原螯虾肝胰腺中分离的细菌为耐药性摩氏摩根菌,可选用氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素或二氢辣椒碱和多西环素的复方制剂进行治疗。

摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素重组蛋白活性的初步鉴定

目的初步鉴定摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因重组蛋白的生物学活性。方法提取摩氏摩根菌细胞肽聚糖成分,采用酶谱电泳法、扩散法检测重组融合蛋白对细胞壁肽聚糖层的降解活性;采用纸片法检测重组蛋白对金黄色葡萄球的抑菌作用;测定重组蛋白与抗生素的协同抑菌作用。结果成功提取了摩氏摩根菌细胞壁肽聚糖,酶谱法、扩散法结果表明重组蛋白对摩氏摩根菌肽聚糖具有降解作用,纸片法结果表明重组蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长;当与新青霉素Ⅱ、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Car)3种抗生素共同作用时有协同抑菌作用,3种抗生素的MIC值分别由1.56、1.56、3.125μg/ml降为0.39、0.78、0.195μg/ml。结论重组融合蛋白可降解肽聚糖、抑制金黄色葡萄球菌生长活性,且与抗生素协同作用时可降低抗生素MIC值。

中华鳖(Pelodiscus sinensis)摩氏摩根菌(Morganella morganii)的鉴定及致病性研究

从3只患有头面部疖疮中华鳖(Pelodiscus sinensis)的肝脏、肾脏、头面部病灶干酪样组织,分离得到12株细菌。综合菌落形态观察、16S rRNA序列分析与生化特性分析方法,所有分离株均为摩氏摩根菌(Morganella morganii)。稚鳖和小鼠感染试验提示该菌具有较强的致病力,其对小鼠的半数致死量(LD50)为107.24。同时采用常规琼脂扩散(K-B)法进行8类14种常用药物的抗菌敏感性测定,结果表明,分离株对氨基糖苷类、β-内酰胺类、四环素类、林可酰胺类、多肽类、喹诺酮类、磺胺类等中的8种药物耐药,对氨曲南、氟苯尼考、头孢哌酮则较为敏感。本研究为中华鳖以头面部疖疮为主要临床特征的摩氏摩根菌病的首例报道,旨在为该病的确诊与防治提供科学依据和参考。

以“广谱耐药”的摩氏摩根菌为模式菌株的筛选模型的建立及应用

目的通过以"超广谱"、高水平耐药的摩氏摩根菌(Morganella morganii)KL-225为模式生物建立筛选模型。方法分别在培养基中加入青霉素、头孢吡肟、链霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、交沙霉素、杆菌肽、黏菌素、利福平、磺胺嘧啶等,以此作为耐药菌的耐药筛选指标,从养殖池塘水体和病死的鲍鱼体的菌群中筛选能够耐受上述药物的新型摩氏摩根菌。结果筛选到广谱耐药摩氏摩根菌,构建细胞水平的新型抗菌药物筛选模型,对本所重点实验室化合物库进行初筛及复筛得到阳性化合物H1,其对广谱耐药摩氏摩根菌KL-225和摩氏摩根标准菌的MIC值都是1.59μg/m L,检测了H1的抗菌谱尤其是阴性耐药抗菌谱,考察了H1的细胞毒作用。结论通过以"广谱耐药"的摩氏摩根菌为模式菌株建立的筛选模型可用于抗耐药菌药物的发现。

龟鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法建立

为建立龟源致病性鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法,应用鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因的特异性引物,对单重和双重PCR反应的退火温度、引物浓度、MgCl2浓度、dNTP浓度等进行优化。试验结果显示,鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因引物分别进行PCR扩增后,均获得特异性条带,与预期结果一致;rpoB和gyrB基因的上、下游引物各为0.3μmol/L,退火温度为59.3℃,dNTP浓度为0.5 mmol/L,MgCl2浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效果最佳;特异性试验结果显示,本方法仅对摩氏摩根菌和鲍曼不动杆菌有扩增,对其他病原菌如肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌及恶臭假单胞菌等无扩增;灵敏性结果表明,本方法对鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌最低检测质量浓度分别为4.12×10^-3 ng/μL和1.257×10^-3 ng/μL。通过对临床病料样本的检测分析证明,本方法与单重PCR检测结果一致。本试验所建立的针对两种病原菌检测的双重PCR方法特异性强、灵敏度高,可为龟鳖类鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌的鉴别诊断和临床调查提供帮助。