支原体巨噬细胞活化脂肽2诱导单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶1及其机制研究

目的：观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2， MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase，HO-1），并探讨其相应的调控机制，以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的MALP-2作用12 h， Western blot检测HO-1的表达；THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育，或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞，以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用；Western blot检测Akt磷酸化情况，并采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞，以证实PI3K参与HO-1表达。同时，分别采用EMSA和免疫荧光观察核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位，并采用Nrf2 siRNA干扰其表达后，Western blot检测HO-1表达。最后，采用siRNA干扰HO-1表达，或采用HO-1的激动剂钴原卟啉（ cobalt protoporphyrin ，CoPP）处理THP-1细胞，ELISA检测细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。结果 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1。且TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后，HO-1表达水平显著降低；此外，MALP-2能激活PI3K，PI3K抑制剂能抑制HO-1表达；MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位，PI3K抑制剂处理后，Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低。 RNA干扰Nrf2后，HO-1表达显著降低。沉默HO-1表达后，TNF-α和IL-1β分泌增高，而CoPP处理能进一步降低TNF-α和IL-1β水平。结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能受TLR2、6/PI3K/Nrf2通路调控。 HO-1的表达可在一定程度上负调控细胞因子过度分泌。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2经Btk/PI3K/Nrf2通路诱导单核细胞表达HO-1

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR检测HO-1 mRNA的表达,Western blot检测其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1细胞与不同浓度的Bruton’酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)抑制剂LFM-A13作用1 h,随后用MALP-2刺激12 h,Western blot观察其对HO-1表达以及Akt磷酸化的影响;分别采用EMSA和免疫荧光检测核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位,并观察PI3K抑制剂LY294002对Nrf2的激活和DNA结合活性的改变情况;siRNA干扰Nrf2表达,以证实其在HO-1表达中的作用;最后,采用LFM-A13和血红素处理THP-1细胞,MTT法检测细胞的存活率。结果 MALP-2处理可显著诱导THP-1细胞表达HO-1蛋白和mRNA,LFM-A13处理后,HO-1表达水平随其浓度的增高而降低;同时,LFM-A13也能抑制MALP-2诱导PI3K的激活(Akt磷酸化)。MALP-2能促进Nrf2的核转位并增强其DNA结合活性,而PI3K抑制剂LY294002处理后可抑制Nrf2的激活;RNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达显著降低;此外,LFM-A13也可降低血红素处理后THP-1细胞的存活率。而采用HO-1激动剂CoPP诱导后,THP-1细胞的存活率有所增高。结论 MALP-2通过Btk/PI3k/Nrf2诱导THP-1细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2经PI3K/Nrf2诱导单核细胞表达HO-1和NQO1

目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1（HO-1）和NAD（P）H：醌氧化还原酶-1（NQO1）表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验组.其中对照组加入等体积培养基,实验组根据不同的实验目的 加入不同浓度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 检测HO-1和NQO1表达以及Akt磷酸化水平.同时,采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,以证实PI3K参与HO-1表达.提取细胞核蛋白,凝胶迁移率实验和免疫荧光观察NF-E2相关因子2（Nrf2）的DNA结合活性和核转位情况,并采用特异性siRNA沉默Nrf2后,Western blot观察其对HO-1和NQO1表达的影响.结果 Western blot结果显示,MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的剂量依赖性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑制剂能抑制HO-1和NQO1的表达;凝胶迁移率实验和激光共聚焦结果显示,MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位,而PI3K抑制剂处理后,Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低.RNA干扰Nrf2后,HO-1和NQO1表达显著降低.结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1,其机制可能受PI3K/Nrf2调控.

支原体巨噬细胞活化脂肽2经MAPKs和Nrf2途径诱导人单核细胞血红素氧合酶－1产生

目的：探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（ MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（HO-1），并探讨其可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的，用不同浓度的MALP-2作用12 h，或一定浓度的MALP-2作用不同时间后，real-time PCR和Western blot分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达；比色法分析 HO-1酶活性情况；采用丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）特异性抑制剂（30μmol/L SB203580、PD98059和SP600125）预处理THP-1细胞30 min后加入5．0 ng/ml MALP-2共孵育细胞，Western blot检测HO-1的蛋白表达。提取MALP-2处理后的核蛋白及胞质蛋白，Western blot检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）在细胞核及胞质中的表达情况，并采用Nrf2 siRNA干扰Nrf2表达后，检测Nrf2和HO-1表达情况。结果 MALP-2能以浓度依赖性方式诱导人单核细胞系THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白质，同时，HO-1的酶活性也随着MALP-2浓度的递增而增强；30μmol/L MAPK特异性抑制剂SB203580、PD98059和SP600125处理THP-1细胞后，MALP-2诱导HO-1的表达量随之降低；5．0 ng/ml MALP-2能降低细胞质内Nrf2的表达水平，同时增加其细胞核内含量；且转染Nrf2 siRNA 后，HO-1的表达显著降低。结论 MALP-2诱导的HO-1表达受MAPK和Nrf2的调控。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2诱导人单核细胞分泌MMP-9

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对人单核细胞分泌基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法体外培养人单核细胞系THP-1,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞12-18 h,采用实施定量PCR检测MMP-9 m RNA的表达,荧光共振能量转移（FRET）检测MMP-9的酶活性变化,ELISA检测培养上清中MMP-9的含量。结果 THP-1细胞未刺激时,MMP-9的m RNA表达量、酶活性以及分泌水平极低。当给予0.1-5.0μg/mL MALP-2作用18 h后,MMP-9的分泌水平显著增高,细胞培养上清液中MMP-9的酶活性也明显增强。此外,5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞6 h后即可诱导MMP-9 m RNA表达,16 h后达到峰值。结论 MALP-2可诱导人单核细胞表达MMP-9,这可能是支原体感染早期重要的致病因素。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2的研究进展

支原体巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)是发酵支原体细胞膜上的一种脂多肽,能特异性识别靶细胞Toll样受体,产生免疫活性。MALP-2除了对机体和细胞有固有的促炎作用以外,还又具有对炎症的负调控作用,对机体的免疫系统也有一定的调节作用。就MALP-2的结构特征及其在疾病的发生、发展、治疗和预防等相关免疫学研究进展做一综述。

支原体脂肽经TLR2,6/c-Src/PI3K通路诱导单核细胞表达血红素氧合酶-1

目的:观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(Macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(Hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法:体外培养THP-1细胞,用不同浓度的MALP-2作用12 h,Western blot检测HO-1的表达。THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育,或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞,以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用;Western blot检测c-Src和Akt磷酸化情况,同时,分别采用c-Src siRNA或PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察c-Src及PI3K在HO-1表达中的作用。结果:MALP-2处理后可磷酸化c-Src,而TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,c-Src磷酸化水平显著降低;同时,c-Src siRNA可降低Akt磷酸化水平,而PI3K抑制剂LY294002处理后可明显降低HO-1的表达。结论:MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能受TLR2,6/c-Src/PI3K通路调控。

支原体脂肽经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）诱导人气道上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的分子机制。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/m L MALP-2刺激NCI-H292细胞24 h,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养上清中MUC5AC和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的含量;Western blot检测表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化水平。同时采用EGFR抑制剂AG-1478或MMP-9抑制剂（MMP-9 Inhibitor I）处理细胞,观察其对MUC5AC分泌的影响。结果 NCI-H 292细胞未刺激时,MUC 5 AC以及MMP-9分泌水平极低。当给予0.1~5μg/m L MALP-2作用18 h后,MUC 5 AC的分泌水平显著增高。此外,5μg/m L MALP-2作用NCI-H 292细胞1 h后可诱导EGFR磷酸化。采用AG-1478预处理细胞1 h后,MMP-9及MUC 5 AC分泌水平明显减少,同时,采用10 nmol/L MMP-9抑制剂处理后也能下调MUC 5 AC水平。结论支原体MALP-2经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC。

发酵支原体MALP-2与关节炎相关性的研究进展

相对分子质量为2×103活化巨噬细胞的脂肽(MALP-2)是新近发现的发酵支原体细胞膜上的一种脂多肽,N端上连接着二软脂酰基,可以识别靶细胞上特异受体,产生多种免疫活性.体内、外实验均证实MALP-2可引起单核/巨噬细胞分泌多种细胞因子和趋化因子,并有促进破骨细胞的骨吸收作用.近几年,发酵支原体被认为可能是引起类风湿关节炎发病的感染因素之一,MLAP-2是其细胞膜上一种重要的膜结构物质.本文综述MALP-2与关节炎症有关的免疫学研究进展.

发酵支原体MALP-2生物学作用研究进展

巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)是发酵支原体(Mf)上极具代表性的外膜脂肽,N端为特殊的二酰化半胱氨酸残基结构。MALP-2是一把"双刃剑",在致炎与抗炎、细胞凋亡与抗凋亡、免疫佐剂、生物协同与抑制、血管损伤和血管修复等方面发挥重要作用。因此,了解MALP-2复杂的生物学作用能为理解Mf的致病机制及其临床治疗方案提供依据,同时也为MALP-2的临床应用提供理论基础。

医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学)

0031537 有区别的翻译后过程可使主要的表面脂蛋白有种属间的变化和使巨噬细胞活化发酵支原体的脂质肽/Calcutt M J//Infect Immun.-1999,67(2).