支原体种属特异性PCR引物的设计及对细胞培养物支原体的检测

目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.

肺炎支原体特异性IgA抗体检测的临床意义

为探讨肺炎支原体特异性IgA抗体在肺炎支原体感染患儿中的临床意义 ,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对296例临床疑诊肺炎支原体肺炎患儿进行特异性抗体MP -IgA检测 ,并与同时采用日本富士明胶颗粒凝集法测定的特异性MP -IgM抗体比较 ;对其中57例进行了为时2月～5.5月随访。结果显示 ,MP -IgA与MP -IgM测定结果高度一致 ,其阳性率随MP -IgM滴度上升及病程延长而增加 ,而MP -IgM滴度大部分在感染后3个月左右下降 ,部分持续时间较久 ;在呼吸道感染患儿中 ,MP -IgA阳性率增加明显 ,而MP -IgM下降速度显著减慢。结果表明 :MP特异抗体IgA测定对提高MP感染诊断的敏感性。

肺炎支原体肺炎和哮喘患儿肺炎支原体特异性IgE检测的分析

通过免疫手段 (SDS PAGE及Westernblot)分析MP引起变态反应的抗原成分 ,比较有哮喘史及无特应症的MP感染者特异性IgE阳性率 ,并探讨与MP特异性IgE产生的有关因素。MP IgM阳性的支气管肺炎患儿 35例 (平均年龄 6 0± 3 4岁 )及支气管哮喘患儿 32例 (平均年龄 6 7± 3 3岁 ) ,MP IgM、IgA均为阴性的正常健康者 2 7例 (平均年龄 7 0± 3 6岁 )作为对照组 ;采用免疫印迹技术观察上述各组待测血清针对所分离MPFH株菌体粉碎后蛋白成分的杂交条带 ,并对其出现频度进行统计分析 ;同时应用ELISA方法检测血清总IgE。结果SDS PAGE显示MP蛋白成分有十几条。与IgE反应的抗原多肽的相对分子质量为 2 16 0 0 0、 2 0 5 0 0 0、 170 0 0 0、 6 80 0 0、 5 6 0 0 0 ,其中前三者抗原性最强 ,不同组别、病程及年龄出现率明显高于后两者 (P <0 0 5 )。MP IgE阳性率 :MP感染组 71 4 %、哮喘组 78 13%、对照组 19 2 3% ,前两组间无明显差异 ,均显著高于对照组 (P <0 0 0 5 )。MP IgE阳性率在感染 8d后上升 ,2 8d后逐渐下降。与MP IgM滴度、血清T IgE无明显直接关系。结论 :(1)MP菌体粉碎后蛋白成分复杂 ,与IgE反应的抗原相对分子质量为 2 16 0 0 0、 2 0 5 0 0 0、 170 0 0 0、 6 80 0 0、 5 6 0 0 0 。

免疫印迹检测儿童肺炎支原体感染特异性抗体IgE

目的 分析肺炎支原体 (MP)引起变态反应的抗原成分 ,比较组别间特异性IgE出现率。方法 留取三个组待测血清 :(1)肺炎支原体肺炎组 (MP感染组 ) 35例 ;(2 )支气管哮喘合并MP感染组 (哮喘组 ) 32例 ;(3)正常对照组 2 7例。 6 %聚丙烯酰胺凝胶SDS PAGE分离MPFH株菌体粉碎后蛋白成分 ;电转移至PVDF膜上 ;通过免疫印迹检测三个组待测血清IgE阳性率。 结果 SDS PAGE显示MP蛋白成分有十几条。与IgE反应的抗原多肽为 2 16KD、2 0 5KD、170KD、6 8KD、5 6KD。MP IgE阳性率MP感染组 71 4 %、哮喘组 78 13% ,两者无明显差异 ,但与对照组 (19 2 3% )相比差异有显著性 (P <0 0 1)。MP感染的婴幼儿特异性IgE亦有较高的阳性率。 结论 MP引起的呼吸道感染是小儿喘息发作或哮喘病情加重的主要病原体之一。免疫印迹检测MP IgE具有较高的灵敏度和特异性。

肺炎支原体特异性抗体IgM在小儿支原体肺炎中的意义

目的:探讨支原体肺炎(MPP)患儿IgM抗体产生的时间和规律。方法:对2003年4-6月在唐山市妇幼保健院住院,病程在1周以内的28例支原体肺炎患儿,分别应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)和血清冷凝集素法(CGT)在病程不同时期,对IgM抗体产生的时间和规律进行研究。结果:ELISA法在28例支原体肺炎患儿中的阳性率为92.86%,和CGT法的阳性率67.86%比较差异有显著性(P<0.05)。特异性MP-IgM抗体一般在病程的第4天即可出现阳性结果,MP-IgM抗体效价随病程天数增加呈直线形上升,约2周达高峰。结论:支原体肺炎患儿一般在病程的第4天即可检测到特异性MP-IgM抗体,随病程天数的增加,抗体效价呈直线形上升,约2周达高峰。

猪肺炎支原体P46基因特异性噬菌体随机肽库的构建

通过构建猪肺炎支原体膜蛋白P46的噬菌体展示肽库,以筛选其特异性抗原表位。用DNase I随机消化法获取P46基因主要抗原序列(不含信号肽的编码序列)的随机片段,片段经与pBamHI Linker连接和BamHI酶切后,克隆到pC89 pⅧ型噬菌粒载体,重组噬菌粒转化感受态细胞XL1-Blue,辅助噬菌体VCSM13超感染,从而构建了P46基因特异性噬菌体随机肽库。结果,所建肽库含有约2.3×104个不同克隆,滴度约为1.3×1014PFU/mL。说明所建肽库具有较大库容和较好的多样性,可满足P46蛋白抗原表位的筛选。

颗粒凝集法检测肺炎支原体特异性抗体451例结果分析

目的 探讨不同年龄疑为支原体肺炎（MP）患者血清中肺炎支原体特异性抗体（Mp-IgM）阳性检出情况.方法 用日本富士肺炎支原体试剂盒SERODIA-MYCOⅡ作颗粒凝集试验,对不同年龄组Mp-IgM的检测结果进行总结分析.结果 451例患者中,阳性者265例,阳性率为58.8%;＜3岁、3～6岁、7～14岁、＞14岁各组的感染率分别为40.7%、61.4%、75.2%和40.4%.结论 肺炎支原体感染有低龄化趋势,应注视小儿支原体肺炎.

儿童与成人肺炎支原体特异性抗体检测特点比较

近年儿童与成人肺炎支原体（mycopalasma，MP）感染患者逐渐增多。临床上，通常将血清特异性MP-IgM抗体的检出作为早期诊疗的依据，MP—IgG抗体为继往感染的指标。我们发现成人与儿童的MP抗体表达存在差异，现分析如下。

连花清瘟颗粒辅治儿童咳嗽变异性哮喘合并肺炎支原体感染的临床效果

目的观察连花清瘟颗粒辅治儿童咳嗽变异性哮喘合并肺炎支原体感染的临床效果。方法选取2018年1月—2020年1月宜春学院第二附属医院收治的咳嗽变异性哮喘合并肺炎支原体感染患儿88例,采用随机数字表法分为观察组与对照组,各44例。对照组患儿入院后予常规方案治疗,观察组在对照组基础上加用连花清瘟颗粒治疗,2组均连续治疗4周。比较2组治疗效果,临床症状(高热、咳嗽、喘息、肺部啰音)改善情况,治疗前后肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))及呼气流量峰值(PEF)]、相关炎性指标[血清Clara细胞分泌蛋白(CCSP)、干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-17(IL-17)]、免疫因子[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)]水平变化及不良反应(恶心呕吐、皮疹、腹泻、头痛)发生情况。结果观察组与对照组治疗总有效率(95.46%vs.86.36%)比较差异无统计学意义(χ^(2)=2.200,P=0.138);观察组各项症状改善时间均短于对照组(P<0.01)。治疗4周后,2组FVC、FEV_(1)及PEF均较治疗前增加,且观察组增加的程度大于对照组(P<0.05或P<0.01);2组CCSP、IFN-γ水平均较治疗前升高,IL-17水平降低,且观察组升高或降低的程度大于对照组(P均<0.01);2组IgA水平、CD4^(+)、CD8^(+)均较治疗前升高,CD4^(+)/CD8^(+)降低,且观察组升高或降低的程度大于对照组(P<0.05或P<0.01);IgM水平升高,但观察组升高幅度小于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);2组IgG水平均高于治疗前,但2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组与对照组不良反应总发生率(18.18%vs.11.36%)比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.812,P=0.367)。结论连花清瘟颗粒辅治儿童咳嗽变异性哮喘合并肺炎支原体感染的临床效果显著,可缓解患儿症状,缩短康复时间,促进肺通气功能的恢复以及炎性指标和免疫指标改善,且不良反应症状较轻,值得临床推广应用。

肺炎支原体种特异性单克隆抗体杂交瘤制备及鉴定

目的 制备抗肺炎支原体种特异性单克隆抗体。方法 以纯化的肺炎支原体膜蛋白抗原 (相对分子质量为43× 10 3)加福氏免疫佐剂免疫 8周龄雌性BALB c小鼠 ,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 0 Ag14融合 ,以酶标记免疫吸附测定法 (ELISA)筛选和鉴定所制备的单克隆抗体。结果 共筛出 3株分泌抗肺炎支原体种特异单克隆抗体杂交瘤 ,经免疫鉴定其分泌的免疫球蛋白类型为IgG1、IgG2a及IgM ,与肺炎支原体有很强的亲和力 ,与种属相近的其它 6株支原体没有交叉反应。结论 本次筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌高浓度的肺炎支原体单克隆抗体 ,并且有很强的种特异性。

三种肺炎支原体特异性抗体IgM检测方法结果的比较

目的:比较三种肺炎支原体特异性抗体IgM检测方法的临床诊断效果及应用价值。方法:将采集的疑似MP感染患者血清标本612份,分别进行酶联免疫法(ELISA);被动颗粒凝集法(PPA)及免疫胶体金法(GIA)肺炎支原体特异性抗体IgM平行检测,具体检测方法、结果判断,均严格按照相应试剂盒说明书执行。结果:通过对三种血清学检测方法结果的比较,酶联免疫法(ELISA)在真阳性(TP)、假阳性(FP)、真阴性(TN)、假阴性(FN)等方面与被动颗粒凝集法(PPA)比较,差异无统计学意义(P>0.05);而与免疫胶体金法(GIA)比较有显著性差异(P<0.05);被动颗粒凝集法(PPA)与免疫胶体金法(GIA)之间比较差异明显(P<0.05),在假阳性率(FPR)、假阴性率(FNR)、敏感度(Sen)、特异度(Spe)、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(-LR)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数(Youden index)及总符合率(Coincidence rate)等10项评价指标方面酶联免疫法(ELISA)与被动颗粒凝集法(PPA)比较无明显优势,但优于免疫胶体金法(GIA)。结论:三种检测方法都具有高敏感度、高特异度且操作简便,均可用于临床早期快速诊断MP,联合应用可为临床提供更客观、更准确的检测结果,提高MP诊断符合率,以减少漏诊率和误诊率的危害。

肺炎支原体特异性荧光抗体与冷凝集素的相关性

肺炎支原体(MP)是引起儿童呼吸道感染的重要病原体之一,由于病原体检查难度大,目前实验室仍以冷凝集试验CA作为鉴别诊断的依据,冷凝集素是一种非特异性IgM抗体,除支原体外,某些病毒感染也可出现。

孟鲁司特钠及布地奈德治疗小儿肺炎支原体感染伴咳嗽变异性哮喘的可行性

目的探讨孟鲁司特钠及布地奈德治疗小儿肺炎支原体感染伴咳嗽变异性哮喘的可行性。方法选取我院2016年1月～2017年8月收治的72例小儿肺炎支原体感染伴咳嗽变异性哮喘患儿为研究对象,根据不同治疗方法分为两组,观察组36例患儿给予孟鲁司特钠联合布地奈德治疗,对照组36例患儿给予布地奈德治疗,对比两组患儿临床疗效和治疗前后肺功能指标与细胞因子水平。结果观察组患儿临床治疗总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);治疗后两组患儿FEV1/FVC、FEV1、FVC、日间PEF、夜间PEF指标均明显升高,但观察组提升更为明显,差异具有统计学意义(P <0.05);治疗后两组患儿TGF-β1、IL-4、IgE水平均明显降低,但观察组降低更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论孟鲁司特钠联合布地奈德治疗小儿肺炎支原体感染伴咳嗽变异性哮喘临床疗效显著,可有效改善肺功能指标与细胞因子水平。

猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法的建立和应用

目的:建立一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法。方法:选择云南省大理地区患有猪支原体肺炎疾病的60只猪作为研究对象,针对猪肺炎支原体的保守序列p36基因设计了引物和探针,建立猪支原体肺炎RT-PCR检测反应体系,并对其灵敏度、特异性、重复性进行分析及临床样本验证。结果:RT-PCR检测灵敏度为10^(2)拷贝、与PRRSV、PPV、FMDV、PCV、CSFV、APP等无交叉反应,批内和批间变异系数均小于2.00%,肺组织样本检出阳性数26例(86.67%),鼻拭子样本检出阳性数19例(63.33%)。结论:该研究成功建立了一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法,具有较高的检测灵敏度和特异性,重复性能良好,这为后期MPS的临床精准诊断和疫病科学防控提供试验依据。

1株猪鼻支原体特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定猪鼻支原体单克隆抗体,用于猪鼻支原体诊断及致病机理的研究。方法将猪鼻支原体全菌蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。鉴定其抗体亚型并对纯化单抗的效价、特异性进行鉴定。将该单抗用于菌落免疫杂交试验、间接免疫荧光试验。结果获得了1株猪鼻支原体单抗,命名为Mhr-08。该单抗的亚型属于IgG1,轻链为κ型。ELISA测定该纯化单抗效价为1∶102 400,Western-blot检测结果表明,该单抗与猪鼻支原体全菌蛋白在43kDa处出现特异性反应条带,与猪其他支原体、大肠杆菌及KM2培养基无交叉反应;该单抗为猪鼻支原体表面膜蛋白抗体,可成功应用于菌落免疫杂交试验;将其用于间接免疫荧光试验可成功检测出黏附于猪气管上皮细胞上的猪鼻支原体。结论成功制备和鉴定出1株猪鼻支原体单克隆抗体,该特异性单抗的获得为猪鼻支原体的诊断及致病机理的研究提供了工具。

丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740生物信息学分析

为研究丝状支原体山羊亚种Mmc-3740基因编码蛋白的结构与功能,运用生物信息学软件,对该基因编码蛋白的二级结构、跨膜区域、信号肽等生物信息进行预测及分析。结果显示,该基因编码蛋白拥有α螺旋、延伸链、随机卷曲结构;有信号肽,亚细胞定位在细胞外或者细胞质内,可能为分泌蛋白,具有较高的免疫原性,抗原表位偏高的区域主要集中在氨基酸序列的第28~51、60~67、80~130位处;蛋白分子式为C607H1000N184O261S5,分子量15.21kD,等电点(PI值)为4.42,在微生物体内半衰期较短,为不稳定蛋白。该结果为Mmc-3740编码蛋白的进一步研究提供基础数据。

肺炎支原体特异性抗体的检测及临床应用

目的 对呼吸道感染患者进行肺炎支原体 (Mp)检测 ,以期协助临床早诊断、早治疗。方法 对 4 90例呼吸道感染者同时作冷凝集试验并用间接免疫荧光法检测抗 -Mp -特异性抗体 (IgG、IgM)。结果 4 90例呼吸道感染者 ,检出Mp特异性抗体阳性 90例 ,阳性率 18.4 %。 <3岁、～ 6岁、～ 14岁、>14岁 4个年龄组Mp特异性抗体阳性率分别为 8.1% (12 / 14 8)、2 3.6 % (44 / 186 )、31.0 % (31/ 10 0 )、5 .3% (3/ 5 6 )。在 93例临床诊断为Mp感染的病例中 ,抗 -Mp -IgG阳性 5 9例 ,敏感性6 3.4 % ,抗 -Mp -IgM阳性 80例 ,敏感性 86 .0 % ,冷凝集试验阳性 4 3例 ,敏感性 4 6 .2 % ,抗 -Mp -IgM敏感性较冷凝集试验高(P <0 .0 5 )。

孟鲁司特钠联合特布他林治疗儿童咳嗽变异性哮喘伴肺炎支原体感染的研究

目的探讨孟鲁司特钠联合特布他林治疗儿童咳嗽变异性哮喘伴肺炎支原体感染的可行性。方法将98例儿童咳嗽变异性哮喘伴肺炎支原体感染的患儿随机分为观察组和对照组各49例。对照组给予特布他林治疗,观察组在对照组的基础上给予孟鲁司特钠治疗,疗程12周,比较两组临床疗效以及临床不适症状等。结果观察组显效35例,有效11例,无效3例,对照组显效25例,有效13例,无效11例。观察组疗效优于对照组(P<0.01);且临床症状改善时间短于对照组(P<0.01)。结论儿童咳嗽变异性哮喘伴肺炎支原体感染患儿采用孟鲁司特钠联合特布他林治疗,能有效改善临床症状及体征,疗效确切,安全性高,不良反应少,具有一定可行性。