日本沼虾生精细胞与支持细胞之间的连接关系

用透射电镜技术研究了日本沼虾精子发生过程中不同细胞之间的连接关系。结果表明，从精原细胞期到次级精母细胞期，在生精细胞之间存在间隙连接与分隔连接，并且两种连接相互邻接，桥粒仅在精原细胞之间发现；从精原细胞期到精细胞期，在生精细胞与支持细胞之间也存在相互邻接的间隙连接与分隔连接，两类细胞之间有大量桥粒，形成血淋巴-精巢屏障，这种屏障可保持生精细管内环境的稳定性；精子发生的不同时期，支持细胞之间亦广泛分布间隙连接，分隔连接与桥粒。不同类型细胞之间存在的间隙连接有利于精子的同步发生，与之邻接的分隔连接和桥粒具有协助间隙连接完成细胞通讯的作用。

依据“阳化气,阴成形”理论探讨支持细胞支持功能与生精细胞精子发生

“阳化气,阴成形”概括了阴与阳的功能和特性:阳推动人体无形的功能活动,阴生成人体有形的形质。由此可阐释人体生理、病理情况及宏观、微观生命活动,即可应用“阳化气,阴成形”从中医学角度理解解剖定位的器官、组织、细胞的结构与功能。支持细胞与生精细胞共同存在于生精上皮,二者在结构和功能上具有紧密联系。支持细胞发挥无形的支持功能,归属于“阳化气”;生精细胞则通过精子发生形成有形的精子,归属于“阴成形”。支持细胞发挥营养支持、免疫保护等功能,推动、保障和维持生精细胞的精子发生,生精细胞也会对支持细胞的功能发挥一定调控作用,二者互根互用。该文将有助于理解支持细胞和生精细胞在生精过程中的互作关系,并为涉及支持细胞和生精细胞异常的男性不育症的辨证论治提供中医理论参考。

线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用。取对数生长期鸡支持-生精细胞,用含0、2、3、4mmol.L-1MnCl2的DMEM培养液,培养24h,采用吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测鸡支持-生精细胞凋亡,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),Westernblot法检测胞浆内细胞色素C(Cytc)蛋白表达含量,分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9,3(Caspase-9,3)活性。用含MnCl2的DMEM培养液培养24h后,处理组细胞与对照组相比,鸡支持-生精细胞凋亡指数逐渐升高(P<0.01);线粒体膜电位显著降低(P<0.01);胞浆中Cytc蛋白表达量逐渐增加;Caspase-9,3活性逐渐升高(P<0.01)。线粒体途径介导的凋亡是锰对鸡生殖毒性作用的主要机制之一。

Ni^(2+)-Cd^(2+)联合染毒大鼠睾丸支持细胞和生精细胞的体视学分析

目的:应用体视学方法定量分析Ni2+、Cd2+对大鼠睾丸支持细胞和生精细胞的影响。方法:63只雄性SD大鼠随机均分为21组,每组3只,实验试剂CdCl2和NiSO4通过腹腔注射给药,对照组(A1、A2、A3),以等量生理盐水代替,实验组分为急性染毒组、染毒2月组、染毒4月组(B1~G1,B2~G2,B3~G3),每天给药的质量分数分别为:B1、B2、B3组:2.9 mg/kg Cd2+,C1、C2、C3组:5.8 mg/kg Cd2+,D1、D2、D3组:5 mg/kg Ni2+,E1、E2、E3组:50mg/kg Ni2+,F1、F2、F3组:2.9 mg/kg Cd2++5 mg/kg Ni2+,G1、G2、G3组:5.8 mg/kg Cd2++50 mg/kg Ni2+。组织学切片观察,病理附值评分,采用体视学图像分析方法对各组大鼠睾丸细胞进行定量分析。结果:与对照组比较,G1组、F1组、G2组附值评分显著升高(P<0.05);B1~G1组粗线期精母细胞与支持细胞的平均细胞比率显著减小(P<0.05);急性染毒B1组、D1组支持细胞体密度和截面密度,C1组、D1组数密度均高于对照组(P<0.05),而C1~G1组生精细胞体密度低于对照组(P<0.01);染毒2月G2组支持细胞的体密度和截面密度显著增加,生精细胞的体密度显著降低(P<0.01);染毒4月G3组支持细胞的体密度、截面密度均显著下降(P<0.01)。结论:Ni2+、Cd2+染毒可能引起睾丸支持细胞损伤但数量无显著改变,生精细胞数量显著减少,可能导致精子发生障碍。

睾丸支持细胞与生精细胞凋亡的关系

生精细胞处于支持细胞构造的环境中 ,激素、生长因子和温度以及它们与支持细胞的联系调控着生精细胞的分化与成熟 ;细胞之间的旁分泌信号转导亦调节着生精细胞凋亡的过程。在睾丸生精细胞发生的自发性凋亡和诱发性凋亡中 ,支持细胞表达和分泌的产物扮演重要角色。

钒对睾丸支持细胞／生精细胞的体外毒性研究

钒对睾丸支持细胞／生精细胞的体外毒性研究李宏霞，杨在昌，张天宝，曾祥贵（成都华西医科大学环境卫生学教研室６１００４１）已有研究表明，Ｖ２Ｏ５对雄性大鼠有明确的生殖毒性，但对其毒作用机制尚缺乏深入的研究。本实验在建立大鼠支持细胞／生精细胞（Ｓｅｒｔｏｌ...

支持细胞在生精细胞凋亡过程中的重要作用

精子的生成过程是一个连续的周期性的过程,这包括二倍体的精原细胞进行一系列的有丝分裂,减数分裂最后分化成为成熟的单倍体精子的过程.

细胞核因子-κB在睾丸生精细胞凋亡过程中的活化作用

细胞凋亡在精子发生过程中限制睾丸生精细胞总数起着重要的作用,它的调控异常与男性不育密切相关。越来越多的证据显示细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)对睾丸生精细胞凋亡起着调控作用,这促使我们研究人类正常睾丸组织NF-κB的活性及在离体状态下睾丸组织过度凋亡过程中的作用。用电泳迁移率变更分析(EMSA)测定,发现低水平NF-κB组成性DNA结合活性,且通过对NF-κB的亚单位RelA和p50的免疫染色发现,NF-κB定位于Sertoli细胞核内。在体外诱导的睾丸凋亡过程中,Sertoli细胞(睾丸支持细胞)核NF-κB水平和整个生精小管NF-κB DNA结合活性的增加先于检测到发生凋亡的生精细胞。抗炎药物sulfasalazine可有效抑制应激诱导的NF-κB DNA结合力和NF-κB介导的IBa基因表达。更为重要的是,sulfasalazine抑制NF-κB的同时抑制生精细胞凋亡。因此,有可能通过药物抑制NF-κB,治疗短暂应激条件下引起的生精细胞的过度凋亡。

睾丸支持细胞和间质细胞在生精细胞凋亡中的作用

睾丸精子发生过程中存在生精细胞凋亡，支持细胞和间质细胞作为非生殖细胞对生精细胞凋亡具有重要作用，本文对这方面的研究作一综述。

苦马豆素对家兔睾丸生精细胞周期的影响

为研究苦马豆素对家兔睾丸生精细胞周期的影响,进一步探讨疯草的中毒机理,将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加疯草小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、第35、第70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过流式细胞仪测定生精细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果显示,从第35天开始,试验组家兔生精细胞凋亡率均极显著升高(P<0.01),其中单倍体细胞和二倍体细胞凋亡率均极显著升高(P<0.01),但四倍体细胞数量无显著变化。与对照组相比,中毒家兔睾丸生精细胞数量在G0/G1期升高,在S期降低,而且G1期与S期细胞数量呈显著负相关。说明苦马豆素可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且呈现出一定的时间-剂量效应。

山羊睾丸生精细胞体外培养和鉴定

试验采用两步酶消化法对2月龄公羔睾丸进行处理,得到了总数为7.44×10~9的生精细胞悬液,经台盼蓝染色,细胞活率在90%以上;支持细胞的贴壁性极好,生精细胞附着在支持细胞上,随着培养时间延长,生精细胞、支持细胞逐渐退化,呈现"集合"的趋势,细胞数量逐渐减少;经BrdU标记、H.E.染色,检测培养的生精细胞到分化到圆形精子细胞阶段,表明成功构建了山羊睾丸生精细胞共培养体系,可为后续深入研究山羊精子体外成熟培养提供一定的实验依据。

细胞松弛素E对大鼠生精细胞发育的影响

本文采用微丝抑制剂——细胞松弛素E对大鼠生精细胞发育的影响作了形态学观察,特别对支持细胞骨架复合体的作用进行了较为详细的研究。结果表明睾丸内注射0.1ml,1000μmol/L～2000μmol/L,细胞松弛素E,6-14小时后,光镜下可见曲细精管上皮排列疏松,组合紊乱,有的生精上皮基底部出现双核和三核的圆形细胞和多核巨精子细胞,管腔内出现未成熟的精子;在第ⅤⅢ～Ⅸ期曲细精管上皮中,有许多第8、第9期的精子细胞顶体不指向基底方向,属定向不正的精子。电镜下,实验组动物可见一些面向第8-18期精子细胞顶体的支持细胞骨架复合体出现不同程度的缺如,有的断裂成小段;有的破坏仅发生在顶体上方;有的几乎全部丢失,并有类管球复合体的形成。另外,在高渗液处理下,可见精子细胞顶体和支持细胞间的间隙扩大。最后对微丝在精子发育中的作用进行了讨论。

睾丸非生精细胞的相关性研究

睾丸功能受下丘脑-垂体-性腺轴的激素调节控制,而且受睾丸内环境的影响.睾丸间质内有间质细胞、巨噬细胞、肥大细胞等,生精上皮中存在支持细胞及生精细胞,这些细胞及其产生的调节因子在局部发挥作用,参与调节睾丸生精功能.本文就睾丸内非生精细胞相关性作一综述.

小鼠睾丸中细胞连接相关蛋白质的分析

目的探讨细胞连接相关蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达模式。方法 Western blot检测并分析1~6周龄小鼠睾丸、原代支持细胞以及小鼠精原细胞系GC1 spg、精母细胞系GC2 spg、间质细胞系TM3、支持细胞系TM4等4种生殖相关细胞系中细胞连接相关蛋白的表达水平。结果小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子A、紧密连接蛋白Occludin和Claudin,以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子C、连接蛋白Nectin-3和钙黏附蛋白E的表达表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白紧密连接蛋白ZO-1、ZO-2、Afadin、β链蛋白和CD2相关蛋白在睾丸的不同发育阶段以及生殖细胞系中表达无差异。结论小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关的膜蛋白多表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白在睾丸的不同发育阶段中表达无差异。

壬基酚对体外培养大鼠睾丸支持细胞凋亡影响的研究

目的 探讨壬基酚对大鼠睾丸支持细胞的影响及其作用机制。方法 建立体外培养大鼠睾丸支持细胞以及混合培养支持细胞和生精细胞体系 ,以不同浓度的壬基酚 (分别为 0 2 μg/L、 1 0 μg/L、 3 0 μg/L、 5 0 μg/L)作用于支持细胞和混合培养的支持细胞和生精细胞 ,采用MTT法测定支持细胞的活性 ,流式细胞仪测定支持细胞的凋亡率 ,RT -PCR法测定混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasLmRNA表达量的变化。结果 随着壬基酚作用剂量的增大和作用时间的延长支持细胞的活性下降 ,且支持细胞的凋亡率随着壬基酚浓度的增大而提高 ;混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasLmRNA表达量均明显提高。结论 壬基酚可引起支持细胞凋亡 。

精原干细胞在支持细胞饲养层上的长期培养(英文)

目的建立体外研究精原干细胞与支持细胞共培养的细胞模型,研究体外精原干细胞在支持细胞层上的增殖特点。方法应用两步酶消化法,分别从14～15d及6d龄雄性昆明小鼠睾丸中分离支持细胞及精原干细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。将精原干细胞接种在支持细胞层上,观察不同时间点精原干细胞集落形态及数目。结果在支持细胞层上培养24h后,精原干细胞开始增殖分裂,呈双细胞形态;随着培养时间延长,双细胞集落数逐渐减少,而链状细胞集落逐渐增加;培养120h后,链状细胞局部融汇堆积,且细胞集落维持在相对稳定数量。在每4～5d更换培养液的条件下,细胞集落维持稳定状态的平均时间为(51,2±5.8)d。结论精原干细胞在体外支持细胞层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可用于体外研究生精细胞增殖分化特征、药物或毒物干扰精原干细胞功能实验。

支持细胞与其周围细胞之间的相互作用

支持细胞为生精细胞提供结构支架和营养,支持细胞分泌的细胞因子(如IL-1α和IL-6)可能涉及精子发生的局部调控。生精细胞分泌蛋白抑制因子或刺激因子来调节支持细胞的功能。生精细胞的分化,抑制支持细胞分泌睾丸素。支持细胞对间质细胞有营养作用,支持细胞释放的类黄体生成素释放激素(LH-RH)作用于间质细胞上的LH-RH受体,进而调节间质细胞的功能。间质细胞产生的β-内啡肽和黑素细胞刺激素可分别抑制和促进支持细胞的分泌。肌样细胞旁分泌因子(PModS)促进支持细胞合成雄激素结合蛋白(ABP)和转铁蛋白,而支持细胞可抑制肌样细胞增殖。

睾丸细胞生物学研究进展

睾丸是男性生殖腺,由生精小管和间质构成。生精小管主要由生精细胞和支持细胞组成,是精子发生场所;间质中主要是间质细胞,间质细胞合成与分泌雄激素。本文介绍睾丸3种细胞的发育分化,以及成年期睾丸细胞的结构和生物学研究进展。

RNA N6-甲基腺苷(m6A)修饰相关酶在哺乳动物精子发生中的研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)核酸修饰是近10年来研究较多的一类表观修饰,RNA通过经典m6A修饰蛋白“Writers”(METTL3/14/WTAP等)、m6A去修饰蛋白“Erasers”(FTO和ALKBH5)和m6A识别蛋白“Readers”(YTHDC1/2、YTHDF1/2/3等)组成的协同调节体系进行转录后核酸m6A修饰、去修饰和识别结合,进而调控转录本下游命运。精子发生是雄性哺乳动物性成熟和维持生育能力的重要过程,涉及生精上皮支持细胞、间质细胞和精原细胞等增殖分化和维持生精微环境过程。多项研究表明m6A调节体系参与哺乳动物精子发生进程,异常的m6A修饰水平和m6A调节体系失衡均会导致睾丸发育异常、精子发生异常和雄性不育。本文综述了精子发生过程中m6A修饰相关酶的作用,深入分析m6A差异修饰转录本之于正常精子发生的作用,对认知哺乳动物精子发生和解析临床生精障碍的分子机制具有重要意义。

细胞色素C和波形蛋白在染锰大鼠睾丸表达及对精子发生的抑制作用

目的研究氯化锰对大鼠生精细胞细胞色素C(cyto-c)和支持细胞波形蛋白(VM)表达的影响及对生精功能的抑制效应。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,8只/组。Mn Cl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,取睾丸免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞cyto-c和VM表达,测定睾丸脏器系数,取附睾检测精子数量和精子畸形率。结果与空白对照组比较,各染锰组生精细胞cyto-c阳性细胞率和支持细胞VM阳性细胞率及各生精功能指标均显著降低,并呈一定的时间-效应关系和剂量-效应关系。各组大鼠精子数量与cyto-c阳性细胞率和VM阳性细胞率均呈正相关。结论锰可诱导大鼠生精细胞cyto-c和支持细胞VM表达,抑制生精细胞增殖,产生生殖毒性效应。