人KIAA0146基因及蛋白质的生物信息学分析

KIAA0146是同源重组修复蛋白质复合体BLM/RAD51的支架蛋白质。当前KIAA0146相关的实验研究非常少。本文采用生物信息学方法对KIAA0146基因及其蛋白质进行快速分析以期为其往后的实验研究提供线索。首先发现KIAA0146基因存在多个转录起始位点及启动子,且启动子(2 127~2 177 bp)和(3 127~3 177 bp)的侧翼各有2个Cp G岛。然后发现KIAA0146是亲水的不稳定蛋白质。由于未发现KIAA0146蛋白包含信号肽和跨膜区域,所以它可能既不是分泌蛋白质也不是跨膜蛋白质。但是KIAA0146可能是细胞核蛋白质,在其N端包含核定位信号"RARGSKRKR",而且构建的KIAA0146蛋白的三级结构提示它可能具有核酸结合结构域。最后发现RAD51、ATM、RAD51B、MRE11A、BLM、DNA2、RMI1、BRCA1、BRCA2和XRCC2可能与KIAA0146相互作用,而且KIAA0146可能通过与这10个蛋白质相互作用参与DNA损伤应答及修复、发育和细胞代谢调节等生物过程。总之,文中对KIAA0146基因结构及其蛋白质的亚细胞定位、三级结构和潜在的分子功能等进行了预测分析,为往后实验研究KIAA0146提供了重要的理论依据和新线索。

细胞骨架蛋白tubulin α、β在不同级别胶质瘤中的表达及其与预后的相关性

目的探讨不同病理学分级胶质瘤中细胞骨架蛋白tubu linα、β的表达,评估tubu linα、β表达水平与胶质瘤的恶性程度及其与预后的相关性。方法应用免疫组化方法检测57例不同病理级别人胶质瘤组织中tubu linα、β表达情况,并分析tubu linα、β表达水平与病理分级及患者术后生存时间的相关性。结果不同级别胶质瘤tubu linα、β表达水平不同,高级别(Ⅲ、Ⅳ级)与低级别(Ⅰ、Ⅱ级)胶质瘤tubu linα、β表达水平的差异有显著性(P<0.05),且tubu linα、β表达水平与患者术后生存时间呈正相关性。结论tubu linα、β在胶质瘤恶性进展方面可能具有重要意义,对指导胶质瘤的分期、组织学分级和判断患者的预后有一定参考价值。

8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响

目的:观察8-甲氧沙林对体外培养黑素细胞内游离钙浓度、细胞骨架蛋白形成的影响。方法:正常人黑素细胞取自包皮环切术切取的包皮,用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙浓度,用罗丹明结合毒伞素对细胞骨架蛋白进行特异性染色。结果:8-甲氧沙林可使细胞内游离钙离子浓度升高,促进黑素细胞骨架蛋白合成。结论:8-甲氧沙林可能通过诱导黑素细胞内钙离子浓度升高和细胞骨架actin蛋白生成,从而影响黑素细胞的迁移。

埃兹蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨埃兹蛋白(ezrin)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法随机选择手术切除并经组织病理学检查确诊的胃癌组织标本40份和癌旁正常组织标本30份,应用免疫组织化学SP法检测ezrin的表达,并分析ezrin表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤直径、浸润和分化程度、有无淋巴结转移等临床病理因素的相关关系。结果ezrin阳性表达率在胃癌组织为55%(22/40),癌旁正常组织为0,两者间差异有统计学意义(χ2=18.07,P<0.05);在高、中、低分化胃癌组织分别为30%(3/10)、53%(10/19)、82%(9/11)(χ2=5.760,P<0.05);在有、无淋巴结转移胃癌组织分别为72.7%(16/22)、33.3%(6/18)(χ2=6.208,P<0.05)。ezrin表达与胃癌患者年龄、性别、肿块大小及浸润程度无明显相关(P>0.05)。结论ezrin在胃癌组织中呈高表达,并与胃癌的淋巴结转移及恶性程度呈负相关,是反映胃癌生物学行为的有价值指标。

Ezrin的原核表达及与其相互作用蛋白的研究

目的体外筛选人胰腺癌细胞中与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。方法提取人胰腺癌Panc-1细胞总RNA,RT-PCR法扩增Ezrin基因。将扩增得到的Ezrin基因片段和pET15b质粒转化E.coli DH5α,获得pET15b-Ezrin重组质粒,双酶切后测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行Ni2+-NTA亲和层析和分子筛纯化后,行SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS/MS质谱分析和蛋白质印迹鉴定。裂解Panc-1细胞,获得总蛋白提取液,采用Pull-down方法体外筛选与Ezrin重组蛋白相互作用的蛋白,并对筛选出的目的蛋白进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF-MS/MS质谱鉴定。结果RT-PCR扩增出的Ezrin基因片段(1761bp)与理论DNA表达片段大小一致,测序鉴定显示克隆的Ezrin基因序列与GenBank报道序列相符。SDS-PAGE、质谱分析和蛋白质印迹分析显示纯化后Ezrin重组蛋白相对分子质量为69400,与质谱分析的相对分子质量结果相符,为带有His-6标签的特异蛋白。双向凝胶电泳和质谱鉴定结果共筛选出可与Ezrin重组蛋白相互作用的7种蛋白,其分别为RNA-binding motif protein39(RBM39)、Transgelin(TAGLN)、Albumin(ALBU)、Formin-1(FMN1)、Rho GTPases(RHGBA)、Tetratricopeptide repeat protein16 (TTC16)、Syntaxin-binding protein1(STXBP1)。结论在大肠杆菌中成功表达、纯化了Ezrin蛋白,并在体外成功筛选出可信的与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。

β-连环蛋白与皮肤干细胞选择性分化

目的:β-连环蛋白是一种多功能、广泛分布的蛋白,参与了包括胚胎形成及个体发育等许多生物过程,近年来在生物及医学领域受到广泛关注。本文就β-连环蛋白在皮肤干细胞选择性分化的作用进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1996-01/2005-01期间的相关文章,检索词为“beta-catenin,epidermalstemcell,differentiation”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1996-01/2005-01期间的相关文章,检索词为“β-连环蛋白,皮肤干细胞,分化”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与β-连环蛋白在皮肤干细胞选择性分化研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到22篇符合纳入标准的文献,涉及β-连环蛋白的生物学特性、皮肤干细胞的分布、表皮干细胞的分化调控、β-连环蛋白与皮肤干细胞的定向分化、β-连环蛋白功能的可能作用机制等方面。资料综合:β-连环蛋白的生物学功能包括粘合连接与信号传导。粘合连接是指细胞膜上的钙黏蛋白依次与细胞膜中的β-连环蛋白、α-连环蛋白及肌动蛋白相连形成的特殊结构以完成细胞-细胞、细胞-细胞外基质之间的黏附和相互作用。信号传导指的是β-连环蛋白在Wnt信号通路中的核心作用。β-连环蛋白的这两种功能相互依赖、相互影响,对于皮肤干细胞的分化有着特殊的意义:干细胞对基底膜的黏附是干细胞维持其特性的基本条件,对基底膜的脱黏附是诱导干细胞脱离干细胞群落,进入分化周期的重要调控机制之一。表皮干细胞的分化受内源性和外源性调控,整合素在表皮基底层干细胞与基底膜的信息调控和黏附中起重要作用。β-连环蛋白作为一种细胞因子,存在于表皮干细胞膜表面,在皮肤干细胞分化途径的选择及定向迁移中发挥着重要作用。结论:β-连环蛋白近年来在生物及医学领域受到广泛关注的原因主要与其粘合连接、信号传导两大功能有关。体内参与调控表皮干细胞与毛囊干细胞分化的因子有多种,β-连环蛋白与它们共同形成一个复杂的网络,为表皮细胞的分化提供了重要的微环境。

凋亡时细胞骨架蛋白结构的改变

细胞骨架是细胞重要的组成成分 ,维持着细胞正常形态和功能。凋亡时多种细胞骨架蛋白 (如actin ,myosin等 )由于受凋亡因素作用 ,蛋白结构发生改变 ,进而引起凋亡细胞的形态改变。因而细胞骨架的改变在细胞凋亡发生过程中具有重要作用。

Ezrin在涎腺腺样囊性癌组织中的表达

目的:探讨Ezrin在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及意义。方法:用免疫组织化学SP法检测Ezrin在涎腺腺样囊性癌组织和正常涎腺组织中的表达,分析其在涎腺腺样囊性癌组织中的表达与肿瘤的侵袭性、复发、转移和预后的关系。结果:Ezrin在涎腺腺样囊性癌和正常涎腺组织中的阳性率表达分别为44.68%和9.09%,P<0.05;在癌细胞中主要为胞质内表达,染色深,而在正常涎腺组织则主要为细胞膜表达,染色浅或阴性。Ezrin的表达强度与有无神经受侵、有无发生局部复发及远处转移相关,P<0.05。Ezrin表达阳性组和阴性组的5年累积生存率分别为66.70%和100.00%,10年累及生存率分别为27.83%和95.00%,阳性组较阴性组预后差,P<0.05。结论:Ezrin的表达强度与涎腺腺样囊性癌的发生、侵袭性、复发和转移性有关,且Ezrin阳性表达预示患者预后不良。

α-cat和β-cat及E-cad在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究αcat、βcat和Ecad在食管癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测αcat、βcat和Ecad在100例食管癌组织中的表达。结果:αcat、βcat和Ecad的异常表达率分别为48%、51%和57%。αcat的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和分化程度有关,u值分别为2.835、2.602、2.660和2.893,P值分别为0.005、0.009、0.008和0.004;βcat的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和分化程度有关,u值分别为4.566、3.095、2.484和3.578,P值分别为0.000、0.002、0.013和0.000;Ecad的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和分化程度有关,u值分别为2.851、3.811、2.958和3.130,P值分别为0.004、0.000、0.003和0.002。αcat、βcat和Ecad正常表达患者的5年生存率高于异常表达者,χ2值分别为6.83、5.34和13.39,P值分别为0.009、0.021和0.000。食管癌组织中Ecad和αcat、βcat之间表达差异均无统计学意义,χ2值分别为2.37和1.25,P值分别为0.130和0.320。结论:αcat、βcat和Ecad的异常表达与食管癌发生发展有关,测定其表达情况可作为预测食管癌的生物学行为和预后的重要指标之一。

电场干预对血管平滑肌细胞形态和细胞骨架的影响

目的:探讨生理电场干预对大鼠主动脉血管平滑肌细胞形态和细胞骨架蛋白F-actin表达的影响。方法:实验于2002-07/2003-12在解放军第三军医大学西南医院中心实验室进行。取清洁级Wistar大鼠47只,颈离断法处死大鼠,体外培养其主动脉血管平滑肌细胞。①分别给予0,50,100,150,200,250mV/mm生理电场干预,显微成像及图像分析技术记录分析血管平滑肌细胞形态变化。②150mV/mm生理电场干预的血管平滑肌细胞在无生理电场(0)和生理电场作用5,10,30min、1,3,6h各时间点,用激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F-actin的变化。结果:①血管平滑肌细胞在100～250mV/mm生理电场作用下显示明显的趋化反应,部分细胞的板状突起向阴极面伸展。②激光共聚焦显微镜显示150mV/mm生理电场作用5min,细胞内F-actin表达增加,30～60min达到高峰,以后仍然高于无电场干预的血管平滑肌细胞;F-actin逐渐呈平行排列,形成整齐的应力纤维丝。结论:生理电场干预下血管平滑肌细胞细胞膜向阴极伸展,血管平滑肌细胞F-actin合成和重新分布,发生结构改变,可能参与血管平滑肌细胞定向迁移的调控。

膝关节腔内培养骨髓间充质干细胞复合脱钙骨的组织工程软骨

背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DMEM/F12完全培养基培养,成软骨诱导条件培养基诱导分化。取同种异体兔的髂骨和椎体骨制作成脱钙骨支架,诱导后的骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨支架上,培养1d后将细胞-支架复合物用筋膜包裹置于兔左膝关节腔内培养,单纯脱钙骨支架筋膜包裹置入右膝关节腔。于培养第4,8,12周分别取材,行大体观察并制成石蜡切片,采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色方法进行组织学观察。结果与结论:培养4,8周,细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化的平均吸光度值(A)分别为0.263±0.031,0.340±0.052,单纯支架组标本分别为0.147±0.027,0.165±0.030,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);培养12周细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化A值平均为0.362±0.037,标本类似正常软骨外观,Ⅱ型胶原免疫组化反应呈阳性;而单纯支架组脱钙骨支架降解。培养12周细胞-支架组苏木精-伊红染色结果显示细胞数量多,脱钙骨支架基本被吸收;而甲苯胺蓝染色结果显示有被染成紫红色的异染性基质形成。结果提示兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨可在兔膝关节腔内培养出组织工程软骨。

支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响,探讨p38 MAPK信号通路在其中的作用.方法 构建敲除jlp基因的细胞模型,细胞被分为阴性对照(Ctrl-shRNA)组、jlp基因敲除(jlp-shRNA)组、阴性对照+成纤维细胞生长因子(FGF-2)组和jlp基因敲除+成纤维细胞生长因子(jlp-shRNA+ FGF-2)组.Western印迹法检测各组细胞JLP、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达;免疫荧光法检测FGF-2诱导24 h后,α-SMA、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的表达.结果 与Ctrl-shRNA组比较,FGF-2组JLP蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+ FGF-2组TGF-β1、α-SMA、p38 MAPK蛋白表达量明显上调,E-cadherin蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+FGF-2组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的荧光表达明显上调.结论 支架蛋白JLP在促纤维化环境形成中可抑制HK-2细胞间充质转分化,其机制可能与JLP负调控p38 MAPK信号通路有关.

浸润性乳腺癌组织上皮钙依赖粘附素相关分子的表达

目的 :探讨乳腺浸润性小叶癌 (ILC)和浸润性导管癌 (IDC)中上皮钙依赖粘附素相关分子α cat、β cat、γ Cat的表达及其意义。方法 :采用免疫组织化学SP法检测 38例ILC(其中有淋巴结转移 1 7例 )和 6 4例IDC(有淋巴结转移1 4例 )组织中α Cat、β Cat、γ Cat的表达 ,按阳性癌细胞占肿瘤细胞的比例进行半定量分析 ,结果 :38例ILC中α Cat、β Cat、γ Cat表达缺失和低表达者分别为 32例 (84 .2 1 % ) ,2 2例 (5 7.89% )和 33例 (86 .84 % ) ,而 6 4例IDC癌组织中 3者的表达缺失和低表达者分别为 5 0例 (90 .6 2 % ) ,5例 (7.81 % )和 5 2例 (81 .2 5 % ) ,α Cat与 β Cat在ILC和IDC中的表达具有明显的正相关性 (P <0 .0 5 ) ;β Cat的表达缺失和低表达者在乳腺ILC和IDC与有无淋巴结转移呈负相关性 (P <0 .0 5 ) ,而α Cat、γ Cat在乳腺ILC和IDC的表达与有无淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 :α Cat、β Cat、γ Cat在乳腺ILC和IDC中表达均明显减少和缺失 ,提示上皮钙依赖粘附素相关分子在乳腺浸润性癌发生发展中丧失了其正常的细胞粘附功能。β

Talin1在原发性肝细胞癌组织中的表达

目的探讨踝蛋白1(Talin1)在正常肝组织、原发性肝细胞癌(HCC)组织、癌旁组织中的表达情况;探讨Talin1表达与HCC发生及其预后的关系。方法采用免疫组织化学方法 (SP法)检测正常肝组织(10例)、HCC组织(32例)及其对应癌旁组织(32例)中的Talin1表达情况。结果正常肝组织、HCC组织及癌旁组织中均有Talin1表达,其阳性表达率分别为100%、62.5%和96.9%。Talin1表达于阳性细胞胞质及胞膜上;Talin1在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05);而正常肝组织与癌旁组织中的Talin1表达差异无统计学意义(P>0.05);Talin1的表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤个数、AFP表达水平及HB-sAg无关(P>0.05),与患者术后一年无瘤生存率无关(P>0.05);而与肝癌病理分化程度、包膜完整性、门脉癌栓形成及肿瘤大小相关(P<0.05)。结论 Talin1与HCC的癌变、浸润和转移有关;Talin1可作为HCC发生、发展的预测指标之一。

哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达

目的:研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法:应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cD-NA.经液相杂交消减两组共同序列,以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库,菌落PCR扩增差异片段,应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序,结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果:构建了高效的上调与下调消减cDNA文库,经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关,包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH-2L),蛋白磷酸酶1β亚型(PP1Cβ),无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK-8),蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(PTPN6)与非受体型12(PTPN12);下调基因,肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论:这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作,进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.

β-arrestin 2 siRNA对人乳腺癌Bcap37细胞的增殖影响

目的探讨β-arrestin 2的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌Bcap37细胞增殖的影响。方法在脂质体Lipofectamine^(TM) 2000的介导下用β-arrestin 2 siRNA转染Bcap37细胞,同时设置空白对照组(不作任何处理)及阴性对照组(转染p GPU6/GFP/Neo SHNC)。转染后用实时荧光定量PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)及Western blot法检测Bcap37细胞β-arrestin 2基因及蛋白的表达情况,MTT法检测Bcap37细胞的增殖。结果转染96 h后β-arrestin 2 siRNA转染的Bcap37细胞中β-arrestin 2的基因及蛋白表达低于空白及阴性对照组(均P<0.05),并且转染96 h后β-arrestin 2 siRNA转染的细胞增殖速度低于空白及阴性对照组(均P<0.05)。结论β-arrestin 2 siRNA降低Bcap37细胞β-arrestin 2的表达并抑制细胞增殖。

Ezrin、CD44v6在皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中的表达及意义

【目的】探讨埃兹蛋白（Ezrin）及变异型 CD44分子6（CD44v6）在皮肤基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）组织中的表达及意义。【方法】采用 SP 法检测 Ezrin、CD44v6在 BCC、SCC 及正常皮肤组织中的表达,并分析其与临床特征的相关性。【结果】Ezrin 在正常组、BCC 和 SCC 组织中的阳性表达率分别为10%、60.0%、84.4%,组间比较有显著性差异（P＜0.05）；CD44v6在正常皮肤和 BCC、SCC 组织中阳性表达率分别为100%、26.7%、59.4%,各组比较也有显著性差异（P ＜0.05）。Ezrin 的表达水平随着肿瘤分级程度增高而增高（P ＜0.05）,有淋巴转移的比无淋巴转移的表达强（P ＜0.05）；CD44v6的表达水平随病理分级的增加表达强度下降（P ＜0.05）,且有淋巴转移的阳性率表达比无淋巴转移低（P ＜0.05）,Spearman 相关性分析显示两者表达有相关性（P ＜0.05）。【结论】Ezrin、CD44v6可作为 BCC 发生、发展的分子生物学标志。联合检测可作为研究和判断皮肤 SCC 生物学行为和预后的重要指标。

E-cad和β-cat在人结肠癌组织中的表达及相关性研究

目的 :研究E cad和 β cat在结肠癌组织中的表达及意义。方法 :应用免疫组化SP法检测E cad和 β cat在 3 2例结肠黏膜、3 0例结肠腺瘤、96例结肠腺癌组织中的表达。结果 :E cad和 β cat在结肠腺癌病例中的异常表达显著高于结肠黏膜和结肠腺瘤 ,P <0 0 1。E cad、β cat在低分化腺癌中的异常表达率显著高于高、中分化腺癌 ,P <0 0 1。结肠癌浸润肠壁全层病例的E cad异常表达率显著高于浸润肌层者 ,P <0 0 5。结肠癌伴有淋巴结转移者E cad、β cat的异常表达率显著高于无淋巴结转移者 ,P <0 0 5。E cad和 β cat异常表达率与结肠癌Duke’s分期密切相关 ,P <0 0 1,P <0 0 5。结肠癌E cad、β cat正常表达病例的 5年生存率远高于E cad、β cat异常表达者 ,P <0 0 1。 结论 :同时检测E cad和 β

箭头形平行平板流室下内皮细胞形态及功能的改变

目的:观察不同血流状态下培养内皮细胞的形态及功能。方法:制作一种新的箭头形平行平板流室,高速摄像微粒子示踪技术行流体分析,测量细胞形态指数和F-肌动蛋白的免疫荧光染色。结果:液体在入口与狭窄开始处中点的流速为249.8mm/s,剪切应力为71.9dyn/cm2,进入狭窄段时的流速为316mm/s,剪切应力为88.5dyn/cm2,细胞形态呈长纺锤形,方向沿液体流向排列,F-肌动蛋白纤维表达明显增加,呈束状,增密,上述区域液体为定常流。液体进入宽广区域后液体流速明显减慢并在两侧形成涡流甚至停滞,流速为54.4-119.6mm/s,剪切应力为15.6-34.4dyn/cm2,细胞近似圆形、卵圆形、多边形,F-肌动蛋白纤维表达似对照组。结论:新的箭头形平行平板流室是研究在不同血流状态下内皮细胞功能的良好装置。