光交联复合水凝胶支架中人牙髓干细胞的成骨/成牙分化能力

背景:甲基丙烯酸酐改性明胶(gelatin-methacryloyl,Gel-MA)与经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)在一定比例下经过紫外线交联后形成的复合水凝胶支架具有良好的孔隙率、机械性能、溶胀性能及生物降解率,这为临床上年轻恒牙的牙髓再生提供了新的思路和方法。目的:探究1∶2质量比Gel-MA/TDM复合光交联水凝胶支架对人牙髓干细胞增殖能力及成骨/成牙本质分化能力的影响。方法:将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中,采用CCK-8实验检测人牙髓干细胞在复合水凝胶支架中的增殖能力。将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中并进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色及茜素红染色观察矿化结节的形成情况,采用RT-PCR检测成牙相关因子(牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白)和成骨相关因子(骨钙素、Runt相关转录因子2)的基因表达。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,前7 d的牙髓干细胞增殖能力明显升高,第10天时速度减缓;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性及矿化结节生成强于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05);③RT-PCR结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞中牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的基因表达量明显高于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05),且14 d基因表达量明显高于7 d(P<0.05)。结果表明,培养在1∶2 Gel-MA/TDM复合水凝胶支架上的牙髓干细胞表现出较好的增殖能力,能够强化牙髓干细胞的成骨、成牙本质分化能力。

淫羊藿苷对骨折大鼠骨髓基质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 探究淫羊藿苷对骨折大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖、成骨分化的影响及可能机制。方法 选取SPF级SD大鼠5只,8周龄,雌雄不限,体重(290±20)g。麻醉大鼠,于右膝髌骨内侧做一切口,暴露股骨髁间凹,在髁内钻孔后,将克氏针插入胫骨髓腔,钢锯横行截断股骨,形成横行骨折,缝合。骨折后2 d,麻醉后断颈处死,剥离股骨,体外分离BMSCs。取第三代BMSCs分为对照组(不做特殊处理),低、中、高剂量组(加入终浓度为1、10、100μmol/L的淫羊藿苷溶液)。检测各组BMSCs增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节面积、Janus激酶2(JAK2)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、p-STAT5表达情况。结果 与对照组比较,低、中、高剂量组光密度(OD)值、ALP活性、矿化结节面积占比均升高,JAK2、p-STAT5/STAT5均降低(P<0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组OD值、ALP活性、矿化结节面积占比均升高,JAK2、p-STAT5/STAT5均降低(P<0.05);与中剂量组比较,高剂量组OD值、ALP活性、矿化结节面积占比升高,JAK2、p-STAT5/STAT5均降低(P<0.05)。结论 淫羊藿苷可能通过抑制JAK2/STAT5通路促进骨折创伤大鼠BMSCs增殖及成骨向分化。

YAP介导的能量代谢参与基质刚度调控的间充质干细胞成骨向分化

目的细胞外基质刚度等微环境生物物理因素可调节干细胞的分化,而能量代谢对于干细胞谱系选择至关重要。本研究旨在探究细胞外基质刚度如何调节能量代谢来决定间充质干细胞的命运。方法采用不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶培养间充质干细胞,通过能量代谢分析,转录组测序和Western blotting等方法,分析细胞代谢活性及相关基因和蛋白的表达;使用超分辨成像,活细胞成像,透射电镜成像和图像三维重构等方法分析线粒体形态和细胞骨架等的变化。结果与软基底相比,硬基底显著促进间充质干细胞的糖酵解、氧化磷酸化功能,并增强抗氧化能力。硬基底通过增加线粒体融合蛋白1和2的表达以及抑制动力蛋白相关蛋白1的活性来促进线粒体融合,从而促进成骨。力敏感蛋白YAP通过影响糖酵解、谷氨酰胺代谢、线粒体动力学和线粒体生物合成,进而调节刚度介导的成骨分化。此外,糖酵解反过来通过细胞骨架张力介导的细胞核形变来影响YAP活性。结论能量代谢可响应细胞外基质的刚度,并通过YAP将力学信号和能量代谢连接起来,促进间充质干细胞的成骨分化。这为力学调控干细胞命运提供了新的见解,并为骨组织工程支架的设计提供了重要的依据。

仙茅苷对大鼠骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究仙茅苷对体外培养的大鼠骨髓基质细胞的增殖及成骨分化的影响。方法:将仙茅苷(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL,200μg/mL)作用于体外培养的大鼠骨髓基质细胞,CCK-8法检测仙茅苷对细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法进行ALP的表达情况的检测。结果:各浓度仙茅苷组均能促进大鼠骨髓基质细胞的增殖和碱性磷酸酶的表达(P<0.05),且在浓度为100μg/mL时作用最为显著。结论:仙茅苷对骨髓基质细胞的增殖有促进作用并能促进其成骨分化。

西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响

目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。

淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞成骨性分化的影响

目的研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性。方法将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L 5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖情况。在成骨性诱导培养条件下,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组间在碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等方面的差异,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR分析成骨性分化的标志蛋白和细胞因子的基因表达差异。结果淫羊藿苷无促进细胞增殖活性,但10-5mol/L及更高浓度抑制细胞增殖。10-5mol/L淫羊藿苷强烈促进原代培养rBMSCs的成骨性分化,表现在加药组的CFU-FALP数量、胞内ALP活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等在培养不同阶段均高于或显著高于对照组,包括骨涎蛋白、骨桥素、类胰岛素-I和BMP2等在内的多种标志蛋白和细胞因子基因表达水平也显著提高。结论淫羊藿苷强烈促进骨髓基质干细胞的成骨性分化,表明其具有促进骨形成生理活性。

辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响

目的从细胞和基因水平探讨辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响。方法18月龄雄性SD大鼠的骨髓基质干细胞进行成骨和成脂诱导培养,培养介质中加入辛伐他汀（10^-6、10^-7、10^-8mol/L和10^-9mol/L）,同时设溶剂对照组。成骨检测：碱性磷酸酶（ALP）染色和定量,茜素红矿化染色和定量,ALP和骨钙素（OC）基因分析;成脂检测：油红脂肪细胞染色和定量,脂蛋白脂酶（LPL）和过氧化物酶增殖活化受体（PPARγ2）基因分析。结果在含有低剂量地塞米松的成骨诱导条件下,辛伐他汀随浓度增加促进了细胞基质的矿化,增强了ALP的活性及染色,提高了ALP和OC的基因表达（若无地塞米松,辛伐他汀则无法单独诱导成骨,此结果未展示）;同时,辛伐他汀随浓度增加减弱了脂肪细胞的油红染色,抑制了LPL和PPARγ2的基因表达。显著性差异皆发生于10^-6mol/L和10^-7mol/L辛伐他汀组。结论辛伐他汀随浓度增加抑制了老年骨髓基质干细胞的成脂分化,并中等强度地促进了老年骨髓基质干细胞的成骨分化。这表明辛伐他汀具有促进骨合成代谢的作用,可以用于治疗常见的骨代谢疾病,如增龄性的骨质疏松症。

不同浓度淫羊藿含药血清干预骨髓基质干细胞的成脂分化

背景:如何抑制骨髓基质干细胞成脂分化,促进其成骨分化将是防治骨质疏松的新途径之一。目的:观察不同浓度淫羊藿含药血清对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成脂分化的干预作用。方法:全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,12只SPF级SD雌性大鼠按体表面积的方法给予淫羊藿水提液,药物以蒸馏水定容至所需浓度,相当于临床剂量的20倍、10倍、5倍灌胃,连续灌胃7d后眼眶取血,观察各组干预后7d成脂分化情况。结果与结论:中药低、中剂量含药血清组的成脂率低于空白组(P<0.01、0.05),说明中药淫羊藿含药血清发挥了抑制骨质疏松骨髓基质干细胞向脂肪细胞分化的作用。中药各剂量组的组间比较差异无显著性意义(P>0.05),但3组成脂率数值方面以中剂量组最佳。

富血小板血浆诱导兔骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化

背景:对于骨髓基质干细胞向成骨细胞的定向诱导分化,目前大多存在诱导物价格昂贵、制备困难或细胞培养周期长、成骨能力低等缺点,近年研究发现浓缩血小板中存在的生长因子有诱导骨再生的作用。目的:观察富血小板血浆对体外培养兔骨髓基质干细胞的增殖和成骨细胞分化作用。方法:从8只兔双侧股骨大转子抽取骨髓,体外分离培养兔骨髓基质干细胞,传至第3代分为两组,实验组用含1%富血小板血浆的DMEM进行干预,对照组加入普通DMEM条件培养液。结果与结论:倒置显微镜下,原代培养细胞24～36h后开始贴壁,10～12d细胞融合成单层。实验组细胞培养第2天已贴壁,第6天细胞大部分融合;对照组细胞形态学变化较实验组晚出现1～3d。培养第2,6,10,14天,碱性磷酸酶活性测定和茜素红钙结节染色结果显示,体外培养的兔成骨细胞生长良好,生化指标稳定,表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性,证实富血小板血浆能促进体外培养的兔骨髓基质干细胞增殖,并能促使其向成骨细胞分化。

龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制

目的观察龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用并探讨其机制。方法全骨髓贴壁法分离BMSCs,培养至F3代。MTT法检测龟鹿二仙胶含药血清增殖作用并确定最佳浓度;F3细胞分为10%FBS组、10%KB组、10%GLEXJ组和Classical组,检测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)比活性,茜素红染色方法观察对BMSCs成骨分化的作用,RT-PCR方法和Western blot检测Fzd-2、Axin-2基因和蛋白表达的变化。结果 MTT结果显示浓度为10%的龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖;10%GLEXJ组和Classical组ALP比活性高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05);且随着时间的延长,增加更明显(P<0.05或P<0.01),茜素红染色见橘红色钙结节着色;10%GLEXJ组Fzd-2 m RNA和蛋白表达水平显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);10%GLEXJ组Axin-2 m RNA和蛋白表达水平显著低于10%FBS组和10%KB组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖并诱导其向成骨细胞分化,其机制可能与增强Fzd-2表达、抑制Axin-2表达和激活Wnt/β-catenin通路密切相关。

阿魏酸对骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的影响实验研究

目的探讨阿魏酸对骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的影响。方法通过大鼠骨髓基质干细胞(BM-SCs)的成骨诱导与培养进行分组实验,实验分4组:A组(对照组);B组(成骨诱导组);C组(阿魏酸组);D组(联合培养组,阿魏酸联合成骨诱导剂),观察对比分析各组细胞特征、细胞计数、BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞内骨钙素含量测定。结果D组ALP活性最强和细胞内骨钙素含量测定最高,与A组、B组和C组对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿魏酸联合成骨诱导剂可以有效的促进骨髓基质干细胞的成骨分化与增殖的功能,需要进一步研究阿魏酸的临床应用。

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

成骨细胞与诱导剂对骨髓基质干细胞的增殖与成骨分化的影响

目的探索一种新的骨髓基质干细胞(marrowstromalstemcells,MSCs)增殖与成骨分化的体外诱导培养体系。方法乳大鼠颅骨来源的第3代成骨细胞与诱导剂(1nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸)对大鼠股骨、胫骨来源的MSCs生长的影响。于8块24孔板上培养MSCs,每孔接种5×104个第3代MSCs。按培养成分不同分为4组,每组2块。DMEM培养为对照组;诱导剂培养为诱导剂组;成骨细胞培养为成骨细胞组;联合使用成骨细胞与诱导剂培养为联合诱导组。计数诱导1～8d各组MSCs的数量并绘制细胞生长曲线,检测诱导10d的MSCs的碱性磷酸酶活性,采用RT-PCR检测诱导2周时MSCs骨钙素mRNA的表达水平。结果原代及传代MSCs形态正常。细胞生长曲线示MSCs数量均随时间延长增加。成骨细胞组增殖最快,诱导剂组增殖最慢,5～8d成骨细胞组及诱导剂组细胞数量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。联合诱导组碱性磷酸酶活性为2.01±0.56U与对照组0.68±0.14U、诱导剂组1.27±0.43U及成骨细胞组0.77±0.19U比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组不表达骨钙素mRNA,诱导剂组为0.783±0.094、联合诱导组为0.814±0.071与成骨细胞组0.302±0.026比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合使用成骨细胞和诱导剂诱导MSCs,不影响MSCs的正常增殖而促进MSCs的成骨分化,诱导效果较好,可望成为一种新的骨组织工程种子细胞的体外培养体系。

续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA VI对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响。结果:适宜浓度下的ASA VI能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达。ASA VI能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构。结论:ASA VI促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA VI诱导的成骨分化过程。

辛伐他汀对人骨髓基质干细胞成骨分化功能的促进作用

目的观察辛伐他汀对体外培养的人骨髓基质干细胞(humanBoneMarrowStromalcells,hMSCs)成骨分化功能的影响,探讨其刺激成骨的作用机制。方法体外培养来自于股骨颈骨折患者的骨髓基质干细胞,传代后实验组加入1×10-7molL的辛伐他汀,于不同时间点采用Westernblot检测核转录因子1(CoreBindingFactor1,Cbfa1)的表达,碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase,ALP)试剂盒检测ALP的比活性,及放射免疫法检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)含量。结果辛伐他汀作用后,实验组与对照组比较,实验组Cbfa1蛋白表达水平增高,ALP比活性增高且骨钙素含量增加。结论1×10-7molL辛伐他汀能够促进人骨髓基质细胞成骨分化,此种促进作用可能与辛伐他汀增强其分化过程中相关蛋白的表达有关。

Transwell小室环境下兔成骨样细胞与骨髓基质干细胞的共培养及成骨分化

背景:以往在体外采用地塞米松、生长因子或用成骨样细胞与骨髓间充质干细胞按1∶1混合培养诱导成骨均存在种种局限。目的:观察在 Transwell小室环境下成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养及成骨样细胞定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法:取第 3代乳兔成骨样细胞与第3代兔骨髓基质干细胞接种共培养于Transwell小室内,成骨样细胞接种于培养板底层,骨髓基质干细胞接种于 Transwell膜内膜上作为实验组。以骨髓基质干细胞单独接种于Transwell 小室内,下层为基础培养液作为对照组。结果与结论:实验组共培养骨髓基质干细胞明显向成骨细胞分化,细胞碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P < 0.05)。实验组骨髓基质干细胞茜素红染色强阳性,可见呈红色结节,经PT-PCR扩增后,可见成骨启动基因核心结合因子α1的表达;对照组未见矿化结节。说明应用Transwell小室可实现成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养,并能定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。

不同幅度持续张应力干预下骨髓基质干细胞的成骨分化

背景:研究证实力学刺激是影响骨改建的重要因素,可促进骨髓基质干细胞骨向分化;但不同幅度力学刺激对骨髓基质干细胞分化的影响尚不明确。目的:观察持续张应力对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响。方法:全血贴壁培养法获取大鼠骨髓基质干细胞。采用Flexercell-4000细胞体外应力加载系统对骨髓基质干细胞施加5%,10%,15%幅度的持续张应力,对照组则不加力培养,频率1Hz,持续时间48h。分别在加力后1,6,12,24,48h检测成骨标记物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素mRNA及成骨特异性转录因子Runx2的mRNA及蛋白表达。结果与结论:5%和10%持续张应力作用下,骨髓基质干细胞的成骨标记基因碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素mRNA的表达较对照组升高(P<0.05),10%张力组升高的时间均较5%张力组早、幅度较高。15%持续在加力6h时可促进骨髓基质干细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05)、随后表达下降,加力48h后上述指标均低于对照组(P<0.05),骨钙素mRNA的表达加力6h后均低于对照组(P<0.05)。5%张力组仅加力24h后骨髓基质干细胞Runx2蛋白表达高于对照组(P<0.05),10%,15%张力组加力6h后Runx2蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结果证实,5%,10%,15%持续张应力均可更有效地促进骨髓基质干细胞的骨向分化,10%持续张力的促进效应更显著。

体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和诱导条件下的成骨能力。方法 通过密度梯度离心和贴壁培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞 ,应用含地塞米松、β 甘油磷酸纳和维生素C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化并检测碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用。结果 原代培养基质干细胞首先形成细胞集落 ,14d时集落间接近融合 ;传代细胞体积变大 ,约 5～ 7d传代一次。诱导条件下 ,细胞碱性磷酸酶活性明显增高 ,并出现了矿化结节。结论 骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增 ,成骨能力肯定 ,可作为骨组织工程的种子细胞。

改良法培养骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的:研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和在诱导条件下的成骨能力。方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测骨钙素的分泌、碱性磷酸酶的活性和细胞矿化作用。结果:原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,12d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7d传代一次。诱导条件下,细胞碱性磷酸酶活性明显增高,并出现了矿化结节。结论:骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增,成骨能力肯定,可作为骨组织工程的种子细胞。

通络生骨胶囊对骨髓基质干细胞成骨和成脂肪双向分化的影响

目的:研究通络生骨胶囊对体外培养糖皮质激素诱导骨髓基质干细胞(MSCs)成骨和成脂肪双向分化的影响。方法:使用地塞米松浓度10-8M诱导MSCs成脂肪和成骨双向分化,以通络生骨胶囊治疗,采用逆转录聚合酶链反应法检测脂蛋白脂酶,骨桥蛋白基因的表达水平,观察MSCs成骨和成脂肪分化的改变。结果:地塞米松10-8M可诱导MSCs成骨和成脂肪双向分化;通络生骨胶囊具有明显的抑制成脂肪分化,促进成骨分化的作用。结论:通络生骨胶囊治疗激素性股骨头坏死药效机制,可能是通过对MSCs成脂肪和成骨分化调控的影响而产生作用。