Apelin/APJ在人支气管上皮细胞炎症反应中的作用及地胆头对其影响的研究

目的:探讨Apelin/APJ系统在急性肺损伤(ALI)细胞模型的作用,研究中药地胆头(草)对支气管上皮细胞Apelin/APJ系统及炎症介质的影响。方法:依据对人支气管上皮细胞(16HBE)施加条件不同(n=8),分为正常对照组(阴性对照组),模型组(LPS组),阳性对照组(LPS+Apelin-13组),低、中、高地胆头组[LPS+ESE(20μg/ml)组、LPS+ESE(40μg/ml)组、LPS+ESE(80μg/ml)组]。激光共聚焦扫描显微镜法检测16HBE细胞及炎症模型Apelin/APJ表达与定位;CCK8法检测地胆头对LPS诱导的细胞损伤的影响;ELISA法测定各组支气管上皮细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平;RT-PCR及Western blot法检测16HBE中Apelin/APJ的转录及表达。结果:Apelin、APJ均在16HBE细胞膜上表达;10μg/ml LPS干预后Apelin/APJ细胞膜表达明显增多(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α细胞因子水平明显升高(P<0.05),Apelin-13+LPS组中16HBE的Apelin/APJ表达上调,支气管上皮细胞炎症反应减轻(P<0.05),地胆头预处理可明显提高Apelin/APJ表达,抑制LPS诱导的炎症细胞因子的产生(P<0.05)。结论:Apelin/APJ系统在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)过程中被激活,对抗炎症反应。地胆头通过上调16HBE细胞Apelin/APJ系统,减轻炎症反应,从而发挥抗炎作用。

参苏饮含药血清诱导炎症人支气管上皮细胞hBD-2mRNA表达中NFκB所发挥作用的实验研究

目的:探讨NFκB在参苏饮诱导炎症16HBE表达h BD-2mRNA中的作用。方法:选择雄性SD大鼠,灌胃给予参苏饮及其拆方药液,心脏采血制备含药血清;传代培养人支气管上皮细胞(16HBE);LPS(1 mg/L)刺激16HBE后不同时间点(3 h、6 h、12 h、24 h)测定细胞增殖活性及培养上清液中TNF-α、IL-8含量,建立16HBE炎症模型;给药前用PDTC预处理30 min,采用RT-PCR法检测给药后不同时间点(0.5 h、1 h、3 h、5 h、8 h)细胞h BD-2mRNA的表达情况。结果:PDTC阻断NFκB后,与模型组比较,全方组、益气解表组h BD-2mRNA相对表达量仅在1 h显著性升高(P<0.05);其余均无统计学差异(P>0.05)。结论:PDTC阻断NFκB后,参苏饮诱导炎症16HBE表达h BD-2mRNA明显受抑,表明参苏饮上调h BD-2mRNA表达需要NFκB发挥作用。

参苏饮在促进炎症人支气管上皮细胞表达β-防御素2时对NF-κB活性的影响

目的:观察参苏饮在炎症人支气管上皮细胞(16HBE)表达β-防御素2(h BD-2)过程中对NF-κB活性的影响。方法:选择SD雄性大鼠,灌胃给药参苏饮及其拆方,心脏采血制备含药血清;传代培养人支气管上皮细胞(16HBE);造模LPS(1 mg/L)刺激16HBE后不同时间点(3 h、6h、12 h、24 h)测定细胞增殖活性及培养上清液中TNF-α、IL-8含量,建立16HBE炎症模型。滤板法检测给药后不同时间点(0.5 h、1 h、3 h、5 h、8 h)细胞NFk B的激活情况。结果:与模型组比较,全方组、益气解表组、止咳化痰组NF-κB蛋白活性在1 h、3 h、5 h、8 h显著性升高(P<0.05)。结论:参苏饮能促进NF-κB蛋白的活化,且全方组的效应优于拆方组,这可能与增强h BD-2的转录启动有关。

参苏饮含药血清对炎症人支气管上皮细胞表达hBD-2、TLR4、NFκBp65mRNA的实验研究

目的探讨参苏饮含药血清对炎症人支气管上皮细胞(16HBE)表达hBD-2、TLR4、NFκBp65mRNA的影响。方法选择雄性SD大鼠,灌胃给予参苏饮及其拆方药液,心脏采血制备含药血清;传代培养人支气管上皮细胞(16HBE);LPS(1mg/L)刺激16HBE后不同时间点(3,6,12,24h)测定细胞增殖活性及培养上清液中TNF-α、IL-8含量,建立16HBE炎症模型;采用RT-PCR法检测给药后不同时间点(0.5,1,3,5,8h)细胞hBD-2mRNA、TLR4 mRNA、NFκBp65mRNA的表达情况。结果与空白对照组比较,模型组的hBD-2mRNA相对表达量在1,3,5h显著性升高(P<0.05),且在3h达峰值;与模型组比较:全方组及益气解表组的h BD-2mRNA相对表达量在1,3,5h均显著性升高(P<0.05),且在3h达峰值;止咳化痰组的hBD-2mRNA相对表达量仅在1h、5h显著性升高(P<0.05),且全方组较益气解表组和止咳化痰组升高明显;与空白对照组比较,模型组的TLR4mRNA相对表达量在3h后显著性升高(P<0.05);与模型组比较:全方组、益气解表组的TLR4mRNA相对表达量在3h后显著性升高(P<0.05);止咳化痰组的TLR4mRNA相对表达量在5h后显著性升高(P<0.05),且全方组较益气解表组和止咳化痰组升高明显;与空白对照组比较,模型组的NFκBp65mRNA相对表达量在1h后显著性升高(P<0.05);与模型组比较,全方组、益气解表组、止咳化痰组的NFκBp65mRNA相对表达量在3h、5h显著性升高(P<0.05)。结论参苏饮能在不同时间点不同程度的上调炎症16HBE细胞表达TLR4 mRNA、NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA,且全方组的效应优于拆方组。表明参苏饮能促进hBD-2表达与TLR4-NFκB通路有很大的相关性。

参苏饮对炎症人支气管上皮细胞表达β-防御素2的作用研究

目的:观察参苏饮对炎症人支气管上皮细胞(16HBE)表达β-防御素2(h BD-2)的影响。方法:将40只SPF级SD雄性大鼠灌胃给药参苏饮及其拆方,心脏采血制备含药血清,传代培养人支气管上皮细胞(16HBE),利用1mg/L LPS刺激12h建立体外16HBE细胞炎症模型后分为5组,即空白对照组、模型组、参苏饮全方组、益气解表组和止咳化痰组。Western法检测给药3h、8h后各组胞浆蛋白h BD-2的表达情况。结果:与空白对照组比较,模型组h BD-2蛋白含量在给药3h显著升高(P<0.05),而在给药8h两组比较差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,参苏饮全方组、益气解表组、止咳化痰组在给药3h、8h均能显著性上调h BD-2蛋白含量(P<0.05)。结论:参苏饮能够促进炎症人支气管上皮细胞表达h BD-2蛋白,提示参苏饮发挥益气固表、抗菌消炎的物质基础可能与h BD-2有关。